Qui, presentiamo un protocollo per misurare l'attività del tessuto adiposo bruno dopo un pasto negli esseri umani e negli animali da laboratorio.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Qui, presentiamo un protocollo per misurare l'attività del tessuto adiposo bruno dopo un pasto negli esseri umani e negli animali da laboratorio.
La misurazione dell'attività del tessuto adiposo bruno (BAT) mediante tomografia computerizzata ad emissione di positroni (PET-CT) attraverso l'accumulo di 18F-fluorodesossiglucosio (FDG) dopo un pasto o in pazienti obesi o diabetici fallisce come metodo di scelta. La ragione principale è che 18F-FDG compete con l'alta concentrazione plasmatica di glucosio postprandiale per lo stesso trasportatore di glucosio sulla membrana delle cellule BAT. Inoltre, BAT utilizza anche acidi grassi come fonte di energia, che non è visibile con PET-CT e potrebbe essere modificata insieme alla concentrazione di glucosio nei pazienti obesi e diabetici. Pertanto, per stimare l'importanza fisiologica delle BAT negli animali e nell'uomo, viene applicato un nuovo metodo di termografia a infrarossi utilizzato in recenti pubblicazioni.
Dopo il digiuno notturno, l'attività BAT è stata misurata mediante termografia a infrarossi prima e dopo un pasto in volontari umani e topi selvatici femmina. Il software della fotocamera calcola la temperatura dell'oggetto utilizzando la distanza dall'oggetto, l'emissività della pelle, la temperatura ambiente riflessa, la temperatura dell'aria e l'umidità relativa. Nei topi, l'area rasata sopra il BAT era una regione di interesse per la quale sono state misurate le temperature medie e massime. La fase del ciclo estrale nei topi femmina è stata determinata dopo un esperimento con strisci vaginali colorati con soluzione di colorazione di viola cresil (0,1%). Nei volontari sani, sono state selezionate due aree cutanee del collo: l'area sopraclavicolare (sopra la clavicola, dove sono presenti le cellule BAT) e l'area interclavicolare (tra le clavicole, dove non è stato rilevato tessuto BAT). L'attività BAT è determinata dalla sottrazione di questi due valori. Inoltre, le temperature medie e massime delle aree della pelle potrebbero essere determinate negli animali e nei partecipanti umani.
I cambiamenti nell'attività BAT dopo un pasto misurati dalla termografia a infrarossi, un metodo non invasivo e più sensibile, hanno dimostrato di essere sesso, età e fase del ciclo estrale dipendenti negli animali da laboratorio. Come parte della termogenesi indotta dalla dieta, l'attivazione delle BAT negli esseri umani ha anche dimostrato di dipendere dal sesso, dall'età e dall'indice di massa corporea. Determinare ulteriormente i cambiamenti fisiopatologici nell'attività BAT dopo un pasto sarà di grande importanza per i partecipanti con alte concentrazioni plasmatiche di glucosio (obesità e diabete mellito di tipo 2), nonché in diversi animali da laboratorio (topi knock-out). Questo metodo è anche uno strumento variabile per determinare possibili farmaci attivanti che potrebbero ringiovanire l'attività delle BAT.
Il tessuto adiposo bruno (BAT), a differenza del tessuto adiposo bianco (WAT), non immagazzina ma piuttosto spende energia. Dopo la stimolazione simpatica, BAT utilizza acidi grassi e glucosio e produce calore mediante l'attivazione della proteina disaccoppiante 1 (UCP1). La funzione di UCP1 è quella di utilizzare un gradiente H + tra due membrane mitocondriali per produrre calore invece di ATP. La funzione delle BAT è quella di aumentare la produzione di calore in condizioni di freddo, il che porta ad un aumento del dispendio energetico1. Dopo l'esposizione al freddo, gli input sensoriali dalla pelle inibiscono i neuroni sensibili a....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Tutte le procedure sperimentali su animali da laboratorio sono state approvate dal Comitato Etico Nazionale e dal Ministero dell'Agricoltura (EP 185/2018). Gli esperimenti sono stati condotti in conformità con il Codice etico della Società croata per la scienza degli animali da laboratorio e le linee guida ARRIVE. Tutte le procedure eseguite negli studi che coinvolgono partecipanti umani erano conformi alla Dichiarazione di Helsinki e approvate dal Comitato Etico dell'Università di Zagabria, Facoltà di Medicina (UP/I-322-01/18-01/56). In questo studio, presentiamo i risultati di tre partecipanti di sesso femminile (BMI: 29 kg / m 2 ± 5 kg / m2). ....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Il modo più semplice per determinare l'attività delle BAT è sottrarre la temperatura massima della pelle al di sopra della BAT prima e dopo un pasto nei soggetti umani. Un modo migliore per calcolare l'attività delle BAT è selezionare due regioni di interesse: l'area cutanea sopra il BAT, che si trova nell'area sopraclavicolare, e l'area interclavicolare della pelle in cui non si trova tessuto BAT nell'uomo, designata come area di riferimento (secondo PET-CT; Figura 1). L'attività BAT è quin.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Studi recenti presentano prove crescenti per quanto riguarda la regolazione fisiologica e l'importanza dell'attività delle BAT nell'uomo adulto e negli animali nello sviluppo dell'obesità e del diabete mellito. Inoltre, la possibile attivazione delle BAT da parte di attivatori esogeni sta diventando un obiettivo per le aziende farmaceutiche. Per poter stimare la regolazione fisiologica e l'importanza fisiopatologica delle BAT in patologie molto gravose, nonché scoprire un potenziale approccio terapeutico, la termografia .......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Questo studio è stato finanziato dalla borsa di ricerca della Fondazione scientifica croata (IP-2018-01- 7416).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 0,1% acetato di violetto di cresile | Dispositivo chimico | ||
| Dispositivo per la misurazione della temperatura e dell'umidità dell'aria | Kesterl | Kestrel 4200 | Certificato di conformità |
| Archiviazione dati esterna | Disco rigido con almeno 1 TB | ||
| Vetrini microscopici in vetro Piccolo | |||
| tampone di cotone | Tamponi | ||
| Software per l'analisi | FLIR Systems, Wilsonville, OR, USA | FLIR Tools | |
| Software per le misurazioni | FLIR Systems, Wilsonville, OR, USA | ResearchIR Software | FLIR ResearchIR Max, versione 4.40.12.38 (64-bit) |
| Thermac Camera | FLIR Systems, Wilsonville, OR, USA | FLIR T-1020 |
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.