Criação de dois aneurismas saculares digeridos por elastase com hemodinâmicas diferentes em um coelho
Summary
Este protocolo descreve as etapas para a criação de um modelo de coelho com dois aneurismas digeridos por elastase com diferentes hemodinâmicas (constelação de coto e bifurcação). Isso permite o teste de novos dispositivos endovasculares em aneurismas com diferentes condições angioarquiteturais e hemodinâmicas dentro de um único animal.
Abstract
Modelos animais pré-clínicos com características hemodinâmicas, morfológicas e histológicas próximas aos aneurismas intracranianos humanos desempenham um papel fundamental na compreensão dos processos fisiopatológicos e no desenvolvimento e teste de novas estratégias terapêuticas. Este estudo tem como objetivo descrever um novo modelo de aneurisma de coelho que permite a criação de dois aneurismas saculares digeridos por elastase com diferentes condições hemodinâmicas dentro de um mesmo animal.
Cinco fêmeas de coelhos brancos neozelandeses com peso médio de 4,0 (± 0,3) kg e idade média de 25 (±5) semanas foram submetidas à criação de coto microcirúrgico e aneurisma de bifurcação. Um aneurisma (coto) foi criado pela exposição da artéria carótida comum direita (CCA) em sua origem no tronco braquiocefálico. Um clipe temporário foi aplicado na origem do CCA e outro, 2 cm acima. Este segmento foi tratado com uma injeção local de 100 U de elastase por 20 min. Um segundo aneurisma (bifurcação) foi criado pela sutura de uma bolsa arterial tratada com elastase na anastomose de ponta a ponta da CCA direita para a CCA esquerda. A patência foi controlada por angiografia por fluorescência imediatamente após a criação.
A duração média da cirurgia foi de 221 min. A criação de dois aneurismas no mesmo animal foi bem sucedida em todos os coelhos sem complicações. Todos os aneurismas estavam patenteados imediatamente após a cirurgia, exceto um aneurisma de bifurcação, que mostrou uma reação tecidual extrema devido à incubação de elastase e uma trombose intraluminal imediata. Não foi observada mortalidade durante a cirurgia e até um mês de seguimento. A morbidade foi limitada a uma síndrome vestibular transitória (um coelho), que se recuperou espontaneamente em um dia.
Demonstrada aqui, pela primeira vez, está a viabilidade da criação de um modelo de coelho de dois aneurismas com características hemodinâmicas de coto e bifurcação e condições de parede altamente degeneradas. Este modelo permite o estudo do curso natural e potenciais estratégias de tratamento com base na biologia do aneurisma sob diferentes condições de fluxo.
Introduction
O aneurisma intracraniano é uma condição grave, com taxa de mortalidade após ruptura de 50% e incapacidade a longo prazo em 10-20% dos pacientes1. A última década tem visto um rápido desenvolvimento de opções de tratamento endovascular, mas, ao mesmo tempo, também uma taxa crescente de recorrência com até 33% de recanalização de aneurisma após enrolamento 2,3. Para melhor compreensão da fisiopatologia subjacente à oclusão e recanalização de aneurismas, bem como para o desenvolvimento e teste de novos dispositivos endovasculares, atualmente há necessidade de modelos pré-clínicos confiáveis cujas características hemodinâmicas, morfológicas e histológicas imitem as dos aneurismas intracranianos humanos 4,5,6 . A partir de hoje, não existe um modelo definido como padrão para ensaios pré-clínicos, e uma grande variedade de espécies e técnicas estão disponíveis para os pesquisadores 7,8.
No entanto, o coelho é uma espécie de particular interesse devido ao tamanho e semelhanças hemodinâmicas entre suas artérias do pescoço e os vasos cerebrais humanos, bem como seus perfis semelhantes de coagulação e trombólise. Vários modelos com aneurismas saculares digeridos por elastase nas artérias carótidas comuns (CCAs) mostraram semelhanças qualitativas e quantitativas com os aneurismas intracranianos humanos em termos de condições de fluxo, características geométricas e características da parede 9,10,11,12. Este estudo tem como objetivo descrever uma técnica para criar um novo modelo de aneurisma de coelho com aneurismas digeridos por elastase de coto e bifurcação em um mesmo animal. As técnicas cirúrgicas são inspiradas nas de Hoh et al.13 e Wanderer et al.14 com pequenas modificações para proporcionar uma boa padronização e reprodutibilidade e garantir baixa mortalidade e morbidade.
Protocol
Representative Results
Discussion
A técnica mais comum para a criação de aneurisma envolve a criação de um aneurisma de coto na origem do CCA direito, seja através de um método aberto ou endovascular. O modelo foi validado para ser um aneurisma estável e não crescente que permanece aberto com o tempo20,21. A segunda técnica possível envolve a criação microcirúrgica de um aneurisma de bifurcação arterial, por anastomose da CCA direita à esquerda e sutura de uma bolsa de aneurisma …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores agradecem ao Prof. Hans Rudolf Widmer, ao Dr. Luca Remonda e ao Prof. Javier Fandino pelo seu apoio científico e contribuição técnica para este trabalho. Um agradecimento especial a Olgica Beslac por seus conselhos durante os procedimentos e Kay Nettelbeck por sua assistência. Além disso, agradecemos a Daniela Casoni DVM, PhD e medic. vet. Luisana Garcia, PD Dra. Alessandra Bergadano e Dra. Carlotta Detotto por seu apoio veterinário dedicado.
Materials
| 4-0 resorbable suture | Ethicon Inc., USA | VCP292ZH | |
| 4-0 resorbable suture | Ethicon Inc., USA | VCP304H | |
| 6-0 non absorbable suture | B. Braun, Germany | C0766070 | |
| 9-0 non absorbable suture | B. Braun, Germany | G1111140 | |
| Adrenaline | Amino AG | 1445419 | any generic |
| Amiodarone | Helvepharm AG | 5078567 | any generic |
| Anesthesia machine | Dräger | any other | |
| Aspirin | Sanofi-Aventis (Suisse) SA | 622693 | any generic |
| Atropine | Labatec Pharma SA | 6577083 | any generic |
| Bandpass filter blue | Thorlabs | FD1B | any other |
| Bandpass filter green | Thorlabs | FGV9 | any other |
| Biemer vessel clip (2x) | B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland | FD560R | any other |
| Bipolar forceps | any other | ||
| Bispectral index (neonatal) | any other | ||
| Blood pressure cuff (neonatal) | any other | ||
| Bycilces spotlight | any other | ||
| Clamoxyl | GlaxoSmithKline AG | 758808 | any generic |
| Dexmedetomidine | Ever Pharma | 136740-1 | any generic |
| Elastase | Sigma Aldrich | E7885 | |
| Electrocardiogram electrodes | |||
| Ephedrine | Amino AG | 1435734 | |
| Esmolol | OrPha Swiss GmbH | 3284044 | |
| Fentanyl (intravenous use) | Janssen-Cilag AG | 98683 | |
| Fentanyl (transdermal) | Mepha Pharma AG | 4008286 | |
| Fluoresceine | Curatis AG | 5030376 | |
| Fragmin | Pfizer PFE Switzerland GmbH | 1906725 | |
| Heating pad or heating forced-air warming system | |||
| Isotonic sodium chloride solution (0.9%) | Fresenius KABI | 336769 | |
| Ketamine | Pfizer PFE Switzerland GmbH | 342261 | |
| lid retractor | Approach | ||
| Lidocaine | Streuli Pharma AG | 747466 | |
| Longuettes | |||
| Metacam | Boehringer Ingelheim | P7626406 | Medication |
| Methadone | Streuli Pharma AG | 1084546 | Sedaton |
| Micro-forceps curved | Ulrich Swiss, Switzerland | U52-015-15 | |
| Micro-forceps straight 2x | Ulrich Swiss, Switzerland | U52-010-15 | |
| Microscissors | Ulrich Swiss , Switzerland | U52-327-15 | |
| Midazolam | Accord Healthcare AG | 7752484 | |
| Needle 23 G | arteriotomy | ||
| Needle holder | |||
| O2-Face mask | |||
| Operation microscope | Wild Heerbrugg | ||
| Papaverin | Bichsel | topical application | |
| Povidone iodine | Mundipharma Medical Company | any generic | |
| Prilocaine-lidocaine creme | Emla | ||
| Propofol | B. Braun Medical AG, Switzerland | General anesthesia | |
| Pulse oxymeter | |||
| Rectal temperature probe (neonatal) | |||
| Ringer Lactate | Bioren Sintetica SA | Infusion | |
| Ropivacain | Aspen Pharma Schweiz GmbH | 1882249 | Local anesthesia |
| Scalpell | Swann-Morton | 210 | |
| Small animal shaver | |||
| Soft tissue forceps | |||
| Soft tissue spreader | |||
| Stainless steel sponge bowls | |||
| Sterile micro swabs | |||
| Stethoscope | |||
| Surgery drape | |||
| Surgical scissors | |||
| Syringes 1 mL, 2 mL, and 5 mL | |||
| Tris-Buffer | Sigma Aldrich | 93302 | Elastase solution |
| Vascular clip applicator | B. Braun, Germany | FT495T | |
| Vein and arterial catheter 22 G | |||
| vessel loop | Approach | ||
| video camera or smartphone | |||
| Vitarubin | Streuli Pharma AG | 6847559 | |
| Yasargil titan standard clip (2x) | B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland | FT242T |
Riferimenti
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