A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Introduction
- 00:44Generation of Baculovirus-infected TIPS Cells
- 03:05Production of AAV Vector
- 05:08Lysis of Cells and Release of AAV
- 06:07Purification of AAV Vector Using Affinity Column Chromatography System
- 08:03Concentration and Diafiltration of AAV Vector Using Tangential Flow Filtration (TFF)
- 08:54Results: Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector Using Baculovirus-Insect Cell Culture System
- 09:48Conclusion
בפרוטוקול זה, וקטור AAV2 מיוצר על ידי פולחן שותף Spodoptera frugiperda (Sf9) תאים חרקים עם baculovirus (BV)-AAV2-חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) או גן טיפולי ותאי Sf9 נגועים BV-AAV2-rep בתרבית השעיה. חלקיקי AAV משתחררים מהתאים באמצעות חומר ניקוי, מובהר, מטוהר על ידי כרומטוגרפיה של עמודת זיקה, ומרוכזים על ידי סינון זרימה משיק.
