ओकुलर सतह सूजन का प्रेरण और शामिल ऊतकों का संग्रह
Summary
ओकुलर सतह की सूजन ओकुलर सतह के ऊतकों को नुकसान पहुंचाती है और आंख के महत्वपूर्ण कार्यों से समझौता करती है। वर्तमान प्रोटोकॉल ओकुलर सूजन को प्रेरित करने और मेबोमियन ग्रंथि शिथिलता (एमजीडी) के माउस मॉडल में समझौता किए गए ऊतकों को इकट्ठा करने के लिए एक विधि का वर्णन करता है।
Abstract
नेत्र संबंधी सतह रोगों में विकारों की एक श्रृंखला शामिल है जो कॉर्निया, नेत्रश्लेष्मला और संबंधित ओकुलर सतह ग्रंथि नेटवर्क के कार्यों और संरचनाओं को परेशान करती है। मेबोमियन ग्रंथियां (एमजी) लिपिड का स्राव करती हैं जो एक आवरण परत बनाती हैं जो आंसू फिल्म के जलीय हिस्से के वाष्पीकरण को रोकती है। न्यूट्रोफिल और बाह्य डीएनए जाल एलर्जी आंखों की बीमारी के माउस मॉडल में एमजी और ओकुलर सतह को आबाद करते हैं। समेकित न्यूट्रोफिल एक्स्ट्रासेल्युलर ट्रैप (एजीएनईटी) बाह्य क्रोमैटिन से बना एक जाल जैसा मैट्रिक्स तैयार करता है जो एमजी आउटलेट और एमजी डिसफंक्शन की स्थिति को रोकता है। यहां, ओकुलर सतह सूजन और एमजी डिसफंक्शन को प्रेरित करने के लिए एक विधि प्रस्तुत की गई है। ओकुलर सतह से संबंधित अंगों को इकट्ठा करने की प्रक्रियाएं, जैसे कॉर्निया, नेत्रश्लेष्मला और पलकें, विस्तार से वर्णित हैं। प्रत्येक अंग को संसाधित करने के लिए स्थापित तकनीकों का उपयोग करते हुए, एमजी डिसफंक्शन की प्रमुख रूपात्मक और हिस्टोपैथोलॉजिकल विशेषताओं को भी दिखाया गया है। ओकुलर एक्स्यूडेट्स ओकुलर सतह की भड़काऊ स्थिति का आकलन करने का अवसर प्रदान करते हैं। ये प्रक्रियाएं प्रीक्लिनिकल स्तर पर सामयिक और प्रणालीगत विरोधी भड़काऊ हस्तक्षेप की जांच को सक्षम करती हैं।
Introduction
पलक झपकना कॉर्निया पर बिखरे हुए चिकनी आंसू फिल्म को फिर से भर देता है। ओकुलर सतह एपिथेलिया ओकुलर सतह पर आंसू फिल्म के वितरण और सही अभिविन्यास की सुविधा प्रदान करता है। म्यूसिन को कॉर्निया और नेत्रश्लेष्मला उपकला कोशिकाओं द्वारा प्रदान किया जाता है ताकि आंखों की सतह पर लैक्रिमल ग्रंथियों से आने वाली आंसू फिल्म के जलीय भाग को स्थिति में मदद मिल सके। अंत में, एमजी लिपिड का स्राव करता है जो एक कवर परत बनाता है जो आंसू फिल्म 1,2,3 के जलीय भाग के वाष्पीकरण को रोकता है। इस तरह, सभी ओकुलर अंगों के समन्वित कार्य ओकुलर सतह को हमलावर रोगजनकों या चोट से बचाते हैं और किसी भी दर्द या असुविधा के बिना क्रिस्टल स्पष्ट दृष्टि का समर्थन करते हैं।
एक स्वस्थ ओकुलर सतह में, ओकुलर फ्लोइंग डिस्चार्ज या आंखों की गठिया धूल, मृत उपकला कोशिकाओं, बैक्टीरिया, बलगम और प्रतिरक्षा कोशिकाओं को दूर करती है। समेकित न्यूट्रोफिल एक्स्ट्रासेल्युलर ट्रैप (एजीएनईटी) बाह्य क्रोमैटिन से बना एक जाल जैसा मैट्रिक्स तैयार करते हैं और इन घटकों को आंखों के गठिया में शामिल करते हैं। एजीजीएनईटी प्रो-भड़काऊ साइटोकिन्स और केमोकाइन्स के प्रोटियोलिटिक क्षरण द्वारासूजन को हल करते हैं। हालांकि, जब वे निष्क्रिय हो जाते हैं, तो ये असामान्य एग्जेएनईटी कोविड-195, पित्त पथरी6 और सियालोलिथियासिस7 में संवहनी अवरोधन जैसी बीमारियों के रोगजनन को चलाते हैं। इसी तरह, ओकुलर सतह पर एजीएनईटी एक सुरक्षात्मक भूमिका निभाते हैं और अत्यधिक उजागर सतह 8 की सूजन को हल करने में योगदान करतेहैं। या तो एक अतिरंजित गठन या ओकुलर सतह में एजीएनईटी की कमी आंसू फिल्म स्थिरता को खराब कर सकती है और / या कॉर्नियल घावों, नेत्रश्लेष्मलाशोथ और सूखी आंख की बीमारी का कारण बन सकती है। उदाहरण के लिए, एमजी की रुकावट सूखी आंख की बीमारी का एक प्रमुख कारण है। एजीजीएनईटी को एमजी की नलिकाओं से लिपिड स्राव के प्रवाह को प्लग करने और मेबोमियन ग्रंथि शिथिलता (एमजीडी) का कारण बनने के लिए भी जाना जाता है। एजीजीएनईटी द्वारा एमजी छिद्रों की भीड़ ओकुलर सतह और प्रतिगामी बोतलबंद तरल पदार्थ को ढंकने वाले फैटी द्रव की कमी का कारण बनती है, जिसके परिणामस्वरूप ग्रंथि समारोह की शिथिलता और एसिनार क्षति होती है। इस शिथिलता के परिणामस्वरूप आंसू फिल्म वाष्पीकरण, पलकों पर मार्जिन का फाइब्रोसिस, आंखों की सूजन और एमजी10,11 को हानिकारक नुकसान हो सकता है।
मनुष्यों में एमजीडी की पैथोलॉजिकल प्रक्रिया की नकल करने के लिए वर्षों से कई पशु मॉडल विकसित किए गए हैं। उदाहरण के लिए, 1 वर्ष की आयु के सी 57बीएल / 6 चूहों ने सूखी आंख रोग (डीईडी) और एमजीडी पर उम्र से संबंधित प्रभावों का अध्ययन करने में मदद की है, जो 50 वर्ष औरउससे अधिक उम्र के रोगियों में ओकुलर रोग विकृति को दर्शाता है। इसके अलावा, खरगोश औषधीय हस्तक्षेप के प्रभावों की जांच के लिए उपयुक्त मॉडल हैं। इसलिए, खरगोशों में एमजीडी को प्रेरित करने की सूचना या तो एपिनेफ्रीन के सामयिक प्रशासन या 13-सीआईएस-रेटिनोइक एसिड (आइसोट्रेटिनॉइन) 15,16,17,18,19 के प्रणालीगत परिचय द्वारा दी गई है।
यद्यपि ये पशु मॉडल एमजीडी के पैथोफिज़ियोलॉजी में योगदान देने वाले विभिन्न कारकों को निर्धारित करने के लिए पर्याप्त थे, वे उनके उपयोग में प्रतिबंधित थे। उदाहरण के लिए, उम्र से संबंधित एमजीडी का मुराइन मॉडल केवल पुराने वयस्कों में तत्वों को समझने के लिए आदर्श था, और इसलिए, खरगोश ओकुलर सतह रोगों का अध्ययन करने के लिए सबसे उपयुक्त पशु मॉडल प्रतीत होते हैं, क्योंकि वे कई पैथोफिजियोलॉजिकल तंत्र की जांच को सक्षम करते हैं। हालांकि, ओकुलर सतह पर प्रोटीन का पता लगाने के लिए व्यापक विश्लेषणात्मक उपकरणों की कमी के कारण और क्योंकि खरगोश जीनोम के कई हिस्से अननोटेटेड हैं, वे जांच के लिए सीमित हैं20,21।
इसके अलावा, सूखी आंख की बीमारी के रोगजनन की जांच करने के लिए उपयोग किए जाने वाले इन पशु मॉडलों ने विकार के प्रतिरक्षात्मक हाथ का विश्लेषण करने के लिए पर्याप्त विवरण प्रदान नहीं किया जो ओकुलर सतह की सूजन को उकसाता है। तदनुसार, रेयेस एट अल द्वारा विकसित एमजीडी के मुराइन मॉडल ने चूहों में एलर्जी आंखों की बीमारी और मनुष्यों में एमजीडी के बीच एक संबंध दिखाया और प्रतिरोधी एमजीडी21 के लिए जिम्मेदार प्रतिरक्षा एटियलजि पर प्रकाश डाला। यह मॉडल एलर्जी आंखों की बीमारी को टीएच 17 प्रतिक्रिया के साथ जोड़ता है जो न्यूट्रोफिल को नेत्रश्लेष्मला और पलक में भर्ती करता है, जिससे एमजीडी और पुरानी ओकुलर सूजन21 होती है। इस मुराइन मॉडल में एमजीडी और ओकुलर सूजन का प्रेरण चल रही प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया21 द्वारा संचालित स्थानीय सूजन के विकास के दौरान अपस्ट्रीम घटनाओं की जांच के लिए एक मूल्यवान उपकरण है। वर्तमान प्रोटोकॉल ऑब्सट्रक्टिव एमजीडी के साथ ओकुलर सतह सूजन का वर्णन करता है। इस विधि में, चूहों को प्रतिरक्षित किया जाता है और, 2 सप्ताह के बाद, 7 दिनों के लिए इम्यूनोजेन के साथ ओकुलर सतह पर चुनौती दी जाती है। इसके अलावा, तीव्र सूजन और कॉर्निया, नेत्रश्लेष्मला और पलकों के विच्छेदन के दौरान ओकुलर एक्स्यूडेट और संबंधित ओकुलर अंगों को अलग करने के चरणों का वर्णन किया गया है।
Protocol
Representative Results
Discussion
मेइबोमियन ग्रंथियों का तैलीय स्राव एकस्वस्थ आंख के लिए बहुत महत्वपूर्ण है। हालांकि, एकत्रित न्यूट्रोफिल एक्स्ट्रासेल्युलर ट्रैप (एजीएनईटी) द्वारा इन वसामय ग्रंथियों की रुकावट जो दोनों पल?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम आंशिक रूप से जर्मन रिसर्च फाउंडेशन (डीएफजी) 2886 पेंडोरा प्रोजेक्ट-नंबर बी 3 द्वारा समर्थित था; एससीएचए 2040/1-1; एमयू 4240/2-1; सीआरसी 1181 (सी 03); टीआरआर 241 (बी 04), एच 2020-एफटोपेन-2018-2020 परियोजना 861878, और वोक्सवैगन-स्टिफटंग (अनुदान 97744) द्वारा एमएच को।
Materials
| 1x PBS | Gibco | ||
| Aluminium Hydroxide | Imject alum Adjuvant | 77161 | 40 mg/ mL Final Concentration: in vivo: 1 mg/ 100 µL |
| C57Bl/6 mice, aged 7–9 weeks | Charles River Laboratories | ||
| Calcium | Carl roth | CN93.1 | 1 M Final Concentration: 5 mM |
| Curved forceps | FST by Dumont SWITZERLAND | 5/45 11251-35 | |
| Fine sharp scissor | FST Stainless steel, Germany | 15001-08 | |
| Laminar safety cabinet | Herasafe | ||
| Macrophotography Camera | Canon | EOS6D | |
| Macrophotography Camera (without IR filter) | Nikon | D5300 | |
| Mnase | New England biolabs | M0247S | 2 x 106 gel U/mL |
| Multi-analyte flow assay kit (Custom mouse 13-plex panel) | Biolegend | CLPX-200421AM-UERLAN | |
| NaCl 0,9% (Saline) | B.Braun | ||
| Ovalbumin (OVA) | Endofit, Invivogen | 9006-59-1 | 10 mg/200 µL in saline |
| Pertussis toxin | ThermoFisher Scientific | PHZ1174 | 50 µg/ 500 µL in saline Final Concentration: in vivo: 100 µg/ 100 µL |
| Petridish | Greiner bio-one | 628160 | |
| Scalpel | Feather disposable scalpel | No. 21 | Final Concentration: in vivo: 300 ng/ 100 µL |
| Stereomicroscope | Zaiss | Stemi508 | |
| Syringe (corneal/iris washing) | BD Microlane | 27 G x 3/4 – Nr.20 0,4 x 19 mm | |
| Syringe (i.p immunization) | BD Microlane | 24 G1"-Nr 17, 055* 25 mm |
Riferimenti
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