यह प्रोटोकॉल एक बदली ढक्कन (आर.एमआईडब्ल्यू) के साथ एक उपन्यास स्तन इमेजिंग विंडो का वर्णन करता है। आर.एमआईडब्ल्यू के आरोपण के बाद इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी विभिन्न विकास चरणों के दौरान सेलुलर रिज़ॉल्यूशन के साथ स्वस्थ और रोगग्रस्त स्तन ग्रंथि के अनुदैर्ध्य और बहु-दिवसीय इमेजिंग की अनुमति देता है।
स्तन ग्रंथि की शाखित संरचना अत्यधिक गतिशील है और जन्म के बाद विकास और रीमॉडेलिंग के कई चरणों से गुजरती है। त्वचा फ्लैप सर्जरी या इमेजिंग खिड़कियों के आरोपण के साथ संयोजन में इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी का उपयोग विभिन्न विकास चरणों में स्वस्थ स्तन ग्रंथि की गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए किया गया है। अधिकांश स्तन इमेजिंग प्रौद्योगिकियां घंटों से दिनों की समय सीमा तक सीमित होती हैं, जबकि अधिकांश स्तन ग्रंथि रीमॉडेलिंग प्रक्रियाएं दिनों से हफ्तों के समय सीमा में होती हैं। स्तन ग्रंथि रीमॉडेलिंग का अध्ययन करने के लिए, विस्तारित समय सीमा के लिए ब्याज के ऊतक तक ऑप्टिकल पहुंच की अनुमति देने वाले तरीकों की आवश्यकता होती है। यहां, एक बदली ढक्कन (आर.एमआईडब्ल्यू) के साथ टाइटेनियम स्तन इमेजिंग विंडो का एक बेहतर संस्करण वर्णित है जो कई हफ्तों तक सेलुलर रिज़ॉल्यूशन के साथ स्तन ग्रंथि के उच्च-रिज़ॉल्यूशन इमेजिंग की अनुमति देता है। महत्वपूर्ण रूप से, आर.एमआईडब्ल्यू इंट्रावाइटल इमेजिंग प्रयोग की पूरी अवधि में ऊतक पहुंच प्रदान करता है और इसलिए इसका उपयोग स्थानीय ऊतक हेरफेर, लेबलिंग, दवा प्रशासन या छवि-निर्देशित माइक्रोडिसेक्शन के लिए किया जा सकता है। एक साथ लिया गया, आर.एमआईडब्ल्यू स्तन ग्रंथि विकास, होमियोस्टेसिस और बीमारी के दौरान सेलुलर गतिशीलता के उच्च-रिज़ॉल्यूशन लक्षण वर्णन को सक्षम बनाता है।
स्तन उपकला स्तनधारियों में मौजूद एक अद्वितीय स्रावी अंग है, जो संतानों को पोषण देने के लिए दूध का उत्पादन और स्राव करता है। पूरे जीवन में, स्तन ग्रंथि विकास और विकास के कई दौर से गुजरती है, जो ऊतक 1 के संरचनात्मक और कार्यात्मक परिवर्तनों के साथहोती है। विकास के चरण के आधार पर, ऊतक रीमॉडेलिंग में योगदान देने वाले सेल प्रकार अलग-अलग होते हैं, साथ ही डक्टल पेड़ के भीतर स्थान भी होता है।
मल्टीफोटॉन इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी (आईवीएम) देशी और न्यूनतम रूप से परेशान सेटिंग 2,3,4 में विवो में स्तन कोशिका गतिशीलता के अध्ययन की अनुमति देता है। स्तन ग्रंथि तक दृश्य पहुंच प्राप्त करने के लिए, स्तन ग्रंथि के विकास के विभिन्न चरणों के दौरान कई अस्थायी पूर्व विवो या त्वचा फ्लैप इमेजिंग तकनीकों को प्रकाशित किया गया है, जिसमें यौवन 4,5,6,7, वयस्कता 2,8, स्तनपान 9,10,11,12 और ट्यूमर गतिशीलता 13,14 शामिल हैं 15. यद्यपि इन तकनीकों के परिणामस्वरूप स्तन कोशिका गतिशीलता की उच्च स्थानिक और अस्थायी रूप से हल की गई इमेजिंग होती है, समय सीमा घंटों तक सीमित होती है जबकि अधिकांश स्तन ग्रंथि रीमॉडेलिंग प्रक्रियाओं में दिन से हफ्तों तक का समय लगता है। इसलिए, विस्तारित समय सीमा के लिए ब्याज के ऊतक तक ऑप्टिकल पहुंच की अनुमति देने वाले तरीकों की आवश्यकता होती है। इन वर्षों में, स्तन ट्यूमर इमेजिंग 15,16,17,18 के लिए कई स्थायी इमेजिंग खिड़कियां विकसित की गई हैं, जिसमें टाइटेनियम स्तन इमेजिंग विंडो (एमआईडब्ल्यू) 2,3,19 शामिल है। यद्यपि स्तन ट्यूमर के विकास का अध्ययन करने के लिए बहुत उपयोगी है, स्वस्थ स्तन ग्रंथि संरचना का दृश्य कुछ दिनों तक सीमित रहा। हाल ही में, एक लचीली सिलिकॉन इमेजिंग विंडो विकसित की गई थी, जो कई हफ्तों में यौवन स्तन ग्रंथि के दृश्य की अनुमतिदेती है 20. हालांकि, स्तन ग्रंथि एक एडिपोसाइट समृद्ध वसा पैड में एम्बेडेड होती है, जो व्यापक प्रकाश-बिखरने की ओर जाता है और परिणामस्वरूप स्तन नलिका संरचनाओं की सीमित दृश्यता होती है। इसलिए, स्तन ग्रंथि में लंबे समय तक ऊतक गतिशीलता की कल्पना करने के लिए हर समय बेहतर इमेजिंग स्थितियों की आवश्यकता होती है। न तो शास्त्रीय एमआईडब्ल्यू, और न ही लचीली सिलिकॉन खिड़की ऊतक हेरफेर या इमेजिंग से पहले भौतिक ऊतक स्थान के अनुकूलन की अनुमति देती है, क्योंकि खिड़की सर्जरी और आरोपण के बाद एक बंद प्रणाली बनाती है। नतीजतन, अंतर्निहित स्तन ऊतक के लिए इष्टतम ऑप्टिकल पहुंच लंबे समय तक बाधित होने की संभावना है। इसके विपरीत, त्वचा फ्लैप तकनीक इमेजिंग सत्र के दौरान ऊतक के अनुकूलन और पुनर्स्थापन की अनुमति देती है और एक त्वचा फ्लैप को कई बारदोहराया जा सकता है 2. हालांकि, त्वचा फ्लैप के माध्यम से बार-बार इमेजिंग सत्र केवल तभी संभव होते हैं जब त्वचा की वसूली की अनुमति देने के लिए सर्जरी के बीच पर्याप्त समय (कम से कम 7 दिन) आवंटित किया जाता है और इसलिए ज्यादातर लंबे समय के तराजू पर प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए अनुकूल होता है। इसके अलावा, इसकी आक्रामक प्रकृति और घाव बंद होने पर संक्रमण और निशान के बड़े जोखिम के कारण इस प्रक्रिया को कई बार नहीं करने की सलाह दी जाती है।
इन सीमाओं को दूर करने के लिए, यानी, एक उच्च आवृत्ति पर लंबे समय तक इष्टतम इमेजिंग स्थितियों को सुनिश्चित करने के लिए और एक ही समय में ऊतक हेरफेर की अनुमति देने के लिए, एक बदली ढक्कन (आर.एमआईडब्ल्यू) के साथ एमआईडब्ल्यू का एक बेहतर टाइटेनियम संस्करण स्वस्थ और रोगग्रस्त स्तन ग्रंथि को कई दिनों से सप्ताह2 (चित्रा 1 ए) की कल्पना करने के लिए डिज़ाइन किया गया था। आर.एमआईडब्ल्यू को इष्टतम ऊतक पहुंच प्रदान करने के लिए कस्टम डिज़ाइन किया गया था, जो आईवीएम प्रयोग की पूरी अवधि में प्रत्यक्ष ऊतक हेरफेर को सक्षम करता है, और इस तरह लंबे समय तक सही समय और स्थान पर स्तन ग्रंथि के दृश्य की अनुमति देता है। बंद होने पर, आर.एमआईडब्ल्यू शास्त्रीय एमआईडब्ल्यू (चित्रा 1 सी) की तुलना में एक एयरटाइट सिस्टम बनाता है। सड़न रोकनेवाला परिस्थितियों में खोले जाने पर, आर.एमआईडब्ल्यू स्थानीय ऊतक हेरफेर को ऑप्टिकल पहुंच में सुधार करने की अनुमति देता है और पदार्थों के स्थानीय प्रशासन को भी सक्षम बनाता है, जैसे मार्ग अवरोधक या एगोनिस्ट, विभिन्न सेल प्रकार के ब्याज के इंजेक्शन, जैसे कि कैंसर सेल या प्रतिरक्षा कोशिका आबादी, या ऊतक लेबलिंग-रंगों के अलावा। अंतर्निहित ऊतक को नुकसान पहुंचाए बिना इमेजिंग सत्रों के बीच किसी भी समय ढक्कन खोला जा सकता है।
चित्रा 1: एक बदली ढक्कन के साथ स्तन इमेजिंग खिड़की का डिजाइन( ए) अंगूठी से चिपके 10 मिमी कवरग्लास के साथ स्तन इमेजिंग विंडो के बदली ढक्कन का शीर्ष दृश्य और साइड व्यू। (बी) स्तन इमेजिंग विंडो का शीर्ष दृश्य और साइड व्यू, जिसमें पर्स-स्ट्रिंग सिवनी का उपयोग करके माउस की त्वचा के भीतर खिड़की को सुरक्षित करने के लिए बीच में एक नाली के साथ एक बाहरी अंगूठी और आंतरिक अंगूठी होती है। बाहरी अंगूठी में एक छोटा नाली होता है जो ढक्कन के चार अनुमानों (बाहों) को फिट करता है। (सी) ढक्कन के उद्घाटन और समापन तंत्र का प्रदर्शन कार्टून और चित्र। तिरछा अनुमान सुनिश्चित करते हैं कि ढक्कन खिड़की के फ्रेम के अंदर तय हो गया है। इस आंकड़े को मेसल एट अल से संशोधित किया गया है 2. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
यह प्रोटोकॉल आर.एमआईडब्ल्यू के डिजाइन और आरोपण प्रक्रिया के साथ-साथ एक अनुदैर्ध्य आईवीएम रणनीति का वर्णन करता है ताकि एक ही स्तन नलिकाओं और सेलुलर रिज़ॉल्यूशन पर उनके विज़ुअलाइज़ेशन को फिर से देखा जा सके। आर.एमआईडब्ल्यू विविध फ्लोरोसेंट रिपोर्टर माउस मॉडल में स्तन ग्रंथि के विभिन्न विकास चरणों के दौरान निम्नलिखित कोशिका विभाजन और रूपात्मक परिवर्तनों की अनुमति देता है। एक साथ लिया गया, आर.एमआईडब्ल्यू स्तन ग्रंथि विकास, होमियोस्टेसिस और बीमारी के दौरान सेलुलर गतिशीलता के उच्च-रिज़ॉल्यूशन लक्षण वर्णन की सुविधा प्रदान करता है।
आर.एमआईडब्ल्यू अपने मूल और न्यूनतम रूप से बाधित वातावरण में स्वस्थ और रोगग्रस्त स्तन ग्रंथि के अनुदैर्ध्य इमेजिंग की अनुमति देता है और विभिन्न विकास चरणों में स्तन ग्रंथि के बार-बार दृश्य की अनुमति देता है। आर.एमआईडब्ल्यू डिजाइन प्रयोग के दौरान किसी भी बिंदु पर खिड़की खोलने की अनुमति देता है। ब्याज के ऊतक तक दीर्घकालिक दृश्य पहुंच बाधित हो सकती है, उदाहरण के लिए, कवरस्लिप पर सेल मलबे के संचय से। ऐसे मामलों में, पूरे दृश्यमान ऊतक क्षेत्र और ढक्कन की सफाई की अनुमति देने के लिए इमेजिंग सत्र से पहले या तुरंत बाद आर.एम.आईडब्ल्यू खोला जा सकता है। हटाने योग्य ढक्कन ऊतक के जोड़तोड़ के साथ-साथ पदार्थों के स्थानीय अनुप्रयोग, जैसे विशिष्ट अवरोधकों और उपचारों, लेबलिंग रंगों, या विशिष्ट सेल प्रकार के ब्याज की अनुमति देता है।
यह विधि पहले वर्णित स्तन स्किनफ्लैप प्रक्रियाओं 4,7,8,13 की सीमा को पार करती है, जो एक इमेजिंग सत्र तक सीमित हैं, और ब्रांचिंग मॉर्फोजेनेसिस (चित्रा 5), होमियोस्टैटिक ऊतक टर्नओवर (चित्रा 6), या सेलुलर स्तर पर ट्यूमर वृद्धि (चित्रा 3 बी) जैसी प्रक्रियाओं की कल्पना कर सकती है ). फिर भी, एक ही समय में, आर.एमआईडब्ल्यू इमेजिंग सत्रों के बीच ऊतक के स्थानीय हेरफेर की अनुमति देता है, जिसमें पहले प्रकाशित एमआईडब्ल्यू3,18 और अन्य सभी इमेजिंग खिड़कियों20,22 की तुलना में आर.एमआईडब्ल्यू की एक बड़ी संपत्ति शामिल है। आर.एमआईडब्ल्यू खोलते समय, संक्रमण के किसी भी स्रोत को रोकने के लिए हर समय सड़न रोकनेवाला स्थितियों को बनाए रखना महत्वपूर्ण है। एक सड़न रोकनेवाला वातावरण में आर.एमआईडब्ल्यू को खोलने की क्षमता प्रत्येक इमेजिंग सत्र से पहले इमेजिंग स्थितियों को अनुकूलित करने की अनुमति देती है, जो ब्याज के ऊतकों तक दीर्घकालिक दृश्य पहुंच में काफी सुधार करती है। विशेष रूप से, स्तन ग्रंथि में, जो एक एडिपोसाइट समृद्ध स्ट्रोमा में एम्बेडेड है, यह बहुत मूल्यवान है। इसके अलावा, बदली ढक्कन विशिष्ट रूप से चिकित्सीय, विभिन्न सेल प्रकार, लेबलिंग रंगों, छवि-निर्देशित माइक्रोडिसेक्शन, या आईवीएम प्रयोग को समाप्त करने की आवश्यकता के बिना ऊतक के किसी अन्य स्थानीय हेरफेर के स्थानीय प्रशासन को सक्षम कर सकता है। उदाहरण के लिए, ट्यूमर दीक्षा का अध्ययन करने के लिए, विशिष्ट कैंसर सेल आबादी को एक निर्धारित आईवीएम समय-बिंदु और सटीक स्तन ग्रंथि स्थान पर सीधे डक्टल पेड़ या स्ट्रोमा में इंजेक्ट किया जा सकता है, जब तक कि यह आरओआई आर.एम.आईडब्ल्यू रिंग के माध्यम से सुलभ हो। ट्यूमर की प्रगति का अध्ययन करने के लिए, विशिष्ट कैंसर सेल आबादी (एक विशिष्ट स्थान पर, एक विशिष्ट सूक्ष्म वातावरण में, या एक विशिष्ट व्यवहार के साथ) को आईवीएम सत्र के दौरान फोटो-चिह्नित किया जा सकता है और बाद में आर.एमआईडब्ल्यू के उद्घाटन के बाद फ्लोरोसेंट विच्छेदन माइक्रोस्कोप का उपयोग करके माइक्रोडिसेक्ट किया जा सकता है। पृथक कोशिकाओं को डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए आगे संसाधित किया जा सकता है, जैसे (एकल-कोशिका) एमआरएनए अनुक्रमण। इस दृष्टिकोण का उपयोग करके, कोई आणविक अभिव्यक्ति प्रोफाइल के लिए विवो सेल व्यवहार में जोड़ सकता है। आर.एमआईडब्ल्यू द्वारा सक्षम स्थानीय दवा प्रशासन का लाभ ऊतक को उपचार से पहले और सीधे बाद में चित्रित करने की अनुमति देता है। इमेजिंग बॉक्स से माउस को हटाने और बाद में आर.एमआईडब्ल्यू ढक्कन खोलने के बाद स्थानीय दवा प्रशासन करने के लिए आवश्यक अंतराल मिनटों में किया जा सकता है, जो तेजी से अभिनय करने वाली दवाओं के तत्काल चरण कैप्चर की अनुमति देता है।
हम दिखाते हैं कि आर.एमआईडब्ल्यू के माध्यम से स्तन ग्रंथि का आईवीएम कई अलग-अलग फ्लोरोसेंट रिपोर्टर माउस मॉडल के साथ संगत है। वसा समृद्ध वातावरण छवि के लिए चुनौतीपूर्ण है, और इसलिए उज्ज्वल फ्लोरोफोरस के उपयोग की सिफारिश की जाती है। हालांकि, जैसा कि यहां दिखाया गया है, एमसीएफपी जैसे कम उज्ज्वल फ्लोरोफोरस को इष्टतम इमेजिंग स्थितियों में आर.एमआईडब्ल्यू के माध्यम से कल्पना की जा सकती है। अनिवार्य रूप से, वसा पैड गहरी नलिका संरचनाओं की इमेजिंग को रोक देगा, और इमेजिंग को अधिक सतही नलिकाओं तक सीमित कर देगा। प्रत्येक आईवीएम प्रयोग की शुरुआत में एक कम-रिज़ॉल्यूशन अवलोकन छवि ब्याज की डक्टल संरचनाओं की पहचान करने में मदद करेगी जो उच्च-रिज़ॉल्यूशन इमेजिंग के लिए पर्याप्त रूप से सतही हैं। स्थानीय ऊतक हेरफेर, संयोजी ऊतक को हटाने, या आरएमआईडब्ल्यू खोलने के बाद वसा ऊतक की पुनर्स्थापना विशिष्ट आरओआई के लिए आईवीएम का अनुकूलन कर सकती है जो वसा ऊतक द्वारा मढ़ा जाता है। यह पिछले सभी विंडो डिज़ाइनों पर एक महत्वपूर्ण लाभ है, जो इन जोड़तोड़ को करने की अनुमति नहीं देते हैं और खिड़की को पूरी तरह से हटाने की आवश्यकता होगी। विशेष रूप से, वंक्षण लिम्फ नोड के दृश्य के लिए, धीरे-धीरे अतिरंजित फैटी ऊतक को हटाने की सिफारिश की जाती है, जो प्रकाश बिखरने को कम करता है और उच्च-रिज़ॉल्यूशन इमेजिंग को सक्षम बनाता है। ऊतक में हेरफेर करते समय, हमेशा सड़न रोकनेवाला स्थितियों को रखें और ऊतक को रक्तस्राव या गंभीर क्षति को रोकें, क्योंकि वे आईवीएम प्रयोग के दौरान अध्ययन की जा रही प्रक्रियाओं को प्रभावित कर सकते हैं।
आर.एमआईडब्ल्यू टाइटेनियम से बना है, एक ऐसी सामग्री जिसका उपयोग आमतौर पर नैदानिक अभ्यास में जोड़ों या हड्डी प्लेटों जैसे कठोर ऊतकों को बदलने के लिए किया जाता है। टाइटेनियम के स्टील की खिड़कियों पर कई फायदे हैं, जिनमें इसके हल्के और निष्क्रिय चरित्र21 शामिल हैं। हाल ही में, लचीली सिलिकॉन विंडो20 सहित उपन्यास इमेजिंग विंडो प्रकार उत्पन्न करने के लिए कई अन्य सामग्रियों का उपयोग किया गया था। आर.एमआईडब्ल्यू के विपरीत, लचीली खिड़की को आरोपण के लिए किसी भी टांके की आवश्यकता नहीं होती है और लगभग किसी भी शारीरिक स्थिति के लिए उपयुक्त है, विशेष रूप से नरम और नाजुक ऊतकों के मामले में। सिलिकॉन खिड़कियों का उनके हल्के और विकृत प्रकृति के कारण पशु गतिशीलता पर न्यूनतम प्रभाव पड़ता है और शायद तेजी से ऊतक विस्तार और विकास का अध्ययन करने वाले प्रयोगों में अधिक अनुकूलहै 20. टाइटेनियम संस्करण पर एक और फायदा यह है कि सिलिकॉन खिड़कियां चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग20,27 सहित अन्य इमेजिंग तौर-तरीकों के साथ संगत हैं। हालांकि, यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण होगा कि उद्देश्यों को 0.17 मिमी ग्लास कवरलिप्स के लिए अनुकूलित किया गया है। इसके अलावा, स्तन ऊतक श्वास आंदोलनों के लिए अतिसंवेदनशील होता है, जो लचीली खिड़की का उपयोग करके प्रतिबंधित करना मुश्किल होता है, खासकर जब एक उल्टे माइक्रोस्कोप का उपयोग करते हैं। श्वास कलाकृतियों को आर.एमआईडब्ल्यू डिजाइन और इमेजिंग बॉक्स के जड़ना में आर.एमआईडब्ल्यू के निर्धारण द्वारा कम से कम किया जाता है। नतीजतन, प्रस्तावित आर.एमआईडब्ल्यू सेटअप का उपयोग करके अधिग्रहित छवियां श्वास कलाकृतियों के कारण विकृत नहीं होती हैं। हालांकि, ऊतक स्थानीयकरण में मामूली बहाव हो सकते हैं, जो आमतौर पर क्रमिक होते हैं और अधिग्रहण के बाद गति सुधार सॉफ्टवेयर28 का उपयोग करके ठीक किया जा सकता है। आईवीएम प्रौद्योगिकियों 2,20 के बढ़ते टूलबॉक्स के साथ, प्रत्येक प्रयोग के लिए विशिष्ट आवश्यकताएं अंततः ब्याज के ऊतक के विवो विज़ुअलाइज़ेशन का सबसे अच्छा तरीका निर्धारित करेंगी। विभिन्न विंडो डिज़ाइनों के अलग-अलग फायदे और नुकसान हैं और अनुसंधान प्रश्न, उपलब्ध माइक्रोस्कोपी सेटअप, आवश्यक स्थानिक और लौकिक रिज़ॉल्यूशन और अध्ययन प्रक्रिया की कुल समय अवधि के आधार पर, इष्टतम दृष्टिकोण निर्धारित करने की आवश्यकता है।
सारांश में, आर.एमआईडब्ल्यू स्तन ग्रंथि विकास, होमियोस्टेसिस और बीमारी के दौरान कई दिनों से हफ्तों तक सेलुलर गतिशीलता के उच्च-रिज़ॉल्यूशन लक्षण वर्णन की सुविधा प्रदान करता है।
The authors have nothing to disclose.
इस काम को रिसर्च फाउंडेशन फ्लैंडर्स (एमसी को पीएचडी अनुदान मौलिक अनुसंधान 11 एल 7222 एन), बोहरिंगर इंगेलहेम फाउंडेशन (सीएलजीजेएस को पीएचडी फैलोशिप), एक ईएमबीओ पोस्टडॉक्टोरल फैलोशिप (सीएलजीजेएस को अनुदान एएलटीएफ 1035-2020), और डॉक्टर जोसेफ स्टेनर अवार्ड (जेवीआर को) द्वारा समर्थित किया गया था।
0.9% NaCl | BD | 306573 | Other brands available |
10 mm round coverglass | Fisher scientific | 10696365 | Other brands available |
5-0 braided silk suturs | Ethicon | W580 | |
80% Ethanol | homemade | NA | |
Anesthesia induction box | Kentscientific | VetFlo-MSEKIT | |
Buprenorphine (Vetergesic®) | Ecuphar | NA | |
Cotton tips (sterile) | Fisher scientific | 13113743 | Other brands available |
Cyanoacrylate adhesive | Loctite | NA | Other brands available |
Eye ointment | Duratears | NA | |
Flexible butterfly needle | Greiner Bio-One | 450120 | Other brands available |
Graefe forceps (blunt) | Fine Science Tools | 11051-10 | |
Heating pad | Kentscientific | RightTemp Jr. | Other brands available |
Imaging box | Custom made | NA | |
Infuse nutrient mixture | Braun | Nutriflex special 70/240 | |
Insulin syringes | BD | 324911 | Other brands available |
Inverted multi-photon microscope with automated stage | Leica Microsystems | NA | |
Isoflurane vaporizer | Kentscientific | VetFlo-1231K | |
Needle holder | Fine Science Tools | 12510-14 | |
Parafilm | Sigma-Aldrich | P7793 | semi-transparent tape |
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