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Intercambio específico de residuos de prolina por análogos de prolina en proteínas fluorescentes: cómo la "cirugía molecular" de la columna vertebral afecta el plegamiento y la estabilidad
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JoVE Journal Bioingegneria
Residue-Specific Exchange of Proline by Proline Analogs in Fluorescent Proteins: How “Molecular Surgery” of the Backbone Affects Folding and Stability
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Intercambio específico de residuos de prolina por análogos de prolina en proteínas fluorescentes: cómo la "cirugía molecular" de la columna vertebral afecta el plegamiento y la estabilidad

DOI:
10.3791/63320-v

•

10:31 min

•

February 03, 2022

•

, , , ,
1Institute of Chemistry,Technische Universität Berlin, 2Department of Chemistry,University of Manitoba, 3Institute of Physics,Martin-Luther-Universität Halle-Wittenberg

Capitoli

  • 00:04Introduction
  • 01:39Production of Recombinant Wild-Type Fluorescent Proteins and Selective Pressure Incorporation to Produce Fluorescent Proteins with Proline Analogs
  • 04:08Fluorescence Emission of Protein Variants
  • 05:00Denaturation and Refolding of EGFP Variants
  • 06:38Results: Effect of Atomic Substitutions in Variants of GFP
  • 09:17Conclusion

Summary

Traduzione automatica

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Para superar las limitaciones de la mutagénesis clásica dirigida al sitio, se incorporaron análogos de prolina con modificaciones específicas en varias proteínas fluorescentes. Mostramos cómo la sustitución del hidrógeno por flúor o del simple por dobles enlaces en residuos de prolina ("cirugía molecular") afecta a las propiedades fundamentales de las proteínas, incluyendo su plegamiento e interacción con la luz.

Tags

Proline AnalogNon-canonical Amino AcidProtein FoldingProtein StabilityMolecular SurgeryFluorescent ProteinSite-directed MutagenesisRibosomal Protein TranslationProtein EngineeringE. Coli CultureNMM MediumOptical DensityCell SuspensionCentrifugationAmino Acid DepletionAmpicillin

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