L'obiettivo di questo protocollo è quello di caratterizzare un nuovo modello di neurodegenerazione glaucomatosa basato sulla cauterizzazione termica a 360° del plesso vascolare limbare, inducendo ipertensione oculare subacuta.
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Articolo metodologico
Cauterizzazione a cerchio completo del plesso vascolare limbare per il glaucoma indotto chirurgicamente nei roditori
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il glaucoma, la seconda causa di cecità in tutto il mondo, è un gruppo eterogeneo di disturbi oculari caratterizzati da danni strutturali al nervo ottico e degenerazione delle cellule gangliari retiniche (RGC), con conseguente disfunzione visiva interrompendo la trasmissione delle informazioni visive dall'occhio al cervello. L'elevata pressione intraoculare è il fattore di rischio più importante; Pertanto, diversi modelli di ipertensione oculare sono stati sviluppati nei roditori con approcci genetici o sperimentali per indagare le cause e gli effetti della malattia. Tra questi, sono stati segnalati alcuni limiti come l'invasività chirurgica, l'inadeguata valutazione funzionale, la necessità di una formazione approfondita e l'estensione altamente variabile del danno retinico. Il presente lavoro caratterizza un metodo semplice, a basso costo ed efficiente per indurre l'ipertensione oculare nei roditori, basato sulla cauterizzazione a bassa temperatura e a cerchio completo del plesso vascolare limbare, una componente importante del drenaggio dell'umore acqueo. Il nuovo modello fornisce un'ipertensione oculare subacuta tecnicamente facile, non invasiva e riproducibile, associata a RGC progressiva e degenerazione del nervo ottico, e un tasso di recupero clinico post-operatorio unico che consente studi funzionali in vivo con metodi sia elettrofisiologici che comportamentali.
Introduzione
La letteratura medica comprende il glaucoma come un gruppo eterogeneo di neuropatie ottiche caratterizzate da una progressiva degenerazione delle cellule gangliari retiniche (RGC), dendriti, soma e assoni, con conseguente coppettazione strutturale (scavo) del disco ottico e deterioramento funzionale del nervo ottico, che porta all'amaurosi nei casi non controllati interrompendo la trasmissione delle informazioni visive dall'occhio al cervello1. Il glaucoma è attualmente la causa più comune di cecità irreversibile in tutto il mondo, e si prevede che raggiungerà circa 111,8 milioni di persone nel 20402, influenzando così p....
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Protocollo
Tutte le procedure sono state eseguite in conformità con la Dichiarazione per l'Uso degli Animali nella Ricerca Oftalmica e Visiva dell'Associazione per la Ricerca sulla Visione e l'Oftalmologia (ARVO) e approvate dal Comitato Etico per l'Uso degli Animali nella Sperimentazione Scientifica del Centro di Scienze della Salute dell'Università Federale di Rio de Janeiro (protocollo 083/17). Nel presente lavoro sono stati utilizzati ratti Lister Hooded di entrambi i sessi, di età compresa tra 2 e 3 mesi e del peso di 180-320 g. Tuttavia, la procedura può essere adattata a diversi ceppi di ratti di varie fasce d'età.
1. Chirurgia dell'ipert....
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Risultati
Le variabili quantitative sono espresse come media ± errore standard della media (SEM). Fatta eccezione per il confronto delle dinamiche IOP tra OHT e gruppi di controllo (Figura 1F), l'analisi statistica è stata eseguita utilizzando l'ANOVA a due vie seguita dal test di confronto multiplo di Sidak. Un valore p < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.
La Figura 1 illustra le fasi chirurgiche del modello di cauteriz.......
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Discussione
La cauterizzazione del plesso limbare (LPC) è un nuovo modello post-trabecolare con il vantaggio di colpire strutture vascolari facilmente accessibili che non richiedono la dissezione congiuntivale o tenone17,28. A differenza del modello di cauterizzazione delle vene a vortice, un rinomato modello OHT basato sulla compromissione chirurgica del drenaggio venoso coroideo, non si prevede che la congestione venosa influenzi l'aumento della IOP nel modello LPC, poiché.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo i nostri tecnici di laboratorio José; Nilson dos Santos, Daianne Mandarino Torres, José Francisco Tibúrcio, Gildo Brito de Souza e Luciano Cavalcante Ferreira. Questa ricerca è stata finanziata da FAPERJ, CNPq e CAPES.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Acetone | Isofar | 201 | Utilizzato per la preparazione di tessuti per microscopia elettronica (fase 5) |
| Elettrodo attivo per elettroretinografia | Hansol Medical | Co-Ago | in acciaio inossidabile 0,25 mm & volte; 15 mm |
| Anestalcon | Novartis Biociê ncias S/A | MS-1.0068.1087 | Proxymetacaine cloridrato 0,5% |
| Cloruro di calcio | Vetec | 560 | Utilizzato per la preparazione di tessuti per microscopia elettronica (fase 5) |
| Cauteria Punta fine a bassa temperatura 10/bx | Bovie Medical Corporation | AA00 | Cauterio oftalmico a bassa temperatura |
| Cetamin | Syntec do Brasil Ltda | 000200-3-000003 | Ketamina cloridrato 10% |
| DAKO | Dako North America | S3023 | Mezzo di montaggio antisbiadimento |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific | 28718-90-3 | diamidino-2-fenilindo; controcolorante nucleare fluorescente blu; emissione a 452± 3 nm |
| Ecofilm | Cristá lia Produtos Quí micos Farmacê uticos Ltda | MS-1.0298.0487 | Carmellosa sodica 0,5% |
| EPON Resina | Polysciences, Inc. | - | Resina epossidica utilizzata per microscopia elettronica, composta da una miscela di quattro reagenti: Resina Poly/Bed 812 (CAT#08791); DDSA - Anidride dodecenilsuccinica (CAT#00563); NMA - Anidride metilica nadica (CAT#00886); DMP-30 - 2,4,6-tris(dimetilamminometil)fenolo (CAT#00553) |
| microscopia elettronica | glutaraldeide | 16110 | Utilizzato per la preparazione di tessuti per microscopia elettronica (fase 5) |
| Hyabak | Uniã o Quí mica Farmacê utica Nacional S/A | MS-8042140002 | Sodio ialuronato 0,15% |
| Icare Tonolab | Icare Finland Oy | TV02 (numero di modello) | Rimbalzo portatile tonometro |
| IgG asino anticorpo anti-topo + Alexa Fluor 555 | Thermo Fisher Scientific | A31570 | Soluzione anticorpale secondaria |
| Monitor LCD 23 pollici | Samsung Electronics Co. Ltd. | S23B550 | Modello LS23B550, per la registrazione dell'elettroretinogramma |
| LSM 510 Meta | Carl Zeiss-Microscopio | confocale per epifluorescenza | |
| Maxiflox | Cristá lia Produtos Quí micos Farmacê uticos Ltda | MS-1.0298.0489 | Ciprofloxacina 3,5 mg/g |
| MEB-9400K | Nihon Kohden | Corporation-Sistema | per la registrazione dell'elettroretinogramma |
| monoclonale IgG1 di topo anti-Brn3a | MilliporeSigma | MAB-1585 | Brn3a soluzione di anticorpi primari |
| Neuropack Manager v08.33 | Nihon Kohden | Corporation-Software | per l'elaborazione del segnale dell'elettroretinogramma |
| Optomotry | CerebralMeccanica-Sistema | per l'analisi della risposta optomotoria | |
| Microscopia elettronica Tetrossido di osmio | Scienze della microscopia elettronica | 19100 | Utilizzato per la preparazione dei tessuti al microscopio elettronico (fase 5) |
| Ferrocianuro di potassio | Scienze della microscopia elettronica | 20150 | Utilizzato per la preparazione dei tessuti per microscopia elettronica (fase 5) |
| Elettrodi di riferimento e di terra per elettroretinografia | Chalgren Enterprises | 110-63 | Aghi in acciaio inossidabile 0,4 mm e volte; 37 mm Tampone |
| di cacodilato di sodio | Microscopia elettronica Scienze | 12300 | Utilizzato per la preparazione di tessuti per microscopia elettronica (fase 5) |
| Ster MD | Uniã o Quí mica Farmacê utica Nacional S/A | MS-1.0497.1287 | Acetato di prednisolone 0,12% |
| Terolac | Cristá lia Produtos Quí micos Farmacê uticos Ltda | MS-1.0497.1286 | Ketorolac trometamolo 0,5% |
| Terramicina | Laborató rios Pfizer Ltda | MS-1.0216.0024 | Ossitetraciclina cloridrato 30 mg/g + polimixina B 10.000 U/g |
| Tono-Pen XL | Reichert Technologies | 230635 | Tonometro portatile ad applanazione digitale |
| TO-PRO-3 | Thermo Fisher Scientific | T3605 | Controcolorante nucleare fluorescente rosso lontano; emissione a 661 nm |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | 9036-19-5 | Tensioattivo non ionico |
| Acetato di uranile | Microscopia elettronica Scienze | 22400 | Utilizzato per la preparazione di tessuti per microscopia elettronica (fase 5) |
| Xilazin | Syntec do Brasil Ltda | 7899 | Xilazina cloridrato 2% |
| Carl Zeiss-Stereomicroscopio | per chirurgia e dissezione retinica |
Riferimenti
- Weinreb, R. N., Aung, T., Medeiros, F. A. The Pathophysiology and Treatment of Glaucoma A Review. JAMA. 311 (8), 1901-1911 (2014).
- Tham, Y. C., et al. Global prevalence of glaucoma and projections of glaucoma burden through 2040: A systematic ....
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Ristampe e permessi
