Geração de um modelo de tireoidite autoimune espontânea em camundongos

Summary

Vários tipos de modelos animais de tireoidite de Hashimoto foram estabelecidos, assim como a tireoidite autoimune espontânea no camundongo NOD. Camundongos H-2h4 são um modelo simples e confiável para indução de HT. Este artigo descreve essa abordagem e avalia o processo patológico para uma melhor compreensão do modelo murino de TAA.

Abstract

Nos últimos anos, a tireoidite (TH) de Hashimoto tornou-se a doença autoimune da tireoide mais comum. Caracteriza-se pela infiltração linfocitária e detecção de autoanticorpos séricos específicos. Embora o mecanismo potencial ainda não esteja claro, o risco de tireoidite de Hashimoto está relacionado a fatores genéticos e ambientais. Atualmente, existem vários tipos de modelos de tireoidite autoimune, incluindo tireoidite autoimune experimental (TAE) e tireoidite autoimune espontânea (TAS).

O EAT em camundongos é um modelo comum de TH, que é imunizado com lipopolissacarídeo (LPS) combinado com tireoglobulina (Tg) ou suplementado com adjuvante de Freund completo (CFA). O modelo de camundongo EAT é amplamente estabelecido em muitos tipos de camundongos. No entanto, a progressão da doença está mais provavelmente associada à resposta do anticorpo Tg, que pode variar em diferentes experimentos.

O TSA também é amplamente utilizado no estudo da TH no NOD. Rato H-2h4. O ACENO. O camundongo H2h4 é uma nova cepa obtida do cruzamento do camundongo diabético não obeso (NOD) com o B10. A(4R), que é significativamente induzida para HT com ou sem iodo alimentar. Durante a indução, o NOD. Camundongos H-2h4 apresentam alto nível de TgAb acompanhado de infiltração linfocitária no tecido folicular tireoidiano. No entanto, para este tipo de modelo de camundongo, existem poucos estudos para avaliar de forma abrangente o processo patológico durante a indução de iodo.

Um modelo de camundongo SAT para pesquisa de TH é estabelecido neste estudo, e o processo de mudança patológica é avaliado após um longo período de indução de iodo. Através deste modelo, os pesquisadores podem compreender melhor o desenvolvimento patológico da TH e selecionar novos métodos de tratamento para a TH.

Introduction

A tireoidite de Hashimoto (TH), também conhecida como tireoidite linfocítica crônica ou tireoidite autoimune, foi relatada pela primeira vez em 1912¹. A TH é caracterizada por infiltração linfocitária e dano ao tecido folicular tireoidiano. Os exames laboratoriais se manifestam principalmente como aumento de anticorpos específicos da tireoide, incluindo anticorpo antitireoglobulina (TgAb) e anticorpo antitireoperoxidase (TPOAb)². A incidência de TH está na faixa de 0,4%-1,5%, correspondendo a 20%-25% de todas as doenças tireoidianas, e esse valor tem aumentado nos últimos^anos3. Além disso, um grande número de estudos relata que a TH está associada à oncogênese e recorrência do carcinoma papilífero de tireoide (CPT)^4,5; Os potenciais mecanismos ainda são controversos. A tireoidite autoimune também é um fator importante na infertilidade feminina⁶. Portanto, a patogênese da TH precisa ser clara, para a qual um modelo animal simples e estável é essencial.

Para estudar a etiologia da TH, dois tipos principais de modelos murinos têm sido empregados, incluindo a tireoidite autoimune experimental (TAE) e a tireoidite autoimune espontânea (TAA) em nossos^estudos7,8. Camundongos suscetíveis foram imunizados com antígenos tireoidianos específicos (incluindo tireoide bruta, tireoglobulina purificada [TG], peroxidase tireoidiana [TPO], ectodomínio TPO recombinante e peptídeos TPO selecionados) para estabelecer o modelo murino EAT. Além disso, os adjuvantes, incluindo lipopolissacarídeo (LPS), adjuvante completo de Freund (CFA) e outros adjuvantes não usuais, também são usados durante a imunização para quebrar a tolerância imunológica 9,10,11,12,13,14,15,16,17.

O modelo SAT é um modelo importante para estudar o desenvolvimento espontâneo da tireoidite autoimune, que é baseado em NOD. Camundongos H-2h4. O ACENO. O camundongo H-2h4 é uma nova cepa obtida a partir do cruzamento de NOD e B10. Camundongos A(4R), seguidos de múltiplos retrocruzamentos para NOD, com o gene IAk de suscetibilidade à tireoidite autoimune^18,19. ACENO. Camundongos H-2h4 não desenvolvem diabetes, mas apresentam alta incidência de tireoidite autoimune e síndrome de Sjögren (SS)¹⁹. Estudos descobriram que a molécula de adesão intracelular-1 (ICAM-1) é altamente expressa no tecido tireoidiano de NOD. Camundongos H-2h4 com 3-4 semanas de idade. Além disso, com o aumento da ingestão de iodo, a imunogenicidade da molécula de tireoglobulina é aumentada, o que aumenta ainda mais a expressão de ICAM-1, que desempenha um papel importante no processo de infiltração de monócitos²¹. Este modelo simula o processo autoimune enquanto verifica a relação entre a dose de iodo e a gravidade da doença. O método estabelecido é estável, com alta probabilidade de sucesso. O modelo SAT tem sido aplicado para induzir tireoidite autoimune por muitos anos e continua a ser um método eficaz para estudar a patogênese da tireoidite autoimune. No entanto, o método atual de construção do modelo EAT é mais complicado e caro; Diferentes laboratórios utilizam diferentes métodos de imunização e locais de injeção. Além disso, camundongos com diferentes origens genéticas têm diferentes taxas de indução, que precisam de mais estudos para revelar o potente mecanismo.

No entanto, o desenvolvimento de tireoidite no modelo SAT está associado ao iodeto de sódio, dimorfismo sexual e condições de criação. Para revelar o procedimento apropriado da tireoidite autoimune no modelo TAA, este artigo descreveu o método de indução da tireoidite autoimune em diferentes condições. Além disso, permite o estudo da patogênese e evolução imunológica da tireoidite autoimune em diferentes estágios dessa doença.

Protocol

O protocolo descrito abaixo foi aprovado pelas diretrizes de cuidados e uso estabelecidas pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Sichuan. 1. Preparo Alojar todos os camundongos em condições específicas livres de patógenos sob ciclos claro-escuro de 12 h (começando às 07:00 e 19:00, respectivamente). Manter a temperatura ambiente a 22 °C. Troque os materiais de cama toda semana. Fornecer quantidades adequadas de ração padr…

Representative Results

As alterações histológicas foram marcadamente diferentes em mulheres e homens, a duração da ingestão de iodo e a solução de NaI. Como mostrado na Figura 1, ~10% de NOD. Camundongos H-2h4 desenvolveram TSA mesmo sem indução de iodo com 24 semanas de idade, e todos os camundongos eventualmente desenvolveram tireoidite. Quando administrado água regular, não houve diferença significativa nas alterações histológicas entre machos e fêmeas. A adição de NaI à água potável acele…

Discussion

A TH ocorre devido a uma desordem do sistema autoimune causada por linfócitos infiltrando a glândula tireoide, prejudicando ainda mais a função tireoidiana, enquanto produz anticorpos específicos da tireoide. Os níveis séricos de TSH, TgAb e TPOAb em pacientes com TH estão significativamente elevados²⁷. Atualmente, dois tipos principais de modelos murinos são amplamente utilizados para estudar a etiologia da tireoidite autoimune: EAT e SAT²⁹. Os camundongos EAT sã…

Materials

Butorphanol tartrate	Supelco	L-044
Dexmedetomidine hydrochloride	Sigma-Aldrich	145108-58-3
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) well	Sigma-Aldrich	M9410-1CS
Ethanol	macklin	64-17-5
Freund’s Adjuvant, Complete	Sigma-Aldrich	F5881
Freund’s Adjuvant, Incomplete	Sigma-Aldrich	F5506
Goat anti-Mouse IgG	invitrogen	SA5-10275
Midazolam solution	Supelco	M-908
Mouse/rat thyroxine (T4) ELISA	Calbiotech	DKO045
Paraformaldehyde	macklin	30525-89-4
Propidium iodide	Sigma-Aldrich	P4864
Sodium Iodine	Sigma-Aldrich	7681-82-5
Thyroglobulin	Sigma-Aldrich	T1126
Thyroglobulin  ELISA Kit	Thermo Scientific	EHTGX5
TSH ELISA	Calbiotech	DKO200
Xylene	macklin	1330-20-7