Здесь мы описываем мышь модель ишемии сетчатки путем переходных двусторонних общих сонной артерии окклюзии с помощью простых швов и зажима. Эта модель может быть полезна для понимания патологических механизмов ишемии сетчатки, вызванной сердечно-сосудистыми аномалиями.
Разнообразные сосудистые заболевания, такие как диабетическая ретинопатия, окклюзия вен сетчатки или артерий и ишемический синдром глаз могут привести к ишемии сетчатки. Для исследования патологических механизмов ишемии сетчатки необходимо разработать соответствующие экспериментальные модели. Анатомически основным кровоснабжающим сосудом сетчатки является офтальмологическая артерия (OpA), а ОпА происходит от внутренней сонной артерии общей сонной артерии (CCA). Таким образом, нарушение CCA может эффективно вызвать ишемию сетчатки. Здесь мы создали мышь модель ишемии сетчатки путем переходных двусторонних общих сонной артерии окклюзии (tBCCAO), чтобы связать правый CCA с 6-0 шелковых швов и окклюзии левой CCA переходный в течение 2 секунд через зажим, и показал, что tBCCAO может вызвать острую ишемию сетчатки, ведущих к дисфункции сетчатки. Нынешний метод снижает зависимость от хирургических инструментов только с помощью хирургических игл и зажима, сокращает время окклюзии, чтобы свести к минимуму неожиданную смерть животных, которая часто наблюдается в мышиных моделях окклюзии средней мозговой артерии, и поддерживает воспроизводимость общих ишемических выводов сетчатки. Модель может быть использована для исследования патофизиологии ишемической ретинопатии у мышей и далее может быть использована для скрининга препарата in vivo.
Сетчатка является нейросенсорной тканью для зрительной функции. Так как значительное количество кислорода необходимо для зрительной функции, сетчатка известна как один из самых высоких кислорода требовательных тканей в организме1. Сетчатка подвержена сосудистым заболеваниям, так как кислород доставляется через кровеносные сосуды. Различные типы сосудистых заболеваний, таких как диабетическая ретинопатия и сетчатки кровеносных сосудов (вен или артерий) окклюзии, может вызвать ишемию сетчатки. Для исследования патологических механизмов ишемии сетчатки необходимы воспроизводимые и клинически значимые экспериментальные модели ишемии сетчатки. Окклюзия средней мозговой артерии (MCAO) путем вставки интралюминальной нити является наиболее часто используемый метод для развития виво-грызунов моделей экспериментальной ишемииголовного мозга 2,3. Из-за близости офтальмологической артерии (OpA) к MCA, модели MCAO также используются одновременно, чтобы понять патофизиологию ишемиисетчатки 4,5,6. Чтобы вызвать ишемию головного мозга наряду с ишемией сетчатки, длинные нити, как правило, вставляются через разрез общей сонной артерии (CCA) или внешней сонной артерии (ECA). Эти методы трудно выполнить, требуют длительного времени, чтобы завершить операцию (более 60 минут для одной мыши), и привести к высокой изменчивости в результатах послеоперации 7. По-прежнему важно разработать более качественую модель для улучшения этих проблем.
В этом исследовании мы просто использовали короткие переходные двусторонние окклюзии CCA (tBCCAO) с иглами и зажимом, чтобы вызвать ишемию сетчатки у мышей и проанализировали типичные результаты ишемических травм сетчатки. В этом видео мы дадим демонстрацию процедуры tBCCAO.
В исследовании мы показали, что tBCCAO, используя простые швы и зажим, может вызвать ишемию сетчатки и сопутствующие дисфункции сетчатки. Кроме того, мы продемонстрировали наш текущий протокол для разработки мышиной модели ишемии сетчатки проще и быстрее по сравнению с другими предыдущим…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана Гранты в помощь научным исследованиям (KAKENHI) (18K09424 Toshihide Kurihara и 20K18393 в Yukihiro Miwa) от Министерства образования, культуры, спорта, науки и техники (MEXT).
Atipamezole hydrochloride | Zenoaq | Antisedan | For anti-anesthesia |
Applied Biosystems 7500 Fast | Applied Biosystems | – | For qPCR |
Butorphanol tartrate | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | For anesthesia |
BZ-II Analyzer | KEYENCE | – | For an image merge |
BALB/cAJc1 | CLEA | – | Mouse strain |
β-Actin (8H10D10) Mouse mAb | CST | 3700 | For western blot |
Clamp Forcep | World Precision Instruments | WPI 500451 | For surgery |
Dumont forceps #5 | Fine Science Tools | 11251-10 | For surgery |
DAPI solution | Dojindo | 340-07971 | For IHC |
Envisu SD-OCT system | Leica | R4310 | For OCT |
FITC-dextran | Merk | FD2000S | For retinal blood perfusion |
Fluorescence microscope | KEYENCE | BZ-9000 | For fluorescence detection |
Gatifloxacin hydrate | Senju Pharmaceutical | Gachifuro | For anti-bacterial infection |
GFAP Monoclonal Antibody (2.2B10) | Thermo | 13-0300 | For IHC |
Heating pad | Marukan | RH-200 | For surgery |
HIF-1α (D1S7W) XP Rabbit mAb | CST | 36169 | For western blot |
ImageQuant LAS 4000 mini | GE Healthcare | – | For chemiluminescence |
Midazolam | Sandoz K.K | SANDOZ | For anesthesia |
Microtome Tissue-Tek TEC 6 | Sakura | – | For sectioning |
Medetomidine | Orion Corporation | Domitor | For anesthesia |
Needle holder | Handaya | HS-2307 | For surgery |
PuREC | MAYO Corporation | – | For ERG |
Scissor | Fine Science Tools | 91460-11 | For surgery |
Sodium hyaluronate | Santen Pharmaceutical | Hyalein | For eye lubrication |
Tropicamide/Penylephrine hydrochloride | Santen Pharmaceutical | Mydrin-P | For mydriasis |
6-0 silk suture | Natsume | E12-60N2 | For surgery |