황화수소 생성 박테리아 검출을 위한 민감한 시각적 방법
Summary
여기에서 우리는 황화비스무트(BS) 침전에 사용되는 수정된 프로토콜로 황화수소 생성 박테리아를 검출하는 프로토콜을 제시합니다. 이 방법의 주요 장점은 평가하기 쉽고 특수 장비가 필요하지 않다는 것입니다.
Abstract
황화수소(H2S)는 인체 건강에 중요한 역할을 하는 황 함유 아미노산과 단백질의 단백질 분해에서 박테리아에 의해 생성되는 독성 가스입니다. H2S 생산 시험은 중요한 박테리아 생화학 적 동정 시험 중 하나입니다. 전통적인 방법은 지루하고 시간이 많이 소요될 뿐만 아니라 황 함유 매질에서 중금속 염의 독성 효과로 인해 박테리아 성장이 억제되기 쉬워 종종 부정적인 결과를 초래합니다. 여기에서 우리는 박테리아에서 H2S를 검출하는 간단하고 민감한 방법을 확립했습니다. 이 방법은 96웰 투명 마이크로타이터 플레이트를 사용하는 황화비스무트(BS) 침전의 수정된 버전입니다. 세균 배양을 L-시스테인을 함유한 비스무트 용액과 합하여 20분 동안 배양한 후 흑색 침전물이 관찰되었습니다. H2S에 대한 시각적 검출 한계는 0.2mM이었다. 시각적 색상 변화를 기반으로 H2S 생성 박테리아의 간단하고 처리량이 높으며 신속한 검출이 가능합니다. 요약하면, 이 방법은 박테리아에서H2S생산을 확인하는 데 사용할 수 있습니다.
Introduction
황화수소 생성 박테리아는 황 함유 아미노산과 단백질을 활용하여 황화수소(H2S)를 생성할 수 있습니다. H2S의 생산은 일반적으로 그람 음성 장내 세균과 박테리아 및 시트로박터 종, 프로테우스 종, 에드워시엘라 종 및 셰와넬라 종 1의 구성원에서 발생합니다. 이 박테리아는 에너지를 얻기 위해 황산염을 황화수소(H2S)로 환원시키는 능력이 있습니다. 황화수소는 박테리아 약물 내성의 발달과 관련이 있습니다. H 2 S는 활성 산소 종 (ROS)의 독성으로부터 박테리아를 보호하여 항생제 2,3의 항균 효과를 길항합니다. H2S는 또한 항상성 유지에 중요한 생리학적 효과를 갖는다. 초생리학적 수준에서 H2S는 신체에 심각한 독성을 나타내는 것으로 나타났습니다. 인체에서 H2S는 다양한 생리 학적 및 병리학 적 과정에 관여하는 가스 신호 분자로서의 또 다른 역할을합니다. H2S는 심장의 수축기 기능을 조절할 수 있으며 혈관을 이완시키고 혈관 리모델링을 억제하며 심근을 보호하는 데 중요한 생리학적 역할을 합니다 4,5. H2S는 또한 신경계와 소화관을 조절하는데 중요한 역할을 한다 6,7. 살균성 항생제에 노출되면 박테리아는 치명적인 활성 산소 종 (ROS)을 생성하여 세포 사멸을 유도한다는 것이 밝혀졌습니다 8,9,10,11.
미생물 실험실 과정에서 일반적인 생화학 적 검사로서 황화수소 검사는 박테리아, 특히 장내 세균과 (Enterobacteriaceae)의 박테리아를 식별하는 중요한 실험입니다. 현재, 황화수소 시험은 일반적으로 시험 할 박테리아를 접종 한 많은 수의 황 함유 아미노산 및 납 아세테이트 배지에 대해 수행됩니다. 배양 기간(2-3일) 후, 결과는 아세트산납 생산으로 인해 배양 배지 또는 아세트산납 종이 스트립이 검게 변하는지 여부를 관찰하여 판단한다11. 그러나 이러한 전통적인 방법은 지루하고 시간이 많이 소요될 뿐만 아니라 황 함유 배지에서 중금속 염의 독성 효과로 인해 박테리아 성장을 억제하는 경향이 있어 종종 부정적인 결과를 초래합니다. H2S12,13의 검출을 위한 비스무트기반 방법이 확립되었다. H2S는 비스무트와 반응하여 흑색 비스무트 황화물 침전을 형성 할 수 있습니다. 이 생화학적 검사에 대한 개혁을 수행하기 위해서는 박테리아 성장에 부작용이 없는 간단하고 빠른 방법을 확립해야 합니다. 여기에서는 황화비스무트를 기질로 사용하여 시험관 내 환경에서 자란 황화수소 생성 박테리아를 96웰 마이크로타이터 플레이트 형식으로 검출하기 위한 간단한 방법을 설정했습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
황화수소 생산 시험은 박테리아 균주의 식별 및 분화를위한 기존의 표현형 시험 중 하나입니다. 많은 박테리아 종은 수생수와 같은 자연 환경에서 황화수소를 생성할 수 있습니다. 이러한 박테리아 종에는 살모넬라 종, 시트로박터 종, 프로테우스 종, 슈도모나스 종, 클렙시엘라 종, 대장균의 일부 균주 및 혐기성 클로스트리디아15,16</…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 장쑤 고등 교육 기관의 우선 학업 프로그램 개발(PAPD)과 중국 약학 대학의 교육 개혁 연구 프로젝트(2019XJYB18)의 지원을 받았습니다.
Materials
| Bismuth (III)chloride | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd | 7787-60-2 | |
| EDTA | Nanjing Chemical Reagent Co., Ltd | 60-00-4 | |
| Enterococcus faecalis | ATCC | 19433 | |
| Fusobacterium nucleatum | ATCC | 25586 | |
| Klebsiella pneumoniae | ATCC | 43816 | |
| L-cysteine | Amresco | 52-90-4 | |
| Proteus vuigaris | CMCC | 49027 | |
| Salmonella paratyphi A | CMCC | 50001 | |
| Salmonella paratyphi B | CMCC | 50094 | |
| Staphylococcus aureus | ATCC | 25923 | |
| Triethanolamine-HCl | Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd. | 637-39-8 |
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