बेसोफिल सक्रियण परीक्षण प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा सक्रियण मार्करों के माप के माध्यम से एक विशिष्ट उत्तेजना की उपस्थिति में बेसोफिल सक्रियण का पता लगाने के आधार पर आईजीई-मध्यस्थता एलर्जी प्रतिक्रियाओं के मूल्यांकन के लिए एक पूरक इन विट्रो नैदानिक परीक्षण है।
बेसोफिल सक्रियण परीक्षण (बीएटी) एक पूरक इन विट्रो डायग्नोस्टिक टेस्ट है जिसका उपयोग नैदानिक इतिहास, त्वचा परीक्षण (एसटी), और विशिष्ट आईजीई (एसआईजीई) निर्धारण के अलावा भोजन, कीट विष, दवाओं के साथ-साथ पुरानी पित्ती के कुछ रूपों के लिए आईजीई-मध्यस्थता एलर्जी प्रतिक्रियाओं के मूल्यांकन में किया जा सकता है। हालांकि, नैदानिक एल्गोरिदम में इस तकनीक की भूमिका अत्यधिक परिवर्तनशील है और अच्छी तरह से निर्धारित नहीं है।
बीएटी फ्लो साइटोमेट्री द्वारा सक्रियण मार्करों (जैसे सीडी 63, सीडी 203 सी) के माप के माध्यम से एलर्जेन / ड्रग क्रॉस-लिंकिंग आईजीई सक्रियण के लिए बेसोफिल प्रतिक्रिया के निर्धारण पर आधारित है। यह परीक्षण एलर्जी निदान की पुष्टि करने के लिए नियंत्रित चुनौती परीक्षणों से बचने के लिए एक उपयोगी और पूरक उपकरण हो सकता है, खासकर गंभीर जीवन-धमकी प्रतिक्रियाओं का सामना करने वाले विषयों में। सामान्य तौर पर, बीएटी के प्रदर्शन पर विचार किया जाना चाहिए यदि i) एलर्जेन / दवा एसटी में गलत सकारात्मक परिणाम पैदा करती है; एसटी या एसआईजीई निर्धारण के लिए उपयोग करने के लिए कोई एलर्जेन / दवा स्रोत नहीं है; iii) रोगी के इतिहास और एसटी या एसआईजीई निर्धारण के बीच मतभेद है; iv) लक्षण बताते हैं कि एसटी के परिणामस्वरूप प्रणालीगत प्रतिक्रिया हो सकती है; v) अपराधी एलर्जेन/ड्रग की पुष्टि करने के लिए सीसीटी पर विचार करने से पहले। परीक्षण की मुख्य सीमाएं गैर-इष्टतम संवेदनशीलता से संबंधित हैं, विशेष रूप से दवा एलर्जी में, नमूना निष्कर्षण के बाद 24 घंटे से अधिक समय तक परीक्षण करने की आवश्यकता नहीं है, और प्रक्रियाओं, सांद्रता और सेल मार्करों के संदर्भ में प्रयोगशालाओं के बीच मानकीकरण की कमी है।
आईजीई-मध्यस्थता एलर्जी निदान नैदानिक इतिहास, त्वचा परीक्षण (एसटी), सीरम विशिष्ट आईजीई (एसआईजीई) की मात्रा का परिमाणीकरण, और, यदि इसकी आवश्यकता और संकेत दिया जाता है, तो नियंत्रित चुनौती परीक्षण (सीसीटी) 1,2,3,4,5,6 पर आधारित है। हालांकि, नैदानिक इतिहास अविश्वसनीय हो सकता है क्योंकि सटीक जानकारी की कमी हो सकती है, और एसटी और सीसीटी जोखिम मुक्त प्रक्रियाएं नहीं हैं जिन्हें गंभीर जीवन-धमकी देने वाली प्रतिक्रियाओं का सामना करने वाले विषयों में उल्लंघन किया जा सकता है 1,2,3,4,5,6 . इन मुद्दों के साथ-साथ इस तथ्य के साथ कि मान्य और वाणिज्यिक फ्लोरो-एंजाइम इम्यूनोएसे द्वारा एसआईजीई का निर्धारण केवल कुछ एलर्जी और दवाओं के लिए उपलब्ध है, ने बेसोफिल सक्रियण परीक्षण (बीएटी) जैसे अन्य इन विट्रो कार्यात्मक परखों की महत्वपूर्ण भूमिका पर प्रकाश डाला है।
बेसोफिल आईजीई-मध्यस्थता एलर्जी प्रतिक्रियाओं में शामिल प्रमुख प्रभावक कोशिकाएं हैं जो एलर्जी / दवा के संपर्क के बाद सेल की सतह पर उच्च-आत्मीयता रिसेप्टर्स (एफसीआरआई) पर बंधे आसन्न एसआईजीई के क्रॉस-लिंकिंग पर सक्रिय होती हैं। बेसोफिल सक्रियण सेल अपघटन और इंट्रासाइटोप्लाज्मिक स्राव कणिकाओं 7,8,9 में निहित पूर्व-गठित और नए संश्लेषित भड़काऊ मध्यस्थों की रिहाई को ट्रिगर करता है। बीएटी एक इन विट्रो विधि है जो एक उत्तेजना (एलर्जेन या दवा) की उपस्थिति में बेसोफिल सक्रियण की नकल करने की कोशिश करती है और प्रवाह साइटोमेट्री 7,10 द्वारा बेसोफिल सक्रियण मार्करों की अभिव्यक्ति में परिवर्तन निर्धारित करती है। बेसोफिल (आईजीई +, सीसीआर 3 +, सीआरटीएच 2 +, सीडी 203 सी +) की पहचान करने और फ्लोरोक्रोम-लेबल एंटीबॉडी 7,10 के संयोजन का उपयोग करके सेल सक्रियण (मुख्य रूप से सीडी 63 और सीडी 203 सी के अपरेगुलेशन) को मापने के लिए विभिन्न रणनीतियां हैं। सीडी 63, सबसे अच्छा चिकित्सकीय रूप से मान्य सक्रियण मार्कर 11,12,13,14, हिस्टामाइन युक्त स्रावी कणिकाओं पर लंगर डालने वाला एक झिल्ली प्रोटीन है, जो कोशिका सक्रियण और झिल्ली के साथ कणिकाओं के संलयन के बाद, बेसोफिल सतह 15,16,17,18,19,20,21 पर व्यक्त किया जाता है . सीडी 203 सी एक सतह मार्कर है जिसे बेसोफिल पर संवैधानिक रूप से व्यक्त किया जाता है और एफसीआरआई उत्तेजना के बाद अनियमित किया जाता है, जिसने बीएटी 15,22,23,24,25 में विश्वसनीय परिणाम भी दिखाए हैं। इसके अलावा, यह सीडी 6326 के साथ सह-व्यक्त प्रतीत होता है।
पिछले दशकों में, बीएटी ने दवाओं, भोजन, या इनहेलेंट्स जैसे विभिन्न ट्रिगर्स के साथ-साथ क्रोनिक पित्ती के कुछ रूपों में प्रेरित आईजीई-मध्यस्थता एलर्जी प्रतिक्रियाओं के निदान में उपयोगी साबित किया है, जैसा कि नीचे वर्णित है। हालांकि, नैदानिक एल्गोरिदम में इस तकनीक की स्थिति अत्यधिक परिवर्तनशील है और अच्छी तरह से निर्धारित नहीं है।
दवा अतिसंवेदनशीलता
बीएटी चयनित दवाओं और रोगियों के लिए एक पूरक परीक्षण के रूप में उपयोगी साबित हुआ है, विशेष रूप से उन लोगों के लिए जो इस तथ्य के कारण गंभीर प्रतिक्रियाओं का अनुभव करते हैं कि एसटी का नैदानिक मूल्य अधिकांश दवाओं के लिए अच्छी तरह से स्थापित नहीं है, क्योंकि वे सीमित संख्या में दवाओं 27,28,29,30 के लिए मान्य और मानकीकृत हैं। इसके अलावा, एसआईजीई का परिमाणीकरण केवल सीमित संख्या में दवाओं के लिए उपलब्ध है, जिसमें एसटी 27,28,29,30,31,32 की तुलना में कम संवेदनशीलता है। इसलिए, दवा अतिसंवेदनशीलता का निदान आमतौर पर दवा उत्तेजना परीक्षण पर निर्भर करता है, जिसे गंभीर जीवन-धमकी देने वाली प्रतिक्रियाओं का सामना करने वाले विषयों में उल्लंघन किया जा सकताहै।
चुनिंदा रोगियों में बीएटी के उपयोग के लिए आशाजनक परिणाम बताए गए हैं, जो बीटालैक्टम (बीएल) 20,34,35,36,37,38,39, न्यूरोमस्कुलर ब्लॉकिंग एजेंट (एनएमबीए) 19,22,40,41,42, जैसे विभिन्न दवाओं के लिए तत्काल अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं की रिपोर्ट करते हैं। 43,44,45, फ्लोरोक्विनोलोन (एफक्यू) 46,47,48,49, पाइराज़ोलोन 50,51,52, रेडियोकंट्रास्ट मीडिया (आरसीएम) 53,54,55,56, और प्लैटिनम यौगिक 57,58,59 . बीएटी को क्रमशः 51.7-66.9% और 89.2-97.8% के बीच संवेदनशीलता और विशिष्टता की सूचना दी गई है; और सकारात्मक और नकारात्मक पूर्वानुमानमूल्यक्रमक्रमशः 93.4% और 66.3% के बीच वर्णित हैं,क्रमशः 27,31। इसके अलावा, बैट को प्लेटिनम यौगिकों के साथ डिसेन्सिटाइजेशन के दौरान ब्रेकथ्रू प्रतिक्रियाओं के लिए एक पूर्वानुमानित बायोमार्कर के रूप में प्रस्तावित किया गया है, क्योंकि सीडी 203 सी अभिव्यक्ति दवा डिसेन्सिटाइजेशन के दौरान प्रतिकूल प्रतिक्रियाओं के उच्च जोखिम वाले रोगियों में सीडी 63 की तुलना में बढ़जाती है।
यह ध्यान देने योग्य है कि बीएटी केवल दवा अतिसंवेदनशीलता में उपयोगी है जब प्रतिक्रिया में बेसोफिल डीग्रानुलेशन शामिल होता है; इसलिए, यह साइक्लोऑक्सीजिनेज 142 के एंजाइमेटिक निषेध के परिणामस्वरूप प्रतिक्रियाओं में उपयोगी नहीं है।
खाद्य एलर्जी
बीएटी खाद्य एलर्जी के लिए एक संभावित नैदानिक उपकरण के रूप में उभरा है क्योंकि पूरे एलर्जेन अर्क या एकल एलर्जी के लिए सीरम एसआईजीई का निर्धारण अक्सर अस्पष्ट होता है, निदान की पुष्टि करने के लिए मौखिक खाद्य चुनौती की आवश्यकता होती है, जो दवा अतिसंवेदनशीलता के समान, एक महंगी और जोखिममुक्त प्रक्रिया नहीं है। कई अध्ययनों ने गाय के दूध61,62, अंडा61,63, गेहूं 64,65,66,67,68, मूंगफली 63,69,70,71,72, हेज़लनट 73,74,75,76 के साथ प्रासंगिक परिणाम दिखाए हैं , 77, शेलफिश78, आड़ू 79,80,81, सेब21, अजवाइन, और गाजर82,83।
सीरम में एसटी और एसआईजीई की तुलना में खाद्य एलर्जी के निदान में बीएटी का मुख्य अतिरिक्त मूल्य यह है कि यह एक उच्च विशिष्टता और समान संवेदनशीलता दिखाता है। इस प्रकार, बीएटी चिकित्सकीय एलर्जी रोगियों को संवेदनशील, लेकिन सहिष्णु, विषयों से अलग करने के लिए एक उपयोगी उपकरण है, जिनमें उच्च विशिष्टता (75-100%) और संवेदनशीलता (77-98%) 63,69,84 दोनों हैं। संवेदनशीलता और विशिष्टता मूल्य एलर्जेन और अन्य कारकों पर फेनोटाइप (जैसे, मौखिक एलर्जी सिंड्रोम बनाम एनाफिलेक्सिस), आयु और भूगोल से संबंधित संवेदीकरण पैटर्न63,85 पर निर्भर करते हैं।
एकल एलर्जेन घटकों का उपयोग करके बीएटी संभावित रूप से कुछ खाद्य एलर्जी61,80 के लिए नैदानिक सटीकता में सुधार कर सकता है। बीज भंडारण प्रोटीन (जैसे, आरा एच 1, आरा एच 2, आरा एच 3 और मूंगफली से आरा एच 6) 86 का उपयोग करने वाले अध्ययन हैं; लिपिड ट्रांसफर प्रोटीन (उदाहरण के लिए, आड़ू से प्रू पी 3 और मूंगफली से आरा एच 9) 80,86; और बेट वी 1 होमोलॉग (उदाहरण के लिए, मूंगफली से आरा एच 8) 87। अन्य संभावित उपयोगिताएं पराग-खाद्य एलर्जी सिंड्रोम 21,87,88, लाल मांस 89 से एलर्जी, या खाद्य-निर्भर व्यायाम-प्रेरित एनाफिलेक्सिस66 के मामलों में अपराधी एलर्जेन की पहचान से संबंधित हैं।
दिलचस्प बात यह है कि बीएटी एलर्जी प्रतिक्रियाओं की गंभीरता और दहलीज के बारे में जानकारी प्रदान कर सकता है क्योंकि अधिक गंभीर प्रतिक्रियाओं वाले रोगी सक्रिय बेसोफिल का अधिक अनुपात दिखाते हैं, जैसा कि मूंगफली और गाय के दूध-एलर्जी रोगियों के अध्ययन में देखा गयाहै 84,90,91; और एलर्जेन की ट्रेस मात्रा पर प्रतिक्रिया करने वाले रोगी अधिक बेसोफिल संवेदनशीलता 84,90,92 दिखाते हैं। इन आंकड़ों से पता चलता है कि बीएटी उच्च जोखिम वाले एलर्जी रोगियों की पहचान करने के लिए उपयोगी हो सकता है, जिन्हें निकट अनुवर्ती और अधिक गहन शिक्षा की आवश्यकता होतीहै। इसके अलावा, यह बताया गया है कि बीएटी खाद्य चुनौती प्रतिक्रियाओं 70,91,92,94 और प्रतिक्रियाशीलता की सीमा 90,95 की भविष्यवाणी कर सकता है ताकि यह निर्धारित किया जा सके कि भोजन को सुरक्षित रूप से कब पेश किया जा सकता है। हालांकि, ये निष्कर्ष कुछ अध्ययनों में विवादास्पद हैं63,96 और अधिक शोध की आवश्यकता है।
दूसरी ओर, बीएटी का उपयोग समय के साथ प्राकृतिक रूप से या इम्यूनोमॉड्यूलेटरी उपचार के तहत खाद्य एलर्जी के समाधान की निगरानी के लिए किया गया है, जो अब तक केवल मौखिक खाद्य चुनौती द्वारा मूल्यांकन किया गया है, जिसमें संबंधित जोखिम और लागत 84,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106 है। , 107,108। इसके अलावा, इसका उपयोग खाद्य एलर्जी में ओमेलिज़ुमाब के प्रभाव की निगरानी के लिए भी किया गया है क्योंकि ओमेलिज़ुमाब के साथ उपचार के दौरान बेसोफिल सक्रियण कम हो जाता है, लेकिन उपचार109 की समाप्ति के बाद यह बढ़ जाता है।
इनहेलेंट एलर्जी
बीएटी इनहेलेंट एलर्जी में शायद ही कभी फायदेमंद होता है क्योंकि निदान नियमित रूप से एसआईजीई परिमाणीकरण और एसटी द्वारा स्थापित किया जा सकता है। हालांकि, स्थानीय एलर्जी राइनाइटिस (सकारात्मक नाक उत्तेजना परीक्षणों के साथ एसआईजीई और नकारात्मक एसटी के अज्ञात स्तर) केमामलों में, बीएटी ने 50% मामलों में निदान की अनुमति दी है। ब्रोन्कियल उत्तेजना परीक्षणों के लिए बेसोफिल संवेदनशीलता और प्रतिक्रिया के साथ-साथ अस्थमा की गंभीरता और ओमेलिज़ुमाब111,112 के साथ उपचार की प्रभावकारिता के बीच एक सहसंबंध की सूचना दी गई है।
बीएटी का उपयोग घर की धूल के कण और पराग के लिए एलर्जेन इम्यूनोथेरेपी की निगरानी के लिए भी किया गया है, क्योंकि इम्यूनोथेरेपी के दौरान बेसोफिल संवेदनशीलता कम हो जाती है, संभवतः आईजीजी एंटीबॉडी 113,114,115,116,117 को अवरुद्ध करने के हस्तक्षेप के कारण।
हाइमनोप्टेराजहर एलर्जी
हाइमनोप्टेरा विष एलर्जी का निदान नियमित रूप से एसटी और सीरम एसआईजीई पर आधारित है। बीएटी ने एक उच्च संवेदनशीलता (85-100%) और विशिष्टता (83-100%) दिखाई है और यह उन मामलों में उपयोगी बताया गया है जो अस्पष्ट परिणाम देते हैं या जहर एलर्जी के विचारोत्तेजक नैदानिक इतिहास वाले रोगियों में लेकिन अज्ञात एसआईजीई और नकारात्मक एसटी118,119। हालांकि, बीएटी इन प्रतिक्रियाओं120,121 के लिए गंभीरता का पूर्वानुमान नहीं प्रतीत होता है।
60% तक रोगी ततैया और मधुमक्खी के जहर दोनों के लिए एसआईजीई प्रदर्शित करते हैं, और पर्याप्त इम्यूनोथेरेपी उपचार के लिए प्रमुख एलर्जेन की पहचान महत्वपूर्ण है। इन मामलों में, बीएटी को प्रमुख एलर्जेन119,122,123,124 की पहचान में उपयोगी बताया गया है। यद्यपि मधुमक्खी और ततैया के जहर के प्रमुख एलर्जी के लिए एसआईजीई दोनों जहरों के लिए दोहरी सकारात्मकता वाले रोगियों में बीएटी की उपयोगिता को कम कर सकता है, यह मुख्य रूप से एसआईजीई निर्धारण123 में नकारात्मक परिणामों वाले विषयों में उपयोगी जानकारी प्रदान करता है।
कुछ अध्ययनों से पता चलता है कि बैट विष इम्यूनोथेरेपी के बिल्ड-अप चरण के दौरान साइड इफेक्ट्स के लिए एक पूर्वानुमानित बायोमार्कर के रूप में उपयोगी हो सकता है क्योंकि इस उपचार विकल्प को बेसोफिल संवेदनशीलता को कम करने के लिए बताया गया है। हालांकि, प्रतिक्रियाशीलता कम नहीं होती है और यह बीएटी उपयोगिता आजकल विवादास्पद 13,120,125,126,127,128,129,130 है।
पित्ती और एंजियोएडेमा
क्रोनिक अर्टिकारिया रोगियों के एक उप-समूह में एक ऑटोइम्यून पैथोफिज़ियोलॉजी होती है, जिसके कारण आईजीई ऑटोएंटीबॉडीज ऑटोएलर्जेंस और आईजीजी ऑटोएंटीबॉडीज होते हैं जो मस्तूल सेल की सतह131,132 पर मौजूद एफसीआरआई या आईजीई-एफसीआरआई कॉम्प्लेक्स को लक्षित करते हैं। नैदानिक अभ्यास में, इस प्रकार के क्रोनिक अर्टिकारिया का निदान सकारात्मक ऑटोलॉगस सीरम एसटी पर निर्भर है, जिसमें आकस्मिक संक्रमण का खतरा है। बीएटी को संदिग्ध क्रोनिक पित्ती वाले रोगियों के निदान और निगरानी के लिए इन विट्रो परीक्षण के रूप में प्रस्तावित किया गया है। बेसोफिल की सतह पर सीडी 63 और सीडी 203 सी अभिव्यक्ति दोनों को क्रोनिक अर्टिकारिया रोगियों से सेरा के साथ उत्तेजना के बाद बढ़ने की सूचना मिली है, जो सक्रिय ऑटोएंटीबॉडीज 133,134,135,136,137 का पता लगाते हैं। हाल ही में, यह बताया गया है कि सकारात्मक बीएटी वाले रोगी अक्सर सबसे सक्रिय रोग स्थिति का अनुभव करते हैं, जो पित्ती गतिविधि स्कोर द्वारा मूल्यांकन किया जाता है, और नकारात्मक बीएटी138 वाले लोगों की तुलना में तीसरी पंक्ति के उपचार (साइक्लोस्पोरिन ए या ओमेलिज़ुमैब) के साथ एंटीथिस्टेमाइंस की उच्च खुराक की आवश्यकता होती है।
बीएटी आईजीई-मध्यस्थता एलर्जी प्रतिक्रियाओं के मूल्यांकन के लिए एक पूरक इन विट्रो डायग्नोस्टिक टेस्ट है जो दवाओं, भोजन या इनहेलेंट्स जैसे विभिन्न ट्रिगर्स के साथ-साथ क्रोनिक पित्ती के कुछ रूपों स?…
The authors have nothing to disclose.
हम क्लाउडिया कोराज़ा को उनके अमूल्य अंग्रेजी भाषा समर्थन के लिए धन्यवाद देते हैं। इस काम को MINECO के इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ ‘कार्लोस III’ (ISCIII) द्वारा समर्थित किया गया था (ईआरडीएफ द्वारा वित्त पोषित अनुदान: “उना मनेरा डी हैसर यूरोपा”; अनुदान संख्या पीआई 20/01715; पीआई 18/00095; पीआई 17/01410; पीआई 17/01318; PI17/01237 और RETIC ARADYAL RD16/0006/0001; अंडालूसी क्षेत्रीय स्वास्थ्य मंत्रालय (अनुदान संख्या पीआई-0127-2020, पीआईओ-0176-2018; पीई-0172-2018; पीई-0039-2018; पीसी-0098-2017; पीआई-0075-2017; पीआई-0241-2016)। आईडी एक नैदानिक अन्वेषक (बी-0001-2017) है और एए के पास एक वरिष्ठ पोस्टडॉक्टरल अनुबंध (आरएच-0099-2020) है, दोनों अंडालूसी क्षेत्रीय स्वास्थ्य मंत्रालय द्वारा समर्थित हैं (ईएसएफ द्वारा वित्त पोषित: “अंडालुसिया से मुवे कॉन यूरोपा”)।
5 mL Round Bottom Polystyrene Test Tube, without Cap, Nonsterile | Corning | 352008 | |
APC anti-human CD193 (CCR3) Antibody | BioLegend | 310708 | |
BD FACSCalibur Flow Cytometer | BD Biosciences | ||
Calcium chloride | Sigma-Aldrich | C1016 | |
FITC anti-human CD63 Antibody | BioLegend | 353006 | |
HEPES (1 M) | Thermo-Fisher | 15630106 | |
Lysing Solution 10x concentrated | BD Biosciences | 349202 | |
Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | M8266 | |
N-Formyl-Met-Leu-Phe | Sigma-Aldrich | F3506 | |
PE anti-human CD203c (E-NPP3) Antibody | BioLegend | 324606 | |
Potassium chloride | Sigma-Aldrich | P9541 | |
Purified Mouse Anti-Human IgE | BD Biosciences | 555857 | |
Recombinant Human IL-3 | R&D Systems | 203-IL | |
Sheath Fluid | BD Biosciences | 342003 | |
Sodium chloride | Sigma-Aldrich | S3014 | |
TUBE 9 mL LH Lithium Heparin | Greiner Bio-One | 455084 | |
Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 |