चूहों में पूरे शरीर लिपिड हैंडलिंग क्षमता का आकलन
Summary
यह कागज चूहों में लिपिड चयापचय का आकलन करने के लिए तीन आसान और सुलभ परख प्रदान करता है।
Abstract
लिपिड मेटाबोलिज्म का आकलन मेटाबोलिक फ़ंक्शन का मूल्यांकन करने का एक आधार है, और इसे वीवो मेटाबोलिज्म अध्ययनों के लिए आवश्यक माना जाता है। लिपिड कई अलग-अलग अणुओं का एक वर्ग है जिसमें उनके संश्लेषण और चयापचय में शामिल कई रास्ते हैं। पोषण और मोटापे के अनुसंधान के लिए लिपिड hemostasis मूल्यांकन के लिए एक प्रारंभिक बिंदु की जरूरत है । यह पेपर तीन आसान और सुलभ तरीकों का वर्णन करता है जिन्हें मास्टर करने के लिए थोड़ी विशेषज्ञता या अभ्यास की आवश्यकता होती है, और चूहों में लिपिड-मेटाबोलिज्म असामान्यताओं के लिए स्क्रीन करने के लिए अधिकांश प्रयोगशालाओं द्वारा अनुकूलित किया जा सकता है। इन तरीकों (1) वाणिज्यिक किट (2) एक मौखिक इंट्रालिपिड सहिष्णुता परीक्षण के माध्यम से आहार लिपिड हैंडलिंग क्षमता के लिए परख का उपयोग कर कई उपवास सीरम लिपिड अणुओं को मापने, और (3) चूहों में एक दवा यौगिक, सीएल ३१६,२४३, के लिए प्रतिक्रिया का मूल्यांकन कर रहे हैं । साथ में, ये विधियां चूहों में लिपिड हैंडलिंग क्षमता का एक उच्च स्तरीय अवलोकन प्रदान करेंगी।
Introduction
कार्बोहाइड्रेट और लिपिड ऊर्जा चयापचय के लिए दो प्रमुख सब्सट्रेट्स हैं। एबररेंट लिपिड चयापचय के परिणामस्वरूप कई मानव रोग होते हैं, जिनमें टाइप II मधुमेह, हृदय रोग, फैटी लिवर रोग और कैंसर शामिल हैं। आहार लिपिड, मुख्य रूप से ट्राइग्लिसराइड्स, आंत के माध्यम से लिम्फेटिक प्रणाली में अवशोषित होते हैं और दिल1के पास कालोमिक्रॉन में शिरोस परिसंचरण में प्रवेश करते हैं। लिपिड खून में लिपोप्रोटीन कणों द्वारा किए जाते हैं, जहां फैटी एसिड मोइयटीज को परिधीय अंगों जैसे मांसपेशियों और एडीपोज ऊतक 2 पर लिपोप्रोटीन लिपेज की कार्रवाई से मुक्त कियाजाताहै। शेष कोलेस्ट्रॉल युक्त अवशेष कणों को यकृत 3 द्वारा साफ कियाजाताहै । चूहों को लिपिड मेटाबोलिज्म का अध्ययन करने के लिए एक शोध मॉडल के रूप में प्रयोगशालाओं में व्यापक रूप से उपयोग किया गया है। व्यापक आनुवंशिक टूलसेट उपलब्ध और अपेक्षाकृत कम प्रजनन चक्र के साथ, वे यह अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली मॉडल हैं कि लिपिड को कैसे अवशोषित किया जाता है, संश्लेषित किया जाता है, और चयापचय किया जाता है।
लिपिड मेटाबोलिज्म की जटिलता के कारण, परिष्कृत लिपिडोमिक्स अध्ययन या आइसोटोपिक ट्रेसर अध्ययन आमतौर पर लिपिड प्रजातियों या लिपिड से संबंधित मेटाबोलिक फ्लक्स और फैट्स4,5के संग्रह की मात्रा निर्धारित करने के लिए उपयोग किए जाते हैं। यह विशेष उपकरण या विशेषज्ञता के बिना शोधकर्ताओं के लिए एक बड़े पैमाने पर चुनौती पैदा करता है । इस पेपर में, हम तीन परख पेश करते हैं जो तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण तकनीकों का उपयोग करने से पहले प्रारंभिक परीक्षणों के रूप में काम कर सकते हैं। वे चूहों के लिए गैर-टर्मिनल प्रक्रियाएं हैं, और इस प्रकार लिपिड-हैंडलिंग क्षमता में संभावित मतभेदों की पहचान करने और प्रभावित प्रक्रियाओं को कम करने के लिए बहुत उपयोगी हैं।
सबसे पहले, उपवास सीरम लिपिड अणुओं को मापने में मदद कर सकते है एक माउस के समग्र लिपिड प्रोफ़ाइल का पता लगाने । चूहों को उपवास किया जाना चाहिए, क्योंकि भोजन के बाद कई लिपिड प्रजातियां बढ़ती हैं, और वृद्धि की सीमा आहार की संरचना से दृढ़ता से प्रभावित होती है। कुल कोलेस्ट्रॉल, ट्राइग्लिसराइड, और गैर-एस्टरिफाइड फैटी एसिड (एनईएफए) सहित कई लिपिड अणुओं को एक वाणिज्यिक किट और एक प्लेट रीडर का उपयोग करके मापा जा सकता है जो अवशोषण पढ़ सकता है।
दूसरा, एक मौखिक इंट्रालिपिड सहिष्णुता परीक्षण अवशोषण और चयापचय के शुद्ध प्रभाव के रूप में लिपिड-हैंडलिंग क्षमता का मूल्यांकन करता है। मौखिक रूप से प्रशासित इंट्रालिपिड ट्राइग्लिसराइड स्तर (1-2 घंटे) को प्रसारित करने में स्पाइक का कारण बनता है, जिसके बाद सीरम ट्राइग्लिसराइड का स्तर बेसल स्तर (4-6 घंटे) पर लौटता है। यह परख कितनी अच्छी तरह एक माउस बहिर्जात लिपिड संभाल कर सकते है के बारे में जानकारी प्रदान करता है । दिल, जिगर, और भूरे रंग के एडीपोज ऊतक ट्राइग्लिसराइड्स के सक्रिय उपभोक्ता हैं, जबकि सफेद एडीपोज ऊतक इसे ऊर्जा भंडार के रूप में संग्रहित करता है। इन कार्यों में बदलाव से परीक्षा परिणामों में अंतर बढ़ेगा।
अंत में, संग्रहीत लिपिड जुटाने के लिए लिपिसिस को बढ़ावा देना वजन घटाने के लिए एक संभावित रणनीति माना जाता है। एडिपोस ऊतक में ए3-एड्रेनेरिक रिसेप्टर सिग्नलिंग पाथवे एडिपोसिट लिपोलिसिस में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, और मानव आनुवंशिकी नेमोटापेसे सहसंबद्ध 3-एड्रेनेरिक रिसेप्टर में एक नुकसान-फ़ंक्शन बहुरूपता Trp64Arg की पहचान की है। सीएल 316,243, एक विशिष्ट और शक्तिशाली 3-एड्रेनेर्गिक रिसेप्टर एगोनिस्ट, एडीपोज़ ऊतक लिपोलिसिस और ग्लिसरोल की रिहाई को उत्तेजित करता है। सीएल 316,243 के लिए माउस की प्रतिक्रिया का मूल्यांकन यौगिक की प्रभावकारिता के विकास, सुधार और समझ के बारे में मूल्यवान जानकारी प्रदान कर सकता है।
सामूहिक रूप से, इन परीक्षणों को चूहों की लिपिड मेटाबोलिक स्थिति में परिवर्तन के लिए प्रारंभिक स्क्रीन के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। वे उपकरणों और अभिकर्मकों की पहुंच के लिए चुने जाते हैं। इन परख से प्राप्त परिणामों के साथ, शोधकर्ता अपने जानवरों की मेटाबोलिक फिटनेस की एक समग्र तस्वीर बना सकते हैं और अधिक परिष्कृत और लक्षित दृष्टिकोणों पर निर्णय ले सकते हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
तीन परख प्रयोगशाला में मजबूती से समारोह वर्णित है, कुछ महत्वपूर्ण विचारों के साथ । उपवास सीरम लिपिड स्तर और मौखिक इंट्रालिपिड सहिष्णुता परीक्षण का निर्धारण करने के लिए रात भर उपवास की आवश्यकता होती ह?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (NIH), अनुदान R00-DK114498, और संयुक्त राज्य अमेरिका के कृषि विभाग (USDA), अनुदान CRIS: 3092-51000-062 वाई जेड के लिए समर्थित है ।
Materials
| 20% Intralipid | Sigma Aldrich | I141 | |
| BD Slip Tip Sterile Syringes 1ml | Shaotong | B07F1KRMYN | |
| CL 316,243 Hydrate | Sigma-Aldrich | C5976 | |
| Curved Feeding Needles (18 Gauge) | Kent Scientific | FNC-18-2-2 | |
| Free Glycerol Reagent | Sigma Aldrich | F6428 | |
| Glycerol Standard Solution | Sigma | G7793 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT A | Fujifilm Wako Diagnostics | 999-34691 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT B | Fujifilm Wako Diagnostics | 991-34891 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT A | Fujifilm Wako Diagnostics | 995-34791 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT B | Fujifilm Wako Diagnostics | 993-35191 | |
| Ketamine | Vedco | 50989-161-06 | |
| Matrix Plus Chemistry Reference Kit | Verichem | 9500 | |
| Micro Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-222-168 | |
| Microhematrocrit Capillary Tube, Not Heparanized | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| NEFA STANDARD SOLUTION | Fujifilm Wako Diagnostics | 276-76491 | |
| Phosphate Buffered Saline | Boston Bioproducts | BM-220 | |
| Thermo Scientific Triglycerides Reagent | Fisher Scientific | TR22421 | |
| Total Cholesterol Reagents | Thermo Scientifi | TR13421 | |
| Xylazine | Henry Schein | 11695-4022-1 |
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