गंभीर तीव्र अग्नाशयशोथ के एक माउस मॉडल यहाँ वर्णित है। यहां प्रस्तुत प्रक्रिया बहुत तेज, सरल और सुलभ है, जिससे संभावित रूप से आणविक तंत्र के अध्ययन और एक सुविधाजनक तरीके से तीव्र अग्नाशयशोथ में विभिन्न चिकित्सीय हस्तक्षेपों की अनुमति मिलती है।
तीव्र अग्नाशयशोथ (एपी), विशेष रूप से गंभीर तीव्र अग्नाशयशोथ (एसएपी) का प्रसार, सालाना युवा आयु समूहों में बढ़ रहा है। हालांकि, वर्तमान नैदानिक अभ्यास में प्रभावी उपचार की कमी है। ट्रांसजेनिक और नॉकआउट उपभेदों और उनके छोटे आकार की आसान पहुंच के साथ, जो विवो मूल्यांकन में आवश्यक दवाओं की न्यूनतम खुराक की अनुमति देता है, चूहों में एक अच्छी तरह से स्थापित प्रयोगात्मक मॉडल एपी अनुसंधान के लिए पसंद किया जाता है। इसके अलावा, सोडियम टॉरोकोलेट (टीसी) के माध्यम से प्रेरित एसएपी वर्तमान में सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले और सबसे अच्छी विशेषता वाले मॉडलों में से एक है। इस मॉडल को एपी की प्रक्रिया के दौरान उपन्यास उपचार और संभावित आणविक घटनाओं के लिए जांच की गई है। यहां, हम सोडियम टॉरोकोलेट और एक साधारण घर का बना माइक्रोसिरिंज का उपयोग करके एक एपी माउस मॉडल की पीढ़ी प्रस्तुत करते हैं। इसके अलावा, हम बाद के हिस्टोलॉजी और सीरोलॉजिकल परीक्षण के लिए पद्धति भी प्रदान करते हैं।
तीव्र अग्नाशयशोथ (एपी) अग्न्याशय की एक तीव्र सूजन है जो बाद के डक्टल डिस्टेंशन और अग्न्याशय ऑटोडाइजेशन के साथ मुख्य अग्नाशयी वाहिनी की रुकावट की विशेषता है जो इसके असामान्य रूप से सक्रिय एंजाइमों द्वारा है। इसकी नैदानिक अभिव्यक्तियों में स्थानीय या प्रणालीगत सूजन, पेट में दर्द, और सीरम एमाइलेज 1,2 की ऊंचाई शामिल है। गंभीरता वर्गीकरण 3 के अनुसार, एपी हल्के, मध्यम और गंभीर रूपों में मौजूद हो सकता है, और उनमें से, गंभीर तीव्र अग्नाशयशोथ (एसएपी) 30% से अधिक की उच्च मृत्यु दर के कारण सबसे अधिक संबंधित स्थिति है। संयुक्त राज्य अमेरिका में, एपी अस्पताल में भर्ती होने के सबसे आम कारणों में से एक है, जो 200,000 से अधिक रोगियों को प्रभावित करता है। इसके अलावा, एपी, विशेष रूप से एसएपी, सालाना बढ़ रहा है और युवा आयु समूहों को प्रभावित कर रहा है। हालांकि, वर्तमान नैदानिक अभ्यास 6,7 में प्रभावी उपचार विकल्पों की कमी है। इसलिए, एपी में शामिल आणविक तंत्र का पता लगाना आवश्यक है, जिससे उपचार में सुधार की सुविधा मिलती है।
एपी में शामिल तंत्र का अध्ययन करने और विभिन्न उपचार पद्धतियों की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए अच्छी तरह से स्थापित प्रयोगात्मक पशु मॉडल की आवश्यकता होती है। ट्रांसजेनिक और नॉकआउट उपभेदों और उनके छोटे आकार की आसान पहुंच के साथ, जो विवो मूल्यांकन में आवश्यक दवाओं की खुराक को कम करता है, चूहों को एपी अनुसंधान के लिए पसंद किया जाता है। इसलिए, एपी के कई मॉडल चूहों 8,9 में विकसित किए गए हैं।
caerulein10 के अंतःशिरा प्रशासन के माध्यम से प्रेरित एक हल्के अग्नाशयशोथ चूहे मॉडल से काम करते हुए, Niederau et al. एक ही दवा और इंजेक्शन route11 का उपयोग कर प्रेरित acinar सेल परिगलन के साथ प्रस्तुत एक एसएपी माउस मॉडल विकसित किया। यद्यपि इस मॉडल में noninvasiveness, तेजी से प्रेरण, व्यापक reproducibility, और प्रयोज्यता सहित कई फायदे हैं, प्रमुख नुकसान यह है कि ज्यादातर मामलों में एपी का केवल एक हल्का रूप विकसित किया जाता है, जिससे इसकी नैदानिक प्रासंगिकता सीमित हो जाती है। अल्कोहल को एपी के प्रमुख etiologic कारकों में से एक माना जाता है; हालांकि, Foitzik et al. ने बताया कि यह अग्नाशय की चोट का कारण बनता है जब अन्य कारकों के साथ संयुक्त होता है, जैसे कि एक्सोक्राइन हाइपरस्टिमुलेशन 12। इसके अलावा, हालांकि विभिन्न प्रशासन मार्गों के माध्यम से विकसित शराब-प्रेरित एपी मॉडल, और दवा की खुराक 13,14,15 की सूचना दी गई है, उनका प्रमुख नुकसान उन्हें पुन: उत्पादन करने में कठिनाई है। एल-आर्जिनिन के इंट्रापेरिटोनियल प्रशासन भी चूहों 16 में एपी को प्रेरित कर सकते हैं; हालांकि, इसकी कम नैदानिक प्रासंगिकता इसके आवेदन में बाधा डालती है। टॉरोकोलेट, एक पित्त नमक, पहली बार 1965 में Creutzfeld et al. द्वारा अग्नाशयी वाहिनी infusion17 के माध्यम से मानव एपी जैसी स्थिति को प्रेरित करने के लिए प्रस्तावित किया गया था। यद्यपि pathophysiology18,19 में इसकी नैदानिक प्रासंगिकता के बारे में विवाद मौजूद हैं, टॉरोकोलेट-प्रेरित अग्नाशयशोथ एसएपी के लिए एक अपरिहार्य मॉडल बना हुआ है।
जैसा कि यह मॉडल महसूस करना आसान है और चूहों में भी प्रभावी है, यह अब विवो अध्ययन में छोटे जानवरों के लिए सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले एपी मॉडल में से एक है। Perides et al. ने चूहों 20 में SAP को प्रेरित करने के लिए सोडियम टॉरोकोलेट (टीसी) को नियोजित किया, जो इसकी विकृति को समझने के लिए अंतर्दृष्टि प्रदान करता है। आनुवांशिक संशोधन तकनीकों के साथ संयुक्त, इस मॉडल ने हमें एपी में शामिल कई विशिष्ट जीनों की पुष्टि करने की अनुमति दी है। उदाहरण के लिए, Bicozo et al. से पता चला है कि CD38 जीन के एक नॉकआउट ने टीसी-इन्फ्यूजन अग्नाशयशोथ के एक मॉडल के खिलाफ संरक्षित किया और इंट्रासेल्युलर Ca2 + सिग्नलिंग 21 में परिवर्तन के लिए तंत्र को जिम्मेदार ठहराया। Fanczal et al. माउस अग्नाशय acinar और डक्टल कोशिकाओं के प्लाज्मा झिल्ली में TRPM2 अभिव्यक्ति के शारीरिक निहितार्थ की जांच की, और TRPM2 नॉकआउट mice22 में TC-प्रेरित SAP की कम गंभीरता का प्रदर्शन किया। इसके अलावा, यह मॉडल विवो में कई उपन्यास दवाओं का परीक्षण करने का एक सरल और प्रभावी तरीका भी प्रदान करता है। उदाहरण के लिए, इस विधि ने कैफीन 23, डिहाइड्रोकोलिक एसिड 24, और विभिन्न एंटीऑक्सिडेंट और एंटीकोआगुलंट्स 25,26 के चिकित्सीय प्रभावों के सत्यापन को सक्षम किया। यह सबूत टीसी-प्रेरित एसएपी मॉडल की बहुमुखी प्रतिभा को दर्शाता है। हालांकि Wittel et al. ने एक समान माउस मॉडल 27 का वर्णन किया है, कार्यान्वयन प्रक्रियाओं पर विवरण की कमी के परिणामस्वरूप निष्कर्षों को पुन: पेश करने में असमर्थता हो सकती है। इस लेख में, हम एक साधारण होममेड माइक्रोसिरिंज का उपयोग करने और टीसी-प्रेरित एसएपी का अध्ययन करने के तरीकों पर ध्यान केंद्रित करते हैं, जिससे न केवल एपी के रोगजनन और उपचार के आगे के अध्ययन के लिए संभव मार्गदर्शन प्रदान किया जाता है, बल्कि कई अन्य पदार्थों के लिए पूरी तरह से अनुकूलनीय प्रयोगात्मक विधि के लिए भी।
टीसी प्रेरित एसएपी मॉडल एक उत्कृष्ट अनुसंधान उपकरण है। जैसा कि इस अध्ययन में दिखाया गया है, इस मॉडल को विशिष्ट उपकरणों को नियोजित किए बिना सामान्य प्रयोगशालाओं में बहुत आसानी से महसूस किया जाता है। जब…
The authors have nothing to disclose.
हम निम्नलिखित अनुदानों से समर्थन के लिए आभारी हैं: NCRCH [2020WSA01] का एक ट्रांसलेशनल रिसर्च ग्रांट, युवा विद्वानों के लिए स्वास्थ्य के Suzhou आयोग से एक KJXW वैज्ञानिक अनुदान [KJXW2020002], Suzhou सिटी की एक विज्ञान और प्रौद्योगिकी योजना (SKY2021038 और SKJY2021050), Jiangsu उच्च शिक्षा संस्थानों (PAPD) के प्राथमिकता शैक्षणिक कार्यक्रम विकास से एक अनुदान ( BED2) और एक प्राथमिक अनुसंधान योजना (BED2)
0.5% iodophor | Shanghai Likang Disinfectant | 310102 | 4 mL/mouse |
0.9% sodium chloride | Sinopharm Group Co., Ltd. | 10019318 | 0.8 mL/mouse |
1% Pentobarbital sodium | Sigma | P3761 | 0.2 -0.25 mL/mouse |
25 μL flat tip Microliter syringe | Gaoge, Shanghai | A124019 | |
4% Paraformaldehyde | Beyotime, Nantong, China | P0099-500ml | |
5% sodium taurocholate (TC) | Aladdin | S100834-5g | 10 μL/SAP mouse |
6-0 Sterile nylon microsuture with threaded needle (1/2 circle) | Cheng-He | 20093 | |
75% alcohol | Sinopharm Group Co., Ltd. | 10009218 | 4 mL/mouse |
8-0 Sterile nylon microsuture with threaded needle (3/8 circle) | Cheng-He | 19064 | |
ALT Activity Assay Kit | EPNK, Anhui, China | ALT0012 | |
Amylase Assay Kit | EPNK, Anhui, China | AMY0012 | |
Angled small bulldog clamp with 12 mm jaw (3 cm) | Cheng-He | HC-X022 | |
aspen shavings or shreds for mouse bedding | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology | VR03015 | |
AST Activity Assay Kit | EPNK, Anhui, China | AST0012 | |
Blood Urea Nitrogen (BUN) Assay Kit | EPNK, Anhui, China | BUN0011 | |
C57BL/6 mouse | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology | 213 | |
Creatine Assay Kit | EPNK, Anhui, China | CRE0012 | |
Feature microtome blade | Beyotime, Nantong, China | E0994 | |
Hemostatic Forceps (9.5 cm, Curved) | JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd. | JC3901 | |
Lipase Assay Kit | Jiancheng, Nanjing, China | A054-2-1 | |
Microtome | Leica biosystem, Germany | RM2245 | |
Mindray biochemistry analyzer | Mindray, Shenzhen, China | BS-420 | |
MPO Assay Kit | Jiancheng, Nanjing, China | A044-1-1 | |
Normal mouse chow | Trophic, Nantong, China | LAD 1000 | |
Phosphate buffered saline | Beyotime, Nantong, China | C0221A | |
Straight micro-bulldog clamp with 5 mm jaw (1.5 cm) | JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd. | W40130 | |
Straight or curved forceps (11.0 cm) | Cheng-He | HC-X091A or HC-X090A | |
Straight Scissors (10.0 cm) | Cheng-He, Ningbo, China | HC-J039102 | |
Thermo Scientific Centrifuge | Thermo Scientific, USA | Multifuge X1R |