CRISPR/Cas9 Editing of the C. elegans rbm-3.2 Gene using the dpy-10 Co-CRISPR Screening Marker and Assembled Ribonucleoprotein Complexes.

Amy Smith; Mary Bergwell; Ellie Smith; Danita Mathew; Jyoti Iyer

doi:10.3791/62001

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CRISPR/Cas9 Editing del gene C. elegans rbm-3.2 utilizzando il marcatore di screening dpy-10 Co-CRISPR e complessi di ribonucleoproteine assemblati.

JoVE Journal
Genetica

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CRISPR/Cas9 Editing of the C. elegans rbm-3.2 Gene using the dpy-10 Co-CRISPR Screening Marker and Assembled Ribonucleoprotein Complexes.

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CRISPR/Cas9 Editing del gene C. elegans rbm-3.2 utilizzando il marcatore di screening dpy-10 Co-CRISPR e complessi di ribonucleoproteine assemblati.

DOI:

10.3791/62001-v

•

07:46 min

•

December 11, 2020

•

Amy Smith, Mary Bergwell*¹, Ellie Smith*¹, Danita Mathew*¹, Jyoti Iyer

¹Department of Chemistry and Biochemistry,The University of Tulsa

Capitoli

00:04Introduction
00:53C. elegans Gonad Preparation and Microinjection
01:56Injected Worm Recovery and Transfer
02:37PickingC. elegans for Screening
03:17Single Worm Lysis and PCR
04:22Restriction Digestion and Agarose Gel Electrophoresis
05:08Identification of Positively Edited and Homozygous Edited Worms
06:01Results: Representative C. elegans rbm-3.2 Gene Editing and Screening
07:10Conclusion

Summary

Traduzione automatica

L'obiettivo di questo protocollo è quello di consentire l'editing CRISPR/Cas9 senza soluzione di continuità del genoma di C. elegans utilizzando complessi di ribonucleoproteine assemblati e il marcatore co-CRISPR dpy-10 per lo screening. Questo protocollo può essere utilizzato per apportare una varietà di modificazioni genetiche in C. elegans tra cui inserzioni, delezioni, sostituzioni geniche e sostituzioni codone.

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CRISPR/Cas9 Editing del gene C. elegans rbm-3.2 utilizzando il marcatore di screening dpy-10 Co-CRISPR e complessi di ribonucleoproteine assemblati.

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