Iniezione di cellule di osteosarcoma intratibiale per generare modelli murini di osteosarcoma ortotopico e metastasi polmonari

Junli Chang; Fulai Zhao; Xingyuan Sun; Xiaoping Ma; Wenlan Zhi; Yanping Yang

doi:10.3791/63072

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Articolo metodologico

Iniezione di cellule di osteosarcoma intratibiale per generare modelli murini di osteosarcoma ortotopico e metastasi polmonari

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DOI:

10.3791/63072

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28 ottobre 2021

Junli Chang^*¹^,² , Fulai Zhao^*¹^,² , Xingyuan Sun¹^,² , Xiaoping Ma¹^,² , Wenlan Zhi¹^,² , Yanping Yang¹^,²

¹Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, ²Key Laboratory of theory and therapy of muscles and bones, Ministry of Education

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Il presente protocollo descrive l'iniezione di cellule di osteosarcoma intratibia per generare modelli murini portatori di osteosarcoma ortotopico e lesioni da metastasi polmonari.

Abstract

L'osteosarcoma è il tumore osseo primario più comune nei bambini e negli adolescenti, con i polmoni come sito metastatico più comune. Il tasso di sopravvivenza a cinque anni dei pazienti con osteosarcoma con metastasi polmonari è inferiore al 30%. Pertanto, l'utilizzo di modelli murini che imitano lo sviluppo dell'osteosarcoma negli esseri umani è di grande importanza per comprendere il meccanismo fondamentale della carcinogenesi dell'osteosarcoma e delle metastasi polmonari per sviluppare nuove terapie. Qui, vengono riportate procedure dettagliate per generare l'osteosarcoma primario e i modelli murini di metastasi polmonari tramite iniezione intratibiale di cellule di osteosarcoma. In combinazione con il sistema di bioluminescenza o di imaging live a raggi X, questi modelli murini viventi vengono utilizzati per monitorare e quantificare la crescita e le metastasi dell'osteosarcoma. Per stabilire questo modello, una matrice di membrana basale contenente cellule di osteosarcoma è stata caricata in una siringa a micro-volume e iniettata in una tibia di ciascun topo atimico dopo essere stata anestetizzata. I topi sono stati sacrificati quando l'osteosarcoma primario ha raggiunto il limite di dimensioni nel protocollo approvato dalla IACUC. Le gambe portanti osteosarcoma e i polmoni con lesioni metastasi sono stati separati. Questi modelli sono caratterizzati da un breve periodo di incubazione, rapida crescita, lesioni gravi e sensibilità nel monitoraggio dello sviluppo di lesioni metastatiche primarie e polmonari. Pertanto, questi sono modelli ideali per esplorare le funzioni e i meccanismi di fattori specifici nella carcinogenesi dell'osteosarcoma e nelle metastasi polmonari, nel microambiente tumorale e valutare l'efficacia terapeutica in vivo.

Introduzione

L'osteosarcoma è il tumore osseo primario più comune nei bambini e negli adolescenti ^1,2, che si infiltra principalmente nel tessuto circostante e persino metastatizza ai polmoni quando i pazienti vengono diagnosticati. Le metastasi polmonari sono la sfida principale per la terapia con osteosarcoma e il tasso di sopravvivenza a cinque anni dei pazienti con osteosarcoma con metastasi polmonari rimane basso come 20%-30%^3,4,5. Tuttavia, il tasso di sopravvivenza a cinque anni dell'osteosarcoma primario è stato aumentato ....