Her beskriver vi en musemodel af nethindeiskæmi ved forbigående bilateral fælles halspulsåre okklusion ved hjælp af enkle suturer og en klemme. Denne model kan være nyttig til at forstå de patologiske mekanismer i nethindeiskæmi forårsaget af hjerte-kar-abnormiteter.
Forskellige vaskulære sygdomme såsom diabetisk retinopati, okklusion af nethinde vener eller arterier og okulær iskæmisk syndrom kan føre til nethinde iskæmi. For at undersøge patologiske mekanismer for nethindekemi skal der udvikles relevante eksperimentelle modeller. Anatomisk, en vigtigste retinale blod leverer fartøj er den oftalmiske arterie (OpA) og OpA stammer fra den indre halspulsåren af den fælles halspulsåren (CCA). Således kan afbrydelse af CCA effektivt forårsage nethindeisk iskæmi. Her etablerede vi en musemodel af nethindeiskæmi ved forbigående bilateral fælles halspulsåre okklusion (tBCCAO) for at binde den rigtige CCA med 6-0 silke suturer og for at okkludere venstre CCA forbigående i 2 sekunder via en klemme, og viste, at tBCCAO kunne fremkalde akut nethindeiskæmi, der fører til nethinde dysfunktion. Den nuværende metode reducerer afhængigheden af kirurgiske instrumenter ved kun at bruge kirurgiske nåle og en klemme, forkorter okklusion tid til at minimere uventede dyrs død, som ofte ses i mus modeller af midten cerebral arterie okklusion, og fastholder reproducerbarhed af fælles retinal iskæmiske fund. Modellen kan bruges til at undersøge patofysiologien af iskæmiske retinopatier hos mus og yderligere kan bruges til in vivo lægemiddelscreening.
Nethinden er et neurosensorisk væv til visuel funktion. Da en betydelig mængde ilt er nødvendig for visuel funktion, nethinden er kendt som en af de højeste ilt krævende væv i kroppen1. Nethinden er modtagelig for vaskulære sygdomme som ilt leveres gennem blodkarrene. Forskellige typer af vaskulære sygdomme, såsom diabetisk retinopati og nethinde blodkar (vener eller arterier) okklusion, kan fremkalde nethinde iskæmi. For at undersøge patologiske mekanismer for nethindeiskæmi anses reproducerbare og klinisk relevante eksperimentelle modeller af nethindeisk iskæmi for nødvendig. Middle cerebral arterie okklusion (MCAO) ved indsættelse af en intraluminal filament er den mest almindeligt anvendte metode til udvikling af in vivo gnaver modeller af eksperimentel cerebral iskæmi2,3. På grund af nærheden af den oftalmiske arterie (OpA) til MCA bruges MCAO-modeller også samtidigt til at forstå patofysiologien af nethindeisk iskæmi4,5,6. For at fremkalde cerebral iskæmi sammen med nethinde iskæmi, lange filamenter er typisk indsættes gennem indsnit i den fælles halspulsåren (CCA) eller den eksterne halspulsåren (ECA). Disse metoder er vanskelige at udføre, kræver lang tid at afslutte operationen (over 60 minutter for en mus) og fører til høje variabiliteter i resultaterne efter operationen7. Det er fortsat vigtigt at udvikle en bedre model til at forbedre disse bekymringer.
I denne undersøgelse brugte vi simpelthen kort forbigående bilateral CCA okklusion (tBCCAO) med nåle og en klemme til at fremkalde nethindeisk iskæmi hos mus og analyserede typiske resultater af iskæmiske skader i nethinden. I denne video vil vi give en demonstration af tBCCAO-proceduren.
I undersøgelsen har vi vist, at tBCCAO ved hjælp af enkle suturer og en klemme kan fremkalde nethindeisk iskæmi og ledsagende nethindedysfunktion. Desuden har vi vist, at vores nuværende protokol for udvikling af en musemodel af nethindeisk iskæmi er lettere og hurtigere sammenlignet med andre tidligere protokoller til udvikling af nethindeisk iskæmisk skadesmodel2,3,7.
Anatomisk, venstre og hø…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (18K09424 til Toshihide Kurihara og 20K18393 til Yukihiro Miwa) fra Ministeriet for Uddannelse, Kultur, Sport, Videnskab og Teknologi (MEXT).
Atipamezole hydrochloride | Zenoaq | Antisedan | For anti-anesthesia |
Applied Biosystems 7500 Fast | Applied Biosystems | – | For qPCR |
Butorphanol tartrate | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | For anesthesia |
BZ-II Analyzer | KEYENCE | – | For an image merge |
BALB/cAJc1 | CLEA | – | Mouse strain |
β-Actin (8H10D10) Mouse mAb | CST | 3700 | For western blot |
Clamp Forcep | World Precision Instruments | WPI 500451 | For surgery |
Dumont forceps #5 | Fine Science Tools | 11251-10 | For surgery |
DAPI solution | Dojindo | 340-07971 | For IHC |
Envisu SD-OCT system | Leica | R4310 | For OCT |
FITC-dextran | Merk | FD2000S | For retinal blood perfusion |
Fluorescence microscope | KEYENCE | BZ-9000 | For fluorescence detection |
Gatifloxacin hydrate | Senju Pharmaceutical | Gachifuro | For anti-bacterial infection |
GFAP Monoclonal Antibody (2.2B10) | Thermo | 13-0300 | For IHC |
Heating pad | Marukan | RH-200 | For surgery |
HIF-1α (D1S7W) XP Rabbit mAb | CST | 36169 | For western blot |
ImageQuant LAS 4000 mini | GE Healthcare | – | For chemiluminescence |
Midazolam | Sandoz K.K | SANDOZ | For anesthesia |
Microtome Tissue-Tek TEC 6 | Sakura | – | For sectioning |
Medetomidine | Orion Corporation | Domitor | For anesthesia |
Needle holder | Handaya | HS-2307 | For surgery |
PuREC | MAYO Corporation | – | For ERG |
Scissor | Fine Science Tools | 91460-11 | For surgery |
Sodium hyaluronate | Santen Pharmaceutical | Hyalein | For eye lubrication |
Tropicamide/Penylephrine hydrochloride | Santen Pharmaceutical | Mydrin-P | For mydriasis |
6-0 silk suture | Natsume | E12-60N2 | For surgery |