גישת סגמנטציה ללא תווית להדמיה תוך-ורידית של מיקרו-סביבה של גידולי יונקים
Summary
שיטת ההדמיה התוך-ורידית המתוארת כאן משתמשת בדור ההרמוני השני של הקולגן ובפלואורסצנציה אנדוגנית מהקו-פקטור המטבולי NAD(P)H כדי לפלח באופן לא פולשני מיקרו-סביבה של גידול ללא תווית לתוך תאי גידול, סטרומל וכלי דם לצורך ניתוח מעמיק של תמונות תוך-ורידיות 4D.
Abstract
היכולת לדמיין אינטראקציות פיזיולוגיות מורכבות ודינמיות בין סוגי תאים רבים לבין המטריצה החוץ-תאית (ECM) בתוך מיקרו-סביבה של גידול חי היא צעד חשוב לקראת הבנת מנגנונים המווסתים את התקדמות הגידול. אמנם ניתן להשיג זאת באמצעות טכניקות הדמיה תוך-ורידיות עכשוויות, אך זה עדיין מאתגר בשל האופי ההטרוגני של הרקמות והצורך בהקשר מרחבי בתוך התצפית הניסיונית. לשם כך, פיתחנו תהליך הדמיה תוך-ורידי המשלב הדמיה של קולגן מהדור ההרמוני השני, פלואורסצנציה אנדוגנית מהקו-פקטור המטבולי NAD(P)H, ומיקרוסקופיית הדמיה פלואורסצנטית לכל החיים (FLIM) כאמצעי למידור לא פולשני של המיקרו-סביבה של הגידול לתחומים בסיסיים של קן הגידול, הסטרומה או ה-ECM שמסביב, וכלי הדם. פרוטוקול לא פולשני זה מפרט את התהליך שלב אחר שלב, החל מרכישת תמונות בהילוך מהיר של מודלים של גידולי יונקים ועד לניתוח לאחר העיבוד ופילוח תמונות. היתרון העיקרי של זרימת עבודה זו הוא בכך שהיא מנצלת חתימות מטבוליות כדי להקשר את המיקרו-סביבה של הגידול החי המשתנה באופן דינמי ללא שימוש בתוויות פלואורסצנטיות אקסוגניות, מה שהופך אותה ליתרון עבור מודלים של קסנוגרפט (PDX) שמקורם במטופלים אנושיים ולשימוש קליני עתידי שבו פלואורופורים חיצוניים אינם ישימים בקלות.
Introduction
המטריצה החוץ-תאית (ECM) במיקרו-סביבה של הגידול ידועה כמי שהופקדה באופן דינמי ושופצה על ידי סוגי תאים מרובים כדי להקל עוד יותר על התקדמות המחלה 1,2,3. שינויי מטריצה אלה מספקים רמזים מכניים וביולוגיים המשנים את התנהגות התאים ולעתים קרובות גורמים למחזור מתמשך של שיפוץ מטריצה4. חקירת יחסי הגומלין הדינמיים וההדדיים בין תאי הגידול לבין המטריצה החוץ-תאית מתבצעת לעתים קרובות באמצעות תרבית מבחנה תלת-ממדית (תלת-ממדית) או מערכות מיקרופלואידיות. בעוד שגישות אלה מלמטה למעלה הדגימו מנגנונים של שיפוץ ECM 5,6,7, התפשטות מוגברת8, מעבר אפיתל למזנכימלי 9,10,11,12, והגירה ופלישה של תאי גידול 7,13,14,15,16 ההתמקדות שלהם הייתה בעיקר בכמה סוגי תאים (למשל, תאי גידול או פיברובלסטים) בתוך מטריצה תלת-ממדית הומוגנית בהשוואה למגוון ולהטרוגניות של אינטראקציות הקיימות בתוך רקמה פיזיולוגית., בנוסף למערכות in vitro, היסטולוגיה של גידולי ex vivo יכולה גם לספק כמה תובנות לגבי האינטראקציות האלה בין תאים לתאים ותאים-ECM17. לאימונוהיסטוכימיה יש יתרון בכך שהיא מסוגלת לנתח סוגי תאים מרובים ביחס להרכב ההטרוגני המרחבי ולארכיטקטורה של ה-ECM, אך נקודות הקצה הסטטיות של רקמות קבועות אינן לוכדות את האופי הדינמי של אינטראקציות בין תאים לבין המיקרו-סביבה. הדמיה תוך-ורידית פתחה את הדלת לחקור אינטראקציות מגוונות ודינמיות בהקשר הפיזיולוגי של המיקרו-סביבה הטבעית של הגידול.
היכולות של הדמיית גידולים תוך-ורידיים מתקדמות במהירות. שיפורים בתכנון חלונות הדמיה וטכניקות כירורגיות להשתלת החלונות אפשרו הדמיה ארוכת טווח של גידולים אורכיים במגוון מקומות אנטומיים (כלומר, גידול ראשוני, בלוטות לימפה, אתרים גרורתיים 18,19,20). יתר על כן, היכולת של מכשור אופטי להמחיש ולאסוף נתונים בממדים מרובים (כלומר, ספקטרלי, עוצמת פלואורסצנציה מרחבית ואורך חיים), וברזולוציה ובמהירות גבוהה (קצב וידאו) הופכת לנגישה באופן נרחב. הטכנולוגיה המשופרת מספקת הזדמנות לחקור שינויים מהירים באיתות תאי ובדינמיקה פנוטיפית בתוך סביבה פיזיולוגית. לבסוף, הרחבת הכלים האופטוגנטיים והמגוון הרחב של מבנים פלואורסצנטיים גנטיים מאפשרים תיוג של סוגי תאים ספציפיים כדי ללכוד את נדידת התאים במיקרו-סביבה של הגידול או במעקב אחר שושלת התאים במהלך ההתפתחות או התקדמות המחלה21,22. השימוש בכלים אלה בשילוב עם טכנולוגיית CRISPR/Cas9 מספק לחוקרים את ההזדמנות ליצור מודלים ייחודיים של בעלי חיים בזמן.
בעוד שכל ההתקדמות הזו הופכת את ההדמיה התוך-לוויתנית לשיטה רבת עוצמה יותר ויותר לחקר אינטראקציות תאיות דינמיות ופיזיולוגיות, עדיין יש צורך חשוב לפתח אסטרטגיות המספקות הקשר מרחבי, זמני ומבנה ברמת הרקמה לאינטראקציות ביולוגיות אלה. נכון לעכשיו, מחקרי הדמיה תוך-ורידיים רבים מפצים על היעדר ציוני דרך חזותיים כגון כלי דם על ידי הזרקת צבעים פלואורסצנטיים לתוך כלי הדם או שימוש במודלים של עכברים המבטאים באופן אקסוגני חלבונים פלואורסצנטיים כדי להגדיר תכונות פיזיות. צבעים ומצעים הניתנים להזרקה כמו דקסטרנים פלואורסצנטיים נמצאים בשימוש נרחב כדי לתייג בהצלחה את כלי הדם באוספים תוך-ויטליים19, 23, 24. עם זאת, גישה זו אינה נטולת מגבלות. ראשית, היא דורשת מניפולציות נוספות בעכברים והתועלת שלה מוגבלת לניסויים קצרי טווח. עבור מחקרי אורך, דקסטרן פלואורסצנטי יכול להיות בעייתי כאשר אנו צופים בהצטברות של דקסטרן בתאים פאגוציטיים או דיפוזיה לתוך הרקמה הסובבת לאורך זמן25. שילוב חלבון פלואורסצנטי אקסוגני במודל העכבר הוצג כחלופה לדקסטרנים פלואורסצנטיים, אך מציג מגבלות משלו. הזמינות והמגוון של פלואורופורים אקסוגניים בתוך דגמי עכברים עדיין מוגבלים ויקרים ליצירה. בנוסף, במודלים ספציפיים, כגון מודלים של PDX, מניפולציות גנטיות אינן רצויות או אפשריות. כמו כן, הוכח כי נוכחותם של חלבונים פלואורסצנטיים או ביולומינסצנטיים בתוך התאים מוכרת כזרה בתוך העכבר, ובתוך מודלים של עכברים מדוכאי חיסון, הדבר מפחית את כמות הגרורות עקב התגובה של מערכת החיסון המארחת26,27. לבסוף, חלבונים פלואורסצנטיים אקסוגניים או צבעים פלואורסצנטיים המשמשים להקשר מרחבי או לפלח נתונים מאוחרים יותר תופסים לעתים קרובות טווחים ראשוניים של ספקטרום האור, שאחרת ניתן היה להשתמש בהם כדי לחקור את האינטראקציות הפיזיולוגיות המעניינות.
השימוש באות הפנימי מה-ECM או פלואורסצנציה אנדוגנית מתאים בתוך הרקמה מייצג אמצעי אוניברסלי פוטנציאלי ללא תוויות לפלח נתונים תוך-תאיים לצורך ניתוח תאי ומרחבי מעמיק יותר. הדור ההרמוני השני (SHG) שימש זה מכבר להדמיית ה-ECM28. עם התפתחותם של כלים חשובים שיסייעו באפיון ארגון הסיבים 29,30,31, ניתן לאפיין את התנהגות התא ביחס למבנה ECM המקומי. בנוסף, אוטופלואורסצנציה מהמטבוליט האנדוגני, NAD(P)H, מספקת כלי נוסף ללא תווית למידור המיקרו-סביבה של הגידול in vivo. NAD(P)H פלואורסצנטי בבהירות בתאי הגידול וניתן להשתמש בו כדי להבחין בין גבולות קן הגידול הגדל לבין הסטרומה הסובבת אותו21,32. לבסוף, כלי הדם הוא מבנה פיזיולוגי חשוב במיקרו-סביבה של הגידול ובאתר של אינטראקציות מפתח ספציפיות לסוג התא 33,34,35. עירור של תאי דם אדומים (RBC) או פלזמת דם שימש כדי לדמיין את כלי הדם של הגידול, ובאמצעות עירור של שניים או שלושה פוטונים (2P; 3P) מדידת קצב זרימת הדם הוכחה כאפשרית36. עם זאת, בעוד שכלי דם גדולים יותר ניתנים לזיהוי בקלות על ידי חתימות הפלואורסצנטיות האנדוגניות שלהם, זיהוי של כלי דם קטנים עדינים, משתנים ופחות פלואורסצנטיים דורש מומחיות רבה יותר. קשיים מובנים אלה מעכבים פילוח תמונה אופטימלי. למרבה המזל, ניתן למדוד את המקורות הללו של פלואורסצנציה אנדוגנית (כלומר, תאי דם אדומים ופלסמה בדם) גם על ידי הדמיה פלואורסצנטיתלכל החיים 37, המנצלת את התכונות הפוטופיזיות הייחודיות של כלי הדם ומייצגת תוספת שימושית לארגז הכלים התוך-ורידי ההולך וגדל.
בפרוטוקול זה מתוארת זרימת עבודה לסגמנטציה של הדמיה תוך-לוויטלית ארבע-ממדית (4D) המשתמשת במפורש באותות פנימיים כמו פלואורסצנציה אנדוגנית ו-SHG מרכישה ועד ניתוח. פרוטוקול זה רלוונטי במיוחד למחקרי אורך דרך חלון הדמיה של יונקים שבו פלואורסצנציה אקסוגנית עשויה להיות לא מעשית או אפשרית, כמו במקרה של מודלים של PDX. עם זאת, עקרונות הסגמנטציה המתוארים כאן ישימים באופן נרחב למשתמשים תוך-ורידיים החוקרים ביולוגיה של גידולים, התפתחות רקמות או אפילו פיזיולוגיה של רקמות תקינה. החבילה המדווחת של גישות הניתוח תאפשר למשתמשים להבדיל התנהגות תאית בין אזורים של תצורות סיבי קולגן מיושרות או אקראיות, להשוות מספרים או התנהגויות של תאים השוכנים באזורים ספציפיים של המיקרו-סביבה של הגידול, ולמפות את כלי הדם למיקרו-סביבה של הגידול באמצעות אות נטול תוויות או פנימי בלבד. יחד, שיטות אלה יוצרות מסגרת תפעולית למקסום עומק המידע המתקבל מהדמיה תוך-ורידית 4D של בלוטת החלב תוך מזעור הצורך בתוויות אקסוגניות נוספות.
Protocol
Representative Results
Discussion
הדמיה תוך-ורידית 4D היא כלי רב עוצמה לחקר אינטראקציות פיזיולוגיות דינמיות בהקשר המרחבי והזמני של המיקרו-סביבה של הגידול הטבעי. כתב יד זה מספק מסגרת תפעולית בסיסית מאוד וניתנת להתאמה כדי למדר אינטראקציות של תאים דינמיים בתוך מסת הגידול, הסטרומה הסמוכה, או בסמיכות לרשת כלי הדם באמצעות אותות …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים רוצים להכיר במענקי NCI R01 CA216248, CA206458 ו- CA179556 למימון עבודה זו. אנו רוצים גם להודות לד”ר קווין אליסירי ולקבוצת ההדמיה שלו על המומחיות הטכנית שלהם בפיתוח המוקדם של התוכנית התוך-לוויתית שלנו. אנו מודים גם לד”ר בן קוקס ולחברים אחרים בקבוצת הייצור של אליסירי במכון מורגרידג’ למחקר על התכנון הטכני החיוני שלהם בשלבים המוקדמים של ה-MIW. ד”ר אלן דובסון סייע בשיחות שימושיות על כלי הפילוח של WeKA הניתן לאימון של ImageJ. בנוסף, ברצוננו להודות לד”ר מליסה סקאלה ולד”ר אלכסה בארס-היטון על השימוש בזמן במיקרוסקופ שלהן. לבסוף, ברצוננו להודות לד”ר בריג’יט ראבה, D.V.M, על כל הדיונים והעצות המהורהרות על הטיפול והטיפול בעכברים שלנו.
Materials
| #1.5 12mm round cover glass | Warner Instruments | # 64-0712 | MIW construction |
| 1.0 mL syringe for SQ injection | BD | 309659 | Syringe |
| 20x objective | Zeiss | 421452-988 | Water immersion |
| 27G needle for SQ injection | Covidien | 1188827012 | Needle |
| 40x objective | Nikon | MRD77410 | Water immersion |
| 5-0 silk braided suture | Ethicon | K870 | Suture for MIW implantation |
| Artificial tears gel | Akorn | NDC 59399-162-35 | Eye gel |
| Betadine solution, 5% | Fisher Scientific | NC1558063 | Surgery antiseptic |
| cotton-tipped applicator | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Cyanoacrylate adhesive | Loctite | 1365882 | MIW construction |
| fluorescent dextran | Sigma | T1287-50mg | intravenous labelling of vasculature |
| forceps | Mckesson.com | Miltex #18-782 | stainless, 4 inch, curved |
| GaAsP photomultiplier tube | Hamamatsu | ||
| heating blanket | CARA 72 heating pad | 038056000729 | Temperature selectable |
| heating chamber | home built | ||
| Fluorescent lifetime handbook | Becker and Hickl | https://www.becker-hickl.com/literature/handbooks | |
| inverted microscope base | Nikon | ||
| Isoflurane | Akorn | NDC 59399-106-01 | Anesthesia |
| Liqui-Nox | Fisher Scientific | 16-000-125 | MIW cleaning |
| Meloxicam | Norbrook | NDC 55529-040-10 | Analgesic |
| Micro Hose | Scientific Commodities INC. | BB31695-PE/1 | |
| multiphoton scan head | Bruker Ultima II | Multiphoton scanhead and imaging platform | |
| NADH FLIM filter | Chroma | 284994 | ET 440/80 m-2P |
| Nair | CVS | 339826 | Depilatory cream |
| objective heater | Tokai Hit | STRG-WELSX-SET | |
| SHG/FAD filter | Chroma | 320740 | ET450/40m-2P |
| Sparkle glass cleaner | Amazon.com | B00814ME24 | Glass Cleaner for implanted MIW |
| SPC-150 photon counting board | Becker and Hickl | ||
| surgical light | FAJ | B06XV1VQVZ | Magnetic LED gooseneck light |
| surgical micro-scissors | Excelta | 366 | stainless, 3 inch |
| Triple antibiotic ointment | Actavis Pharma | NDC 0472-0179-34 | Antibiotic |
| TV catheter | Custom | BD 30G needle: 305106 | Catheter for TV injection |
| Two photon filter | Chroma | 320282 | ET585/65m-2P |
| two-photon laser | Coherent charmeleon | Tunable multiphoton laser | |
| ultrasound gel | Parker | PKR-03-02 | Water immersion gel |
| Urea crystals | Sigma | U5128-5G | Optional: FLIM IRF |
Riferimenti
- Eble, J. A., Niland, S. The extracellular matrix in tumor progression and metastasis. Clinical & Experimental Metastasis. 36 (3), 171-198 (2019).
- Afik, R., et al. Tumor macrophages are pivotal constructors of tumor collagenous matrix. The Journal of Experimental Medicine. 213 (11), 2315-2331 (2016).
- Varol, C., Sagi, I. Phagocyte-extracellular matrix crosstalk empowers tumor development and dissemination. The FEBS Journal. 285 (4), 734-751 (2018).
- Winkler, J., Abisoye-Ogunniyan, A., Metcalf, K. J., Werb, Z. Concepts of extracellular matrix remodelling in tumour progression and metastasis. Nature Communications. 11 (1), 5120 (2020).
- Han, W., et al. Oriented collagen fibers direct tumor cell intravasation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (40), 11208-11213 (2016).
- Malandrino, A., Mak, M., Kamm, R. D., Moeendarbary, E. Complex mechanics of the heterogeneous extracellular matrix in cancer. Extreme Mechanics Letters. 21, 25-34 (2018).
- Lugo-Cintrón, K. M., et al. Breast Fibroblasts and ECM Components Modulate Breast Cancer Cell Migration Through the Secretion of MMPs in a 3D Microfluidic Co-Culture Model. Cancers. 12 (5), 1173 (2020).
- Wozniak, M. A., Desai, R., Solski, P. A., Der, C. J., Keely, P. J. ROCK-generated contractility regulates breast epithelial cell differentiation in response to the physical properties of a three-dimensional collagen matrix. The Journal of Cell Biology. 163 (3), 583-595 (2003).
- Zhang, K., et al. The collagen receptor discoidin domain receptor 2 stabilizes SNAIL1 to facilitate breast cancer metastasis. Nature Cell Biology. 15 (6), 677-687 (2013).
- Malik, G., et al. Plasma fibronectin promotes lung metastasis by contributions to fibrin clots and tumor cell invasion. Ricerca sul cancro. 70 (11), 4327-4334 (2010).
- Bae, Y. K., Choi, J. E., Kang, S. H., Lee, S. J. Epithelial-mesenchymal transition phenotype is associated with clinicopathological factors that indicate aggressive biological behavior and poor clinical outcomes in invasive breast cancer. Journal of Breast Cancer. 18 (3), 256-263 (2015).
- Wei, S. C., et al. Matrix stiffness drives epithelial-mesenchymal transition and tumour metastasis through a TWIST1-G3BP2 mechanotransduction pathway. Nature Cell Biology. 17 (5), 678-688 (2015).
- Riching, K. M., et al. 3D collagen alignment limits protrusions to enhance breast cancer cell persistence. Biophysical Journal. 107 (11), 2546-2558 (2014).
- Carey, S. P., et al. Local extracellular matrix alignment directs cellular protrusion dynamics and migration through Rac1 and FAK. Integrative Biology: Quantitative Biosciences from Nano to Macro. 8 (8), 821-835 (2016).
- Ray, A., Morford, R. K., Ghaderi, N., Odde, D. J., Provenzano, P. P. Dynamics of 3D carcinoma cell invasion into aligned collagen. Integrative Biology: Quantitative Biosciences from Nano to Macro. 10 (2), 100-112 (2018).
- Szulczewski, J. M., et al. Directional cues in the tumor microenvironment due to cell contraction against aligned collagen fibers. Acta Biomaterialia. 129, 96-109 (2021).
- Esbona, K., et al. The Presence of Cyclooxygenase 2, Tumor-Associated Macrophages, and Collagen Alignment as Prognostic Markers for Invasive Breast Carcinoma Patients. The American Journal of Pathology. 188 (3), 559-573 (2018).
- Entenberg, D., et al. A permanent window for the murine lung enables high-resolution imaging of cancer metastasis. Nature Methods. 15 (1), 73-80 (2018).
- Kedrin, D., et al. Intravital imaging of metastatic behavior through a mammary imaging window. Nature Methods. 5 (12), 1019-1021 (2008).
- Jacquemin, G., et al. Longitudinal high-resolution imaging through a flexible intravital imaging window. Science Advances. 7 (25), (2021).
- Boone, P. G., et al. A cancer rainbow mouse for visualizing the functional genomics of oncogenic clonal expansion. Nature Communications. 10 (1), 5490 (2019).
- Dawson, C. A., Mueller, S. N., Lindeman, G. J., Rios, A. C., Visvader, J. E. Intravital microscopy of dynamic single-cell behavior in mouse mammary tissue. Nature Protocols. 16 (4), 1907-1935 (2021).
- Leung, E., et al. Blood vessel endothelium-directed tumor cell streaming in breast tumors requires the HGF/C-Met signaling pathway. Oncogene. 36 (19), 2680-2692 (2017).
- Jain, R. K. Normalizing tumor microenvironment to treat cancer: Bench to bedside to biomarkers. Journal of Clinical Oncology: Official Journal of The American Society of Clinical Oncology. 31 (17), 2205-2218 (2013).
- Wyckoff, J. B., et al. Direct visualization of macrophage-assisted tumor cell intravasation in mammary tumors. Ricerca sul cancro. 67 (6), 2649-2656 (2007).
- Baklaushev, V. P., et al. Modeling and integral X-ray, optical, and MRI visualization of multiorgan metastases of orthotopic 4T1 breast carcinoma in BALB/c Mice. Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 158 (4), 581-588 (2015).
- Baklaushev, V. P., et al. Luciferase Expression Allows Bioluminescence Imaging But Imposes Limitations on the Orthotopic Mouse (4T1) Model of Breast Cancer. Scientific Reports. 7 (1), 7715 (2017).
- Campagnola, P. J., Loew, L. M. Second-harmonic imaging microscopy for visualizing biomolecular arrays in cells, tissues and organisms. Nature Biotechnology. 21 (11), 1356-1360 (2003).
- Bredfeldt, J. S., et al. Computational segmentation of collagen fibers from second-harmonic generation images of breast cancer. Journal of Biomedical Optics. 19 (1), 16007 (2014).
- Liu, Y., et al. Fibrillar Collagen Quantification With Curvelet Transform Based Computational Methods. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, 198 (2020).
- Püspöki, Z., Storath, M., Sage, D., Unser, M. Transforms and Operators for Directional Bioimage Analysis: A Survey. Advances in Anatomy, Embryology, and Cell Biology. 219, 69-93 (2016).
- Saytashev, I., et al. Multiphoton excited hemoglobin fluorescence and third harmonic generation for non-invasive microscopy of stored blood. Biomedical Optics Express. 7 (9), 3449-3460 (2016).
- Harney, A. S., et al. Real-Time Imaging Reveals Local, Transient Vascular Permeability, and Tumor Cell Intravasation Stimulated by TIE2hi Macrophage-Derived VEGFA. Cancer Discovery. 5 (9), 932-943 (2015).
- von Au, A., et al. Circulating fibronectin controls tumor growth. Neoplasia. 15 (8), 925-938 (2013).
- Murgai, M., et al. KLF4-dependent perivascular cell plasticity mediates pre-metastatic niche formation and metastasis. Nature Medicine. 23 (10), 1176-1190 (2017).
- You, S., et al. Intravital imaging by simultaneous label-free autofluorescence-multiharmonic microscopy. Nature Communications. 9 (1), 2125 (2018).
- Yakimov, B. P., et al. Label-free characterization of white blood cells using fluorescence lifetime imaging and flow-cytometry: molecular heterogeneity and erythrophagocytosis. Biomedical Optics Express. 10 (8), 4220-4236 (2019).
- Arganda-Carreras, I., et al. Trainable Weka Segmentation: a machine learning tool for microscopy pixel classification. Bioinformatics. 33 (15), 2424-2426 (2017).
- Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease. Molecular and Cellular Biology. 12 (3), 954-961 (1992).
- Provenzano, P. P., et al. Collagen reorganization at the tumor-stromal interface facilitates local invasion. BMC Medicine. 4 (1), 38 (2006).
- Conklin, M. W., et al. Aligned collagen is a prognostic signature for survival in human breast carcinoma. The American Journal of Pathology. 178 (3), 1221-1232 (2011).
- Szulczewski, J. M., et al. In Vivo Visualization of Stromal Macrophages via label-free FLIM-based metabolite imaging. Scientific Reports. 6, 25086 (2016).
- Hoffmann, E. J., Ponik, S. M. Biomechanical Contributions to Macrophage Activation in the Tumor Microenvironment. Frontiers in Oncology. 10, 787 (2020).
- Pakshir, P., et al. Dynamic fibroblast contractions attract remote macrophages in fibrillar collagen matrix. Nature Communications. 10 (1), 1850 (2019).
- Dobrolecki, L. E., et al. Patient-derived xenograft (PDX) models in basic and translational breast cancer research. Cancer and Metastasis Reviews. 35 (4), 547-573 (2016).
- Shirshin, E. A., et al. Two-photon autofluorescence lifetime imaging of human skin papillary dermis in vivo: assessment of blood capillaries and structural proteins localization. Scientific Reports. 7 (1), 1171 (2017).
- Weigert, M., et al. Content-aware image restoration: pushing the limits of fluorescence microscopy. Nature Methods. 15 (12), 1090-1097 (2018).
