Summary

सचेत चूहे के सबक्लेवियन नस से दोहराए जाने वाले रक्त नमूने

Published: February 09, 2022
doi:

Summary

वर्तमान प्रोटोकॉल चूहों में सबक्लेवियन नस से रक्त एकत्र करने के लिए एक सरल और कुशल विधि का वर्णन करता है। यह संज्ञाहरण के बिना तेजी से, समय पर और आसानी से पहचाने जाने योग्य नमूनाकरण को सक्षम बनाता है और दोहराए जाने वाले नमूना संग्रह के माध्यम से उच्च गुणवत्ता वाला रक्त प्राप्त करता है।

Abstract

चूहों का व्यापक रूप से फार्माकोकाइनेटिक्स (पीके) और टॉक्सिकोकाइनेटिक (टीके) अध्ययनों में उपयोग किया जाता है जिन्हें दवा जोखिम का पता लगाने के लिए विशिष्ट समय बिंदुओं पर एक निश्चित मात्रा में रक्त एकत्र करने की आवश्यकता होती है। चूहे के रक्त नमूना विधि प्लाज्मा की गुणवत्ता निर्धारित करती है और आगे परीक्षण के परिणामों की सटीकता को प्रभावित करती है। इस प्रोटोकॉल में वर्णित सबक्लेवियन नस रक्त संग्रह विधि पीके और टीके परीक्षणों की जरूरतों को पूरा करने के लिए जानवरों की सचेत स्थिति में बार-बार रक्त के नमूने एकत्र करती है। संयम हैंडलिंग के कौशल और सुई चीरा की उचित प्रक्रिया रक्त संग्रह की सफलता दर सुनिश्चित करती है। प्लाज्मा की गुणवत्ता सुनिश्चित करते हुए और साथ ही पशु कल्याण के लिए खानपान करते हुए इसे संचालित करना आसान है। हालांकि, इस विधि के लिए कुशल ऑपरेशन की आवश्यकता होती है, और एक अनुचित जानवरों की कमजोरी, दर्द, लंगड़ापन और यहां तक कि मृत्यु दर का कारण बन सकता है। वर्तमान विधि का उपयोग टीके के साथ स्प्राग डॉवले (एसडी) चूहों में 4 सप्ताह के मौखिक विषाक्तता अध्ययन के लिए परीक्षण सुविधा में किया गया है। 24 घंटे के भीतर एकत्र किए गए रक्त की अधिकतम मात्रा जानवर के कुल रक्त के 20% से अधिक नहीं थी। जानवरों के शरीर का वजन पुरुषों और महिलाओं के लिए 200 ग्राम से अधिक था। डेटा से पता चला है कि जानवरों के शरीर का वजन हर हफ्ते लगातार बढ़ता है, और दोहराए जाने वाले नमूना संग्रह के बाद नैदानिक अवलोकन सामान्य था।

Introduction

मानव उपयोग के लिए फार्मास्यूटिकल्स के पंजीकरण के लिए तकनीकी आवश्यकताओं के सामंजस्य पर अंतर्राष्ट्रीय सम्मेलन (आईसीएच) दिशानिर्देश1 और राष्ट्रीय चिकित्सा उत्पाद प्रशासन (एनएमपीए) दिशानिर्देश2 के अनुसार, टॉक्सिकोकाइनेटिक (टीके) अध्ययन में चूहों के रक्त संग्रह समय बिंदुओं की संख्या को गतिशील दवा जोखिम मूल्यांकन की आवश्यकताओं को पूरा करने की आवश्यकता है। एक चूहे के रक्त की अनुमानित कुल मात्रा शरीर के वजन का 55-70 एमएल /किलोग्राम है। खुराक के बाद संग्रह समय बिंदु आम तौर पर 30 मिनट के भीतर गहन होते हैं और उसके बाद कम हो जाते हैं, औरनियमित परीक्षण में 48 घंटे के भीतर दस से अधिक रक्त के नमूने एकत्र करने की आवश्यकता होती है। उदाहरण के लिए, मौखिक रूप से प्रशासित दवाओं के टीके अध्ययन में रक्त के नमूने 12-समय बिंदुओं (0 मिनट, 5 मिनट, 10 मिनट, 15 मिनट, 30 मिनट, 45 मिनट, 1 घंटे, 2 घंटे, 3 घंटे, 4 घंटे, 8 घंटे और 12 घंटे) पर एकत्र किए जाते हैं। शोधकर्ताओं को टीके परीक्षण 5 के लिए उच्च गुणवत्ता वाले प्लाज्मा प्राप्त करने के लिए चूहों में बार-बार 200-250 μL रक्त एकत्र करना चाहिए

चूहों में रक्त संग्रह साइटों में पूंछ रक्त वाहिकाएं, रेट्रो-ऑर्बिटल प्लेक्सस नस, सबमैंडिबुलर नस, हृदय, पेट महाधमनी6, और इतने पर शामिल हैं। उनमें से, चूहों की पुच्छल नस से रक्त संग्रह एक अक्सर इस्तेमाल की जाने वाली विधि है, जिसके लिए अनुभवी और कुशल ऑपरेटरों की आवश्यकता होती है 7,8। रेट्रो-ऑर्बिटल प्लेक्सस नस से रक्त एकत्र करना कम जटिल है; हालांकि, इस विधि की सिफारिश नहीं की जाती है क्योंकि यह चूहों की दृष्टि को नुकसान पहुंचा सकती है9, और हृदय और पेट की महाधमनी से रक्त केवल अंतिम रक्त नमूने10 के लिए उपयुक्त है। एक सचेत चूहे में सबमैंडिबुलर नस से रक्त एकत्र करने की एक और विधि को अधिक जटिलताओं के परिणामस्वरूप दिखाया गया है और अपर्याप्त रक्त नमूने की गुणवत्ता का पता चलाहै। इसलिए, शोधकर्ता नमूनाकरण की कठिनाई को कम करने के लिए जानवर को एनेस्थेटाइज कर सकते हैं। फिर भी, संज्ञाहरण भी प्रयोग की लागत को बढ़ाता है, और अधिक गंभीरता से, यह चूहों की चयापचय स्थिति को प्रभावित करेगा वर्तमान प्रोटोकॉल संज्ञाहरण के बिना चूहों की उप-लेवियन नसों में रक्त एकत्र करने की एक त्वरित और सीधी विधि का उपयोग करता है, जिससे सटीक स्थिति और द्विपक्षीय वैकल्पिक रक्त संग्रह को समय पर और दोहराए गए तरीके से उच्च गुणवत्ता वाले नमूने प्राप्त करने की अनुमति मिलती है।

Protocol

वर्णित सभी पशु प्रयोगों को गुआंग्डोंग ल्यूविन फार्मास्युटिकल रिसर्च इंस्टीट्यूट कं, लिमिटेड के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) द्वारा अनुमोदित किया गया था। प्रयोगशाला जानवरों की देख…

Representative Results

सबक्लेवियन नस से अच्छे प्लाज्मा नमूने पारभासी हल्के पीले थे (चित्रा 4, बाईं ट्यूब)। अनुचित रक्त संग्रह या हेरफेर के परिणामस्वरूप हेमोलिसिस हुआ (चित्रा 4, दाईं ट्यूब)। पर?…

Discussion

सबक्लेवियन नसों से रक्त एकत्र करने के कुछ लाभ हैं। (1) चूंकि रक्त संग्रह की साइट आसानी से अलग हो जाती है, और चूहों की विभिन्न मुद्राओं के कारण शिरापरक जाल नियमित नहीं होता है, वर्णित विधि चूहों के स्थिर और …

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

इस शोध को गुआंग्डोंग प्रांतीय कुंजी प्रयोगशाला ऑफ ड्रग गैर-नैदानिक मूल्यांकन और अनुसंधान (संख्या 2018 बी 030323024) और गुआंग्डोंग कुंजी अनुसंधान और विकास योजना (संख्या 2019 बी 02020202001), गुआंगज़ौ मौलिक और अनुप्रयोग फाउंडेशन अनुसंधान परियोजना (संख्या 202002030249 और संख्या 202002030156) के प्रमुख कार्यक्रम “नई दवा निर्माण” द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

Materials

1.0 mL syringe (with needle, 26 G, 0.45 mm x 15.5 mm) Jiangxi Hongda Medical Equipment Group LTD.(Nanchang, Jiangxi Province, China) 20210629
75% alcohol Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd. (Dezhou, Shandong Province, China) 210717
Animal source Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. grade: SPF laboratory animal production license number: SCXK (Hunan) 2019-0004, laboratory animal quality certificate number: 4307272101972847
Cotton swab Caoxian Hualu Sanitary Materials Co., Ltd.(Heze, Shandong Province, China) 20210301 Need to be sterilized.
Electric shaver Shenzhen Codos Electric Appliance Co. , Ltd.(Shenzhen, Guangdong Province, China) CP-6800
EP tube, 1.5 mL Genetimes ExCell Technology,Inc.(Shanghai, China)
Heparin sodium (2 mL:12500 IU) Tianjin biochem pharmaceutical Co.,Ltd(Tianjing, China) 51200702 Prepare 1250 IU/mL heparin sodium solution. Add heparin sodium solution into the EP tube in advance and make it evenly distributed on the wall of the EP tube, and dry it at 60°C for use. 
Labtip (volume range 5-200 μL) Thermo Fisher Scientific Oy 94300120
Low speed refrigerated centrifuge Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.(Changsha, Hunan Province, China) L535R
Pipette gun (20-200 μL) BRAND 12N92305
Rats (SD) Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. (Changsha, Hunan Province, China)
Sharp tool container Taizhou Huangyan Yikang Plastic Factory (Taizhou, Zhejiang Province, China)
Eye drop This reagent is not a commodity and the manufacturer requires it to be tested. In the principle of confidentiality, the manufacturer and model cannot be provided.

Riferimenti

  1. Shravya, K., et al. International conference on harmonization of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use. ICH M2 EWG. Electronic common technical document. , (2014).
  2. Tan, Y., et al. . The China Food and Drug Administration (CFDA). , (2015).
  3. McGuill, M. W., Andrew, N. R. Biological effects of blood loss: Implications for sampling volumes and techniques. ILAR Journal. 31 (4), 5-20 (1989).
  4. Aguilar-Mariscal, H., et al. Oral pharmacokinetics of meloxicam in the rat using a high-performance liquid chromatography method in micro-whole-blood samples. Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology. 29 (9), 587-592 (2007).
  5. Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
  6. JoVE. JoVE Science Education Database. Blood Withdrawal I. JoVE. , (2021).
  7. Yang, H., et al. Subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats. Journal of Visualized Experiments. (141), e58499 (2018).
  8. Zou, W., et al. Repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system. Journal of Visualized Experiments. (130), e55852 (2017).
  9. Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology & Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
  10. Itziar, F., Arantza, P., Nahia, D., Virginia, P., Juan, R. Clinical biochemistry parameters in C57BL/6J mice after blood collection from the submandibular vein and retroorbital plexus. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 49 (2), 202-206 (2010).
  11. Heimann, M., Roth, D. R., Ledieu, D., Pfister, R., Classen, W. Sublingual and submandibular blood collection in mice: A comparison of effects on body weight, food consumption and tissue damage. Laboratory Animals. 44 (4), 352-358 (2010).
  12. Wren-Dail, M. A., et al. Effect of isoflurane anesthesia on circadian metabolism and physiology in rats. Comparative Medicine. 67 (2), 138-146 (2017).
  13. National Institute of Health. . Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. 8th edition. , (2011).
  14. Lee, G., Goosens, K. A. Sampling blood from the lateral tail vein of the rat. Journal of Visualized Experiments. (99), e52766 (2015).
  15. Diehl, K., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).
  16. Casal, D., et al. Functional and physiological methods of evaluating median nerve regeneration in the rat. Journal of Visualized Experiments. (158), e59767 (2020).
check_url/it/63439?article_type=t

Play Video

Citazione di questo articolo
Wang, L., Guo, J., Zhong, X., Zhang, J., Sheng, Y., Lai, Q., Song, H., Yang, W. Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat. J. Vis. Exp. (180), e63439, doi:10.3791/63439 (2022).

View Video