تم إثبات تقنيات الجراحة المجهرية التفصيلية لإنشاء نموذج فأر تقنية الوريد الوداجي على المدى الطويل لجمع الدم المتسلسل في نفس الحيوان. تم رصد المعلمات الفسيولوجية والدموية خلال مرحلة تعافي الفئران. تم تطبيق هذا النموذج لدراسة الحرائك الدوائية للبوليفينول الذي يتم إعطاؤه عن طريق الفم دون التسبب في الإجهاد الحيواني.
يعد أخذ عينات الدم في المختبر الصغيرة ضروريا لتحسين الرصاص الصيدلاني ولكنه يمكن أن يسبب ضررا كبيرا وإجهادا لحيوانات التجارب ، مما قد يؤثر على النتائج. القنية الوريدية الوداجية (JVC) في الفئران هي نموذج يستخدم على نطاق واسع لجمع الدم المتكرر ولكنه يتطلب تدريبا كافيا على مهارات الجراحة ورعاية الحيوانات. تفصل هذه المقالة الإجراءات الجراحية المجهرية لإنشاء والحفاظ على نموذج دائم للفئران JVC مع التركيز بشكل خاص على وضع وختم القنية الوداجية. تم تسليط الضوء على أهمية المراقبة الفسيولوجية (على سبيل المثال ، وزن الجسم والطعام وتناول الماء) والمعلمات الدموية ، مع النتائج المقدمة لمدة 6 أيام بعد الجراحة أثناء تعافي الفئران. تم تحديد ملف تعريف وقت تركيز البلازما الدوائية لحمض الإيلاجيك الفينول الطبيعي الذي يتم إعطاؤه عن طريق الفم في نموذج الفئران JVC.
يعد الحصول المتكرر على عينات الدم من المختبر الصغيرة ، مثل القوارض والخنازير الغينية والأرانب ، جانبا مهما لتحسين الرصاص الصيدلاني وأيضا لتقليل عدد الحيوانات المستخدمة في البحث 1,2. يتطلب خط الأنابيب لتطوير أدوات تشخيصية جديدة وصياغة دوائية (مثل اللقاح) الوصول إلى كميات مختلفة من الدم من أجل تقييم قوتها وأدائها في الجسم الحي ، مثل الحرائك الدوائية (PK) ، والسمية ، والحساسية3،4،5.
يتم تصنيف النهج المختبري لجمع عينات الدم على نطاق واسع إلى نوعين ، الجراحية وغير الجراحية6. من السهل نسبيا فهم النهج غير الجراحي للباحث ، والذي يتضمن تقنيات شائعة ، مثل ثقب القلب ، وثقب الجيوب الأنفية المدارية ، ونزيف الوريد الصافن والذيل. يمكن أخذ عينات دم متعددة من خلال بعض الطرق غير الجراحية ، ولكن حجم العينة صغير ويمكن أن يسبب جرحا جسديا وضغطا نفسيا للحيوانات1. من ناحية أخرى ، فإن النهج الجراحي هو البديل المفضل للوخز بالإبر الوريدية المتكرر ، وينطوي على وضع قنية مؤقتة أو دائمة في الأوعية الدموية للحيوانات7،8،9. يمكن سحب حجم الدم الكبير بشكل متكرر من خلال القنية في الفئران الواعية مع تجنب الإجهاد والألم بسبب تقنية المناولة وكبح النفس والتخدير7،8،10،11. ومع ذلك ، فإن زرع القنية يتطلب باحثا متمرسا لديه تدريب كاف من أجل جمع الدم بنجاح.
جمع الدم من خلال تقليب الوريد الوداجي (JVC) في الفئران هو الطريقة الأكثر استخداما على نطاق واسع لدراسة الدواء PK 6,10,12,13. ومع ذلك ، فإن إنشاء نموذج الفئران JVC يحتاج إلى ممارسة دقيقة لمهارات الجراحة المجهرية ومعرفة الرعاية والصيانة بعد الجراحة. على وجه الخصوص ، بعد الجراحة ، يتطلب الفئران إعطاء المسكنات ووقت كاف للتعافي للوصول إلى حالة فسيولوجية مستقرة لمزيد من التجارب13،14،15. على الرغم من أن زيادة وزن الجسم (أي >10 جم) هي مؤشر صالح وشائع التطبيق لتعافي الفئران ، إلا أنه ليس من غير المألوف أن الفئران لديها موت غير متوقع بعد العملية الجراحية بسبب الجفاف والعدوى والالتهابات ، والتي قد تكون خفية لملاحظة في البداية المبكرة14,15. بالإضافة إلى ذلك ، لا يزال انسداد القسطرة في نموذج JVC يمثل مشكلة أثناء جمع الدم.
وقد أظهر هذا البروتوكول بالتفصيل الإجراءات الجراحية المجهرية ل JVC في فأر مخدر مع التركيز بشكل خاص على تحديد الوريد الوداجي وعزله وتعليبه. يتم تسليط الضوء على أهمية الرصد الفسيولوجي والدموية للفئران خلال مرحلة الانتعاش. وأخيرا ، تم جمع عينات الدم التسلسلية من خلال القسطرة الوريدية لدراسة PK لحمض الإيلاجيك الفينول الطبيعي الذي يتم إعطاؤه عن طريق الفم مع ضعف التوافر البيولوجي (أي التركيز الجهازي المنخفض) للتحقق من نموذج الفئران JVC.
يتطلب إتقان تقنية تعليب السفن ممارسة كبيرة وتعلم الدرس من كل عملية. وجد كريستاكيس وآخرون باستخدام تحليل المجموع التراكمي (CUSUM) أن الباحث يحتاج إلى ممارسة 200 فأر على مدى عام واحد قبل أن يكون مستعدا لتقييم PK للأدوية المرشحة20. ومع ذلك ، يمكن تقليل وقت التشغيل اللازم لتقليب الوريد ?…
The authors have nothing to disclose.
وتدعم هذا العمل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 82003692) إلى R.X. Zhang؛ أفضل منحة دراسية أكاديمية في جامعة نورث وسترن للفنون التطبيقية إلى R. Miao.
0.5 mL test tube containing EDTA anticoagulant | Xinkang | N/A | collecting blood samples for hematology test |
0.5*20 mm 1.0-mL syringe | KLMEDICAL | N/A | washing or replacing the fluid with saline |
0.6*28.5 mm 5.0-mL syringe | HD | N/A | Subcutaneous injection |
1.0-mL Blunt tipped syringe (22G) | skillsmodel | S4-PKT22G | Inject the saline and collect blood samples through catheter |
1.5 mL sterile microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C-S | Store sterile catheter lock solution heparinized saline and meloxicam solution |
1.5 mL microcentrifuge tubes | Biosharp | BS-15-M | blood collection |
1/2 circle cutting 5*12 mm suture needle | skillsmodel | S4-FHZ | Thread the muscle layer to fix the catheter |
3/8 circle cutting 7*17 mm suture needle | skillsmodel | S5-FHZ | Suture the incision of rat cortex |
6-0 sterile non-absorbable silk suture thread | JUNSHENG | N/A | ligature |
75% medical alcohol | HONGSONG | N/A | Disinfection |
Adhensive tape | LIUTAI | N/A | positioning the rat |
Autoclave sterilization tape | Biosharp | BS-QT-028 | Mark sterilized items |
Automated blood cell counter | Sysmex | XN-550 | Hematology test |
Castroviejo micro scissors | skillsmodel | WA1010 | Cut the opening in the blood vessel |
Centrifuge | Thermo Fisher Scientific | 75002402 | Plasma preparation |
Clean cushion | Qingjie | N/A | Prepare the operation area |
Cotton balls | HC | N/A | Wound disinfection and sterilization |
Cotton swabs | BEITAGOGO | N/A | Disinfection |
Curved hemostat | skillsmodel | N/A | ligature |
DN50 Stainless-steel rat restrainer | skillsmodel | S4-RGDQ1 | Restrict the movement of rats for easy operation |
Ellagic acid | Aladdin | E102710-25g | natural phenol for oral administration |
Half-curved forceps | skillsmodel | 53072 | Lift the muscle layer and tissue, isolate the jugular vein and tie the suture |
Heating pad | Warm mate | N/A | preventing heat loss of animal |
Heparin sodium | Solarbio | H8060 | anticoagulant |
Iodophor | Xidebao | N/A | Clean the wound |
Iris scissors | skillsmodel | 54002 | Bluent separation the muscle layer |
Isoflurane | RWD | R510-22-16 | anaesthesia |
LED lamp | EMPERORFEEL | N/A | sugery |
Liquid chromatography-mass spectroscopy | Thermo Fisher Scientific | VQF01-20001/ TSQ02-10002 | detection of drug concentration in plasma |
Meloxicam | Hongqiang | N/A | Analgesic |
Normal saline | KL | N/A | Prepara the solution and protect blood vessels from drying out |
Pet razor | Codos | 3180 | Shaving the fur |
Phosphate-buffered saline | ZHHC | PW012 | Preparation of Ellagic acid solution |
PU catheter | skillsmodel | RJVC-PU | Jugular vein cannulation |
Small animal operation anesthesia console | RWD | 68620 | Operation workstation |
Spray bottle | Altro | N/A | aseptic workstation |
Stainless steel plug (22G) | skillsmodel | S4-PKD22G | Plug the catheter to ensure its sealing |
Stainless steel trochar | skillsmodel | S$-PKDGZ | Guide the catheter exteriorization |
Sterile lock solution | skillsmodel | SK-FB | lock the catheter to ensure its sterility |
Straight feeding needle | skillsmodel | N/A | Oral gavage |
Surgical pouch | BKMAM | N/A | container for sterilization of surgical instruments |
Surgical scissors | skillsmodel | J21070 | Cut incision on rat skin |
Vessel dilator balanced forceps | skillsmodel | WA3020 | Expand the blood vessel and guide the cannula to slide in |
ZS-MV Small animal anesthesia machine | ZSLab | 1057003 | inducing and maintaining anaesthesia |