Qui presentiamo procedure chirurgiche raffinate sull'esecuzione con successo del trapianto intraportale di isole, una procedura chirurgica clinicamente rilevante ma tecnicamente impegnativa, nei topi.
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Articolo metodologico
Ridurre al minimo il sanguinamento della vena porta post-infusione durante il trapianto di isole intraepatiche nei topi
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Sebbene il fegato sia attualmente accettato come sito di trapianto primario per le isole umane in contesti clinici, le isole vengono trapiantate sotto la capsula renale nella maggior parte degli studi di trapianto di isole precliniche di roditori. Questo modello è comunemente usato perché il trapianto di isole intraepatiche murine è tecnicamente impegnativo e un'alta percentuale di topi potrebbe morire per complicazioni chirurgiche, in particolare sanguinamento dal sito di iniezione post-trapianto. In questo studio, vengono dimostrate due procedure che possono ridurre al minimo l'incidenza di sanguinamento della vena porta post-infusione. Il primo metodo applica una spugna di gelatina emostatica assorbibile al sito di iniezione, e il secondo metodo prevede la penetrazione dell'ago per iniezione dell'isolotto attraverso il tessuto adiposo prima e poi nella vena porta utilizzando il tessuto adiposo come barriera fisica per fermare il sanguinamento. Entrambi i metodi potrebbero prevenire efficacemente la morte del topo indotta dal sanguinamento. Sono state presentate l'intera sezione epatica che mostra la distribuzione delle isole e l'evidenza di trombosi delle isole post-trapianto, una caratteristica tipica per il trapianto di isole intraepatiche. Questi protocolli migliorati perfezionano le procedure di trapianto intraepatico di isole e possono aiutare i laboratori a impostare la procedura per studiare la sopravvivenza e la funzione delle isole in contesti pre-clinici.
Introduzione
Il trapianto intraportale di isole (IIT) attraverso la vena porta è il metodo più comunemente usato per il trapianto di isole umane in contesti clinici. Il modello IIT murino offre una grande opportunità per studiare il trapianto di isole e testare approcci interventistici promettenti che possono migliorare l'efficacia del trapianto di isole1. IIT è stato descritto per la prima volta nel 1970 e utilizzato da diversi gruppi1,2,3,4,5. Ha riacquistato popolarità dopo la svolta nel trapi....
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Protocollo
Tutte le procedure sono state condotte con l'approvazione dei comitati istituzionali per la cura e l'uso degli animali presso la Medical University of South Carolina e il Ralph H Johnson Medical Center di Charleston.
1. Induzione del diabete con streptozotocina (STZ)
- Preparazione dei topi riceventi:
- Pesare tutti i topi individualmente.
- Controllare i livelli di glucosio nel sangue da un campione di sangue della vena della coda utilizzando un glucometro.
- Determinazione della dose STZ per tre diversi scenari:
- Per i topi con steatosi epatica iniettare una dose di STZ [40 mg/kg/die, ini....
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Risultati
Abbiamo eseguito trapianti di isole singeniche e xenogeniche attraverso la vena porta. La funzione dell'innesto di isole è stata osservata in modo dose-dipendente in entrambi i modelli di trapianto di isole. Nel modello di trapianto di isole singeniche utilizzando topi C57BL/6, il trapianto di 250 isole ha portato a normoglicemia transitoria prima che i topi tornassero all'iperglicemia. I topi che ricevevano 500 isole hanno raggiunto e mantenuto la normoglicemia oltre i 30 giorni dopo il trapianto (F.......
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Discussione
In questo studio, sono state dimostrate due procedure migliorate che possono prevenire il sanguinamento e possono ridurre la mortalità del topo durante l'IIT del topo. Questo studio consente ai ricercatori di visualizzare il modello di trapianto di isole che è unico nello studio della risposta infiammatoria istantanea mediata dal sangue dopo il trapianto. Il modello IIT è un modello distintivo per lo studio della sopravvivenza delle cellule insulari e delle lesioni ischemiche epatiche in risposta al trapianto di
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Dichiarazioni
Tutti gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.
Ringraziamenti
Questo studio è stato supportato dal Department of Veterans Affairs (VA-ORD BLR& D Merit I01BX004536) e dal National Institute of Health concede # 1R01DK105183, DK120394, DK118529, a HW. Vorremmo ringraziarvi mr. Michael Lee e Ms. Lindsay Swaby per l'editing linguistico
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 10% Formalina neutra tamponata v/v | Fisher Scientific 23426796 | ||
| Siringa da 1 mL con ago | AHS | AH01T | |
| Siringa da 20 mL | BD | 301031 | |
| 25G x 5/8" Aghi ipodermici | BD | 305122 | |
| Tamponi per la preparazione dell'alcol, sterili | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Anestesia animale sistema | VetEquip, Inc. | ||
| Buprenorfina cloridrato, iniezione | Par Sterile Products, LLC | NDC 42023-179-05 | |
| Provette da centrifuga, 15 mL | Fisher Scientific | 0553859A | |
| CMRL-1066 | Corning | 15110CV | |
| DMEM | Corning | 10013CV | |
| Etanolo, assoluto (200 proof), grado di biologia molecolare | Fisher Scientific | ||
| Forbici da micro dissezione extra fini 4" dritte e affilate | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5882 | |
| Siero fetale bovino (FBS) | Corning | 35011CV | |
| FreeStyle Glucometro | Abbott | Lite | |
| FreeStyle Strisce reattive per la glicemia | Abbott | Lite | |
| Gelfoam (spugna di gelatina assorbibile, USP) | Pharmacia & Upjohn Company | 34201 | |
| Pinze Graefe 4" punta extra delicata | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5136 | |
| Pad riscaldato | Amazon | B07HMKMBKM | |
| Hegar-Baumgartner Porta aghi 5.25" | Roboz Surgical Instrument Co. | Siringa da insulina RS-7850 | |
| con ago calibro 27 | BD | 879588 | |
| Cuscinetti per la preparazione dello iodio | Fisher Scientific | 19-027048 | |
| Isoflurano | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
| Penicillina/streptomicina (P/S) | HyClone | SV30010 | |
| Sutura in polipropilene 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
| Sutura in polipropilene 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
| Cloruro di sodio, soluzione endovenosa allo 0,9% | VWR | 2B1322Q | |
| Streptozocina (STZ) | Sigma | S0130 | |
| Telo chirurgico, sterile | Med-Vet International | DR1826 | |
| Cassetta per tessuti | Fisher Scientific | 22-272416 |
Riferimenti
- Pellegrini, S., Cantarelli, E., Sordi, V., Nano, R., Piemonti, L. The state of the art of islet transplantation and cell therapy in type 1 diabetes. Acta Diabetology. 53 (5), 683-691 (2016).
- Ballinger, W. F., Lacy, P. E. Transplantation of intact pancreatic islets in rats. Surg....
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Ristampe e permessi
