चूहों में गुर्दे के प्रत्यारोपण के लिए एक संशोधित सर्जिकल तकनीक
Summary
यह प्रोटोकॉल माउस किडनी प्रत्यारोपण की एक नई सर्जिकल तकनीक प्रस्तुत करता है जो एक संशोधित धमनी एनास्टोमोसिस रणनीति पर ध्यान केंद्रित करता है। एक संवहनी सीवन तकनीक जिसमें एक सरल और सुरक्षित मूत्रवाहिनी-मूत्राशय एनास्टोमोसिस विधि भी शामिल है, प्रस्तुत की जाती है। ये संशोधन ऑपरेशन के समय को कम करते हैं और माउस किडनी प्रत्यारोपण प्रक्रिया की सफलता दर में सुधार करते हैं।
Abstract
चूहों में गुर्दा प्रत्यारोपण एक जटिल और चुनौतीपूर्ण सर्जरी प्रक्रिया है। इस कार्रवाई के प्रमुख चरणों का प्रदर्शन करने वाले बहुत कम प्रकाशन हैं। इसलिए, यह लेख तकनीक का परिचय देता है और इस ऑपरेशन से जुड़े सर्जिकल चेतावनियों को इंगित करता है। इसके अलावा, पारंपरिक प्रक्रिया की तुलना में महत्वपूर्ण संशोधनों का प्रदर्शन किया जाता है। सबसे पहले, पेट की महाधमनी का एक पैच काटा जाता है और तैयार किया जाता है ताकि मूत्रवाहिनी धमनी सहित गुर्दे की धमनी के समीपस्थ विभाजन को दाता गुर्दे एन ब्लॉक के साथ एक साथ ट्रांसेक्ट किया जा सके। यह एक मूत्रवाहिनी परिगलन के जोखिम को कम करता है और मूत्र पथ रोड़ा के विकास से बचता है। दूसरे, संवहनी एनास्टोमोसिस की एक नई विधि का प्रदर्शन किया जाता है जो ऑपरेटर को गुर्दे के प्रत्यारोपण के बाद एनास्टोमोसिस के आकार को लचीला रूप से बढ़ाने या कम करने की अनुमति देता है। यह पोत सख्ती और intraabdominal रक्तस्राव के विकास से बचा जाता है। तीसरा, एक तकनीक जो नाजुक दाता मूत्रवाहिनी और प्राप्तकर्ता मूत्राशय के एनास्टोमोसिस को सक्षम बनाती है जो आघात का कारण नहीं बनती है, उसे दिखाया गया है। इस प्रोटोकॉल को अपनाने से ऑपरेशन का समय कम हो सकता है और प्राप्तकर्ता के मूत्राशय को नुकसान कम हो सकता है, जिससे प्राप्तकर्ता चूहों के लिए ऑपरेशन सफलता दर में काफी वृद्धि होती है।
Introduction
चूंकि Sakowitz et al. नेपहली बार 1973 में गुर्दे के प्रत्यारोपण के माउस मॉडल विकसित किए थे, इसलिए यह प्रत्यारोपण इस्केमिक चोट और एलोइम्यून अस्वीकृति के तंत्र का अध्ययन करने के साथ-साथ एलोग्राफ्ट अस्तित्व को लम्बा खींचने और संभवतः प्रतिरक्षाविज्ञानी सहिष्णुता प्राप्त करने के उद्देश्य से नए उपचार विकसित करने के लिए एक महत्वपूर्ण प्रयोगात्मक उपकरण के रूप में साबित हुआ है। हालांकि, सर्जिकल तकनीक जटिल और बहुत मांग करने वाली साबित हुई है, कभी-कभी संवहनी एनास्टोमोटिक सख्ती जैसी जटिलताएं होती हैं जो प्रीरेनल गैर-इम्यूनोलॉजिकल किडनी ट्रांसप्लांट विफलता2 के लिए अग्रणी होती हैं, इस्किमिया के कारण पोस्टरेनल विफलता और बाद में प्रत्यारोपित मूत्रवाहिनी के बाद के परिगलन, प्रत्यारोपित मूत्रवाह और / या प्राप्तकर्ता के मूत्र मूत्राशय के एनास्टोमोसिस की सख्ती होती है जिससे मूत्र बहिर्वाह में व्यवधान होता है। ये सभी कारण हैं कि चूहों में गुर्दे के प्रत्यारोपण को आगे विकसित नहीं किया गया है और इसलिए व्यापक रूप से उपयोग नहीं किया जाता है। संवहनी और मूत्र पथ की जटिलताओं के बिना एक प्रभावी और दीर्घकालिक स्थिर माउस किडनी प्रत्यारोपण मॉडल की स्थापना अभी भी गुर्दे की प्रतिरक्षा मध्यस्थता लेकिन संक्रामक रोगों पर ध्यान केंद्रित करने के साथ प्रत्यारोपण क्षेत्र में कई अध्ययनों के लिए अपूरणीय महत्वहै। इसके अलावा, फेफड़ों, हृदय और आंतों के प्रत्यारोपण 4,5 जैसे मुरीन मॉडल में अन्य अंग प्रत्यारोपणकी तुलना में, माउस किडनी प्रत्यारोपण मॉडल प्रमुख हिस्टोकॉम्पैटिबिलिटी एंटीजन असमानता 3,6 की स्थापना में भी दीर्घकालिक अस्तित्व का अध्ययन करने का मौका प्रदान करता है। यह भी दिखाया गया है कि दाता-प्राप्तकर्ता तनाव संयोजनों की एक ही सेटिंग में हृदय या गुर्दे जैसे विभिन्न अंग प्रत्यारोपण विभिन्न गतिशीलता और एलोग्राफ्ट अस्वीकृति3 की शुरुआत की विशेषता है। इसके अलावा, नेफ्रोलॉजिकल दृष्टिकोण से, यह सरल त्वचा प्रत्यारोपण प्रयोगों की तुलना में तीव्र और पुरानी अस्वीकृति की घटनाओं के संदर्भ में पैरेन्काइमल मध्यस्थता प्रतिरक्षा नियामक तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक अधिक उपयुक्त मॉडल है।
चूहों 3,7,8,9 में गुर्दे के प्रत्यारोपण की सर्जिकल तकनीक पर पिछली रिपोर्टों के आधार पर, हम यहां निम्नलिखित विश्वसनीय सुधारों को प्रदर्शित करते हैं जो हमारे समूह 10,11,12 के भीतर पिछले10 वर्षों के दौरान सफलतापूर्वक लागू किए गए हैं: सबसे पहले, मूत्रवाहिनी धमनी को सुरक्षित रूप से संरक्षित किया जाता है क्योंकि गुर्दे की धमनी को ब्लॉक में उच्छेदित किया जाता है। पेट महाधमनी के संबंधित भाग के साथ एक साथ. दूसरा, एक गांठरहित संवहनी एनास्टोमोसिस की एक नई, सरल और तेज तकनीक जिसमें एनास्टोमोसिस की अंतिम सिलाई पारंपरिक दृष्टिकोण की तरह ऊपरी टाई के अंत से बंधी नहीं है, लेकिन मुक्त रहती है। यह तकनीक पोत की सख्ती और इंट्राएब्डोमिनल रक्तस्राव से बचने के लिए गुर्दे के reperfusion के बाद एनास्टोमोसिस के आकार को बढ़ाने या कम करने में सक्षम बनाती है। तीसरा, 21 जी और 30 जी सिरिंज सुइयों का उपयोग प्राप्तकर्ता के मूत्राशय की दीवार में दाता मूत्रवाहिनी को प्रत्यारोपित करने के लिए एक सहायक पंचर मार्गदर्शक उपकरण के रूप में किया गया था, जो प्राप्तकर्ता के मूत्राशय को नुकसान को कम करता है और सख्ती मुक्त एनास्टोमोसिस के गठन की सुविधा प्रदान करता है।
इस रिपोर्ट में, हमने पारंपरिक, व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली तकनीक की तुलना संशोधित तकनीक के साथ भी की जो हमारी प्रयोगशाला में स्थापित है और गुर्दे ट्यूबलर शोष और गुर्दे के प्रत्यारोपण अंतरालीय ऊतक फाइब्रोसिस की डिग्री में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गया है। पिछले अध्ययनों में, हमने स्थानीय रक्तस्राव, घनास्त्रता, पोत एनास्टोमोसिस और जीवित रहने की दर के प्रदर्शन के लिए समय के संदर्भ में पारंपरिक विधि के साथ इस नई तकनीक के परिणामों की तुलना की। हमने स्थानीय घनास्त्रता की घटनाओं (1.1% बनाम 6.6%) की महत्वपूर्ण कटौती जैसे सुधार पाए, एनास्टोमोसिस प्रक्रिया के लिए एक कम समय, और एक अत्यधिक पुनरुत्पादक गुर्दे सिंजेनिक ग्राफ्ट दीर्घकालिक अस्तित्व (शास्त्रीय दृष्टिकोण के साथ 95% बनाम 84%) 10।
Protocol
Representative Results
Discussion
जबकि चूहों में त्वचा प्रत्यारोपण मॉडल सरल और एलोइम्यून अस्वीकृति की घटनाओं का अध्ययन करने के लिए प्रदर्शन करने में आसान है, हृदय16 और गुर्दे के प्रत्यारोपण10 के बाद अधिक विशेष रूप से ए?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम आवाज के साथ मदद के लिए डॉ Tiantian बाई टीम को धन्यवाद, चिकित्सा चित्रण में उसकी मदद के लिए मिस मियां पाओ. इस काम को जर्मन रिसर्च फाउंडेशन (DFG) द्वारा अंतर्राष्ट्रीय सहयोग (HO2581/4-1 से AH) और चीन के राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (NSFC; #81760291 to FJ) को बढ़ावा देने के लिए आंशिक रूप से समर्थित किया गया था।
Materials
| 30G-needles | Braun | 456300 | – |
| acepromazine | CP Pharma | Tranquisol P | – |
| Bepanthen eye ointment | Haus-Apotheke | PZN 01578675 | – |
| Bonn Micro Forceps | FST | 11083-07 | – |
| Box for insulation and oxygen supply device | RUSKINN | INVIV | – |
| C57BL/6J mice | Charles River. Germany | no catalog number | – |
| Carprofen | Zoetis | Rimadyl 50 mg/ml | – |
| CATHETER-FEP 26G | TERUMO | Surflo-W | – |
| Clip Applicator Forceps Style | FST | 18057-14 | – |
| Curved forceps | WPI | 14114-G | – |
| Cutasept skin disinfection | VWR | BODL980365 | – |
| Dehydrator | DIAPATH | Donatello | – |
| electrosurgical pen | Bovie | CHANGE-A-TIP | – |
| Embedding machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | – |
| Ethanol | Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD | 100092683 | – |
| Frozen platform | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | – |
| gauze pads, cotton swabs | Lohmann-Rauscher | 13353 | – |
| Glass slide | Servicebio | G6004 | – |
| HE dye solution set | Servicebio | G1003 | – |
| Heating mat | THERMO MAT PRO 30W | HTP-30 | – |
| hemostatic sponge | CuraSpon | J1276A | – |
| heparine-solution | Haus-Apotheke | PZN 03029820 | – |
| ice box | PETZ | No Catalog Number available | – |
| Imaging system | Nikon | Nikon DS-U3 | – |
| Inhalation anesthesia device | GROPPLER | BKGM 0616 | – |
| isoflurane | CP Pharma | Isofluran CP 1 ml/ml | – |
| ketamine | Zoetis | no catalog numer | – |
| Masson dye solution set | Servicebio | G1006 | – |
| metamizole | WDT | no catalog numer | – |
| Micro scissors | FST | 15000-00,15000-10 | – |
| Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm | FST | 18055-06 | – |
| Microscope | Leica | LEICAMZ6 | – |
| Microscope light | SCHOTT | KL2500LED | – |
| Neutral gum | SCRC | 10004160 | – |
| Oven | Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., Ltd | GFL-230 | – |
| Pathology slicer | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | – |
| Saline solution (NaCl 0.9 %) | Haus-Apotheke | PZN 06178437 | – |
| scissors | Peha Instruments | 991083/4 | – |
| Slides | Servicebio | – | |
| small Petri dish | Sarstedt | 8,33,900 | – |
| straight forceps | WPI | 14113-G | – |
| surgical tape | BSN | 4120 | – |
| Suture Tying Forceps – 10 cm | FST | 18025-10 | – |
| Sutures(10-0) | Medtronic | N2540 | – |
| Sutures(4-0) | ETHILON | V4940H | – |
| Sutures(7-0) | ETHILON | 1647H | – |
| Syringe (0,3 mL) | BD | 324826 | – |
| Syringe (1 mL) | BD | 320801 | – |
| Tissue spreader | Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd | KD-P | – |
| Upright optical microscope | Nikon | Nikon Eclipse E100 | – |
| xylazine | Bayer | Rompun | – |
| Xylene | Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD | 10023418 | – |
Riferimenti
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