यहां, हम लेजर-प्रेरित घाव पर आंत की छवियों को प्राप्त करने के लिए एक विधि प्रस्तुत करते हैं। माउस आंत को मल्टीफोटॉन लेजर में उजागर करके, एक एकल या एकाधिक क्रिप्ट (ओं) का नुकसान स्थानीय रूप से प्रेरित होता है। महीनों से क्षतिग्रस्त क्षेत्र को बार-बार इमेजिंग करके, आंतों की वसूली की वास्तविक समय की गतिशीलता को कैप्चर किया जाता है।
विवो में आंतों की वसूली की जांच करना एक उत्तम तकनीकी चुनौती है। अनुदैर्ध्य इमेजिंग प्रोटोकॉल की कमी ने कोशिका और ऊतक पैमाने की गतिशीलता में गहरी अंतर्दृष्टि को रोका है जो आंतों के उत्थान को व्यवस्थित करता है। यहां, हम एक इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी विधि का वर्णन करते हैं जो स्थानीय रूप से एकल क्रिप्ट पैमाने पर ऊतक क्षति को प्रेरित करता है और जीवित चूहों में आंतों के उपकला की पुनर्योजी प्रतिक्रिया का पालन करता है। एकल क्रिप्ट या बड़े आंतों के क्षेत्रों को एक उच्च तीव्रता वाले मल्टीफोटॉन इन्फ्रारेड लेजर द्वारा समय और अंतरिक्ष-नियंत्रित तरीके से अलग किया गया था। बाद में दीर्घकालिक दोहराव वाले इंट्रावाइटल इमेजिंग ने समय के साथ क्षतिग्रस्त क्षेत्रों की ट्रैकिंग को सक्षम किया और कई हफ्तों की अवधि में ऊतक वसूली के दौरान क्रिप्ट गतिशीलता की निगरानी के लिए अनुमति दी। लेजर-प्रेरित क्षति पर पड़ोसी ऊतक में क्रिप्ट विखंडन, संलयन और गायब होने जैसी क्रिप्ट रीमॉडेलिंग घटनाएं देखी गईं। यह प्रोटोकॉल होमियोस्टैटिक और पैथोफिजियोलॉजिकल सेटिंग्स, जैसे उम्र बढ़ने और ट्यूमर दीक्षा दोनों में क्रिप्ट गतिशीलता के अध्ययन को सक्षम बनाता है।
आंत के उपकला अस्तर को लगातार गैस्ट्रिक एसिड, विषाक्त पदार्थों और माइक्रोबायोटा द्वारा चुनौती दी जाती है जो उपकला बाधा के विघटन का कारण बन सकती है। आंतों की संरचना और ऊतक संगठन लगातार आत्म-नवीनीकरण और क्षति की मरम्मत के लिए विशिष्ट हैं। छोटी आंत के एकल-स्तरित उपकला को क्रिप्ट-विलस इकाइयों1 में व्यवस्थित किया जाता है। होमियोस्टैसिस में, क्रिप्ट के आधार पर रहने वाली एलजीआर 5 + आंतों की स्टेम कोशिकाएं विभेदित संतान को जन्म देती हैं। विभेदित बेटी कोशिकाएं एक कन्वेयर बेल्ट फैशन में विलस अक्ष के सिरे तक जाती हैं, जहां उन्हें बहा दिया जाता है ताकि आंतों के अस्तर को 3-5 दिनों में फिर से भर दिया जाए। लंबी अवधि में, सभी Lgr5+ कोशिकाएं ऊतक नवीकरण में समान रूप से योगदान नहीं करती हैं, क्योंकि यह क्रिप्ट (यानी, प्रतिगामी आंदोलन) 4,5 के आधार की ओर कन्वेयर बेल्ट के खिलाफ आगे बढ़ने के लिए कोशिकाओं की क्षमता पर भी निर्भर करता है। दरअसल, एलजीआर 5 + कोशिकाओं के पृथक्करण पर, उदाहरण के लिए, विकिरण, क्रिप्ट के आधार के बाहर पूर्वज कोशिकाएं स्टेम सेल पूल 6,7,8 को अलग करने और फिर से भरने के लिए आधार में चली जाती हैं।
तीव्र सूजन Lgr5+ स्टेम कोशिकाओं 9,10 के नुकसान का कारण बन सकती है। स्टेम सेल हानि के अलावा, कई बाहरी कारक क्रिप्ट स्केल पर एपिथेलियम को तीव्र नुकसान पहुंचा सकते हैं। विकिरण, रासायनिक उपचार और एंटीबायोटिक दवाओं को आंतों के क्रिप्ट और विली11 को घायल करने के लिए दिखाया गया है। क्रिप्ट्स और विली के बड़े क्षेत्र बैक्टीरिया, वायरल और परजीवी संक्रमण से प्रभावित हो सकतेहैं। आंत में क्रिप्ट विखंडन (एक क्रिप्ट का दो में विभाजन) 13 द्वारा क्रिप्ट स्केल पर आंतरिक और बाहरी क्षति से उबरने की उल्लेखनीय क्षमता होती है। घायल होने पर, क्षति से सटे क्षेत्र में क्रिप्ट क्रिप्ट संख्याओं को फिर से भरने के लिए विखंडन से गुजरते हैं। यह घटना भी होती है, हालांकि कुछ हद तक, होमियोस्टेसिस 14,15 के दौरान। होमियोस्टैसिस के दौरान क्रिप्ट संख्या में संभावित वृद्धि को संतुलित करने के लिए, क्रिप्ट्स फ्यूज (दो क्रिप्ट को एक में विलय) 16,17 भी कर सकते हैं। क्या क्रिप्ट फ्यूजन घायल होने के बाद क्रिप्ट नंबरों को फिर से स्थापित करने में भी भूमिका निभाता है, यह अज्ञात है। इसके अलावा, इस प्रक्रिया की गतिशीलता और नियामक कारकों को स्पष्ट किया जाना बाकी है।
विवो में ऊतक पुनर्जनन का अध्ययन करने के लिए चोट मॉडल अपरिहार्य हैं। आंतों के ऊतक पुनर्जनन का अध्ययन करने के लिए विभिन्न चोट मॉडल का उपयोग किया गया है। पिछली प्रयोगात्मक रणनीतियों ने चूहों में पुरानी और तीव्र कोलाइटिस और क्रिप्ट हानि को प्रेरित करने के लिए स्टेम सेल पूल 18 या डेक्सट्रान सल्फेट सोडियम (डीएसएस) के साथ उपचार के लिए उच्च खुराक विकिरण का उपयोगकिया। आनुवंशिक या ऑप्टिक साधनों द्वारा एकल-कोशिका पृथक्करण का उपयोग ऊतक क्षति को परिष्कृत करने के लिए किया गया है और स्टेम और पूर्वज कोशिकाओं21,22 की भूमिका को अलग करने और संवहनी पुनर्जनन 23 का अध्ययन करने के लिए एक आकर्षक उपकरण माना जाताहै। इसके अतिरिक्त, कई क्रिप्ट्स और विली24 के बड़े क्षेत्रों में क्षति को प्रेरित करने के लिए एक बायोप्सी-चोट प्रणाली विकसित की गई है। महत्वपूर्ण रूप से, हानिकारक अपमान की प्रतिक्रिया आंत के समीपस्थ-डिस्टल अक्ष के साथ भिन्न हो सकती है, जैसा कि विकिरण के लिए बताया गया है, जिसने बृहदान्त्र25 की तुलना में छोटी आंत में अधिक नुकसान पहुंचाया। यह लक्षित तरीकों की आवश्यकता पर प्रकाश डालता है जो हानिकारक अपमान की सीमा और आंतों के पथ में इसके स्थानीयकरण दोनों को नियंत्रित करते हैं।
क्षति की सीमा और वसूली का मूल्यांकन पारंपरिक रूप से स्थिर साधनों द्वारा किया गया है, जो ऊतक वसूली की गतिशीलता के बारे में सीमित जानकारी प्रदान करते हैं। इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी (आईवीएम) ने कई अंगों 26,27,28,29,30 में स्टेम सेल व्यवहार, उपकला रीमॉडेलिंग और पुनर्जनन को मापने के लिए अद्वितीय अवसर खोले हैं, और आंतों के जीव विज्ञान 4,5,21,31,32,33,34 में प्रभावशाली अंतर्दृष्टि प्रदान की है। 35,36.
यहां, हम स्थानिक-परिभाषित आंतों की क्षति का कारण बनने और आंतों के उपकला अस्तर की वसूली को पकड़ने के लिए एक विधि का वर्णन करते हैं। हम आंतों के क्रिप्ट को नुकसान पहुंचाने के लिए दो फोटॉन-आधारित लेजर एब्लेशन का उपयोग करते हैं और दोहराए जाने वाले इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी द्वारा तत्काल घाव प्रतिक्रिया और दीर्घकालिक वसूली का पालन करते हैं। हमारा प्रोटोकॉल स्थानीय ऊतक क्षति के जवाब में आंतों के ऊतक वास्तुकला के पुनर्योजी रीमॉडेलिंग को मैप करने की अनुमति देता है। विखंडन और संलयन घटनाओं सहित क्रिप्ट गतिशीलता को आसानी से परिमाणित किया जा सकता है और समय के साथ ट्रैक किया जा सकता है। लेजर एब्लेशन और दोहराए जाने वाले इंट्रावाइटल इमेजिंग के आवेदन का उपयोग होमोस्टेसिस और पैथोफिज़ियोलॉजी के दौरान आंतों की वास्तुकला के ऊतक-पैमाने की गतिशीलता की जांच करने के लिए एक मंच के रूप में किया जा सकता है, जैसे कि ट्यूमर दीक्षा।
यह प्रोटोकॉल सूक्ष्म लेजर एब्लेशन और अनुदैर्ध्य इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी को जोड़ता है ताकि दीर्घकालिक ऊतक रीमॉडेलिंग के लिए प्रारंभिक क्षति प्रतिक्रिया से आंतों के पुनर्जनन का पालन किया जा सके। तकनीक को माइक्रोस्कोपिक लेजर एब्लेशन को प्रेरित करने और छवि बनाने के लिए नैतिक विचारों के सख्त पालन में स्थापित किया गया है, और जब ठीक से पालन किया जाता है तो पशु कल्याण को बनाए रखा जाएगा। सर्जरी के दौरान, यह सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है कि आंत की अखंडता अच्छी तरह से संरक्षित है। यह बाँझ गीले कपास स्वैब के साथ ऊतक को धीरे से संभालकर प्राप्त किया जा सकता है, जो ऊतक से रक्तस्राव या सूखने को रोकता है। लेजर-प्रेरित सूक्ष्म क्षति की सीमा को लेजर एब्लेशन के बाद क्षेत्र की विभिन्न आंतों की परतों की इमेजिंग करके सावधानीपूर्वक मूल्यांकन किया जाना चाहिए। यदि शोधकर्ता इस प्रोटोकॉल में वर्णित प्रयोगात्मक चरणों की आवृत्ति को अनुकूलित करना चाहता है, तो कल्याण पर परिणाम स्थापित करने के लिए प्रयोग से पहले संस्थान की पशु नैतिकता समिति से परामर्श किया जाना चाहिए।
दोहराए जाने वाले इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी समय के साथ एक ही माउस में ऊतक वसूली की निगरानी करने की अनुमति देता है। आंत का बार-बार सर्जिकल एक्सपोजर आसानी से पूरे आंत्र पथ तक ऑप्टिकल पहुंच प्रदान करता है। ऊतक अंतर्निहित विशेषताएं, जैसे वाहिका, प्रत्येक इमेजिंग सत्र में समान आंतों के क्षेत्रों की पहचान करने के लिए मील के पत्थर के रूप में काम करती हैं। इस प्रकार, एक ही ऊतक क्षेत्र को कई हफ्तों में चित्रित किया जा सकता है, जो एक ही माउस में एक ही आंतों के क्षेत्र में दीर्घकालिक ऊतक पुनर्जनन को निर्धारित करने में सक्षम बनाता है। संयुक्त सर्जरी और इमेजिंग विधि द्वारा पेश किए गए स्थानिक नियंत्रण से यह लाभ मिलता है कि एक ही अंग को एक ही माउस में होमियोस्टैटिक और पुन: उत्पन्न करने वाली दोनों स्थितियों के तहत चित्रित किया जा सकता है, जो पिछले पूरे अंग क्षति मॉडल के विपरीत खड़ा है जहां नियंत्रण और पुन: उत्पन्न नमूने विभिन्न चूहों से उत्पन्न हुए 11,12,18,19,20 . इसलिए, हमारी प्रयोगात्मक सेटिंग प्रयोग के लिए आवश्यक जानवरों की आवश्यक संख्या को कम करती है और अंतर-पशु भिन्नता को कम करती है।
प्रोटोकॉल समस्या निवारण माउस और आंत हैंडलिंग तकनीक की समीक्षा और माइक्रोस्कोपी उपकरण और सेटिंग्स के नियंत्रण के साथ शुरू होना चाहिए। इस प्रोटोकॉल में कई महत्वपूर्ण कदम हैं जिन पर अतिरिक्त ध्यान देने की आवश्यकता है। सबसे पहले, पशु कल्याण और निरंतर उच्च डेटा गुणवत्ता सुनिश्चित करने के लिए, सभी काम को सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग करके एक स्वच्छ बाँझ वातावरण में किया जाना चाहिए, और सर्जरी और प्रत्येक इमेजिंग सत्र के दौरान माउस तापमान बनाए रखा जाना चाहिए। इमेजिंग के दौरान ऊतक को बाँझ, पूर्व-गर्म खारा के साथ हाइड्रेटेड रखना आवश्यक है और ऊतक फाइब्रोसिस को रोकता है।
यह सुनिश्चित करने के लिए कि प्रयोग प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके से किया जाता है, इष्टतम अधिग्रहण के लिए उपयोग करने से पहले लेजर को संरेखित करना और प्रत्येक सत्र की शुरुआत में मल्टीफोटॉन लेजर के पावर आउटपुट को मापना महत्वपूर्ण है। उद्देश्य के प्रकार, आवर्धन, आवास समय, लेजर शक्ति और तरंग दैर्ध्य जैसे मापदंडों का सूक्ष्म लेजर पृथक्करण की सीमा पर प्रभाव पड़ता है और इस पर विचार किया जाना चाहिए। इस अध्ययन में, लेजर एब्लेशन और इमेजिंग दोनों को 1.2 डब्ल्यू (लेंस से बाहर) की लेजर शक्ति के साथ 960 एनएम तरंग दैर्ध्य पर फ्लूटार वीआईएसआईआर 25x / 0.95 जल उद्देश्य के माध्यम से आयोजित किया जाता है। तरंगदैर्ध्य या ऑप्टिकल स्कैनिंग गुणों को बदलना सूक्ष्म क्षति की सीमा को प्रभावित करता है। एक कम तरंगदैर्ध्य (जैसे 840 एनएम) उच्च ऊर्जा फोटॉन में अनुवाद करता है और अक्सर लेजर के उच्च उत्पादन में, और सूक्ष्म क्षति को बढ़ा सकता है। एक उच्च ज़ूम के परिणामस्वरूप प्रति क्षेत्र अधिक ऊर्जा होती है, और इसलिए क्रिप्ट्स को हटाने के लिए कम समय होता है, और इसके विपरीत। एब्लेशन की गति और क्षति की सीमा को बदलने के लिए पिक्सेल निवास समय को बढ़ाया या घटाया जा सकता है। जब छवि ऊतक स्थिर नहीं होता है (उदाहरण के लिए, पेरिस्टालिक आंदोलनों के कारण), पृथक्करण को तेजी से करने की आवश्यकता होती है। इस उद्देश्य के लिए, एब्लेशन की गति को अनुकूलित किया जाना चाहिए, उदाहरण के लिए, ज़ूम और / या लेजर आउटपुट में वृद्धि।
कई इमेजिंग सत्रों में एक ही आंतों के क्षेत्र को खोजना एक और महत्वपूर्ण कदम है जिसे प्रयोग की सफलता सुनिश्चित करने के लिए ठीक से निष्पादित करने की आवश्यकता है। ऐसा करने के लिए, आंत को हर समय बिंदुओं पर ठीक उसी तरीके से तैनात करने की आवश्यकता होती है। हम हमेशा छोटी और बड़ी आंत में समान क्षेत्रों को खोजने के लिए एक संदर्भ बिंदु के रूप में सेकुम का उपयोग करने की सलाह देते हैं। कपास के स्वैब के साथ रुचि के ऊतक को धीरे-धीरे खींचना यह सुनिश्चित करता है कि रुचि का क्षेत्र उद्देश्य कार्य दूरी की सीमा में है और उन क्षेत्रों की संख्या को अधिकतम करता है जिन्हें वापस पता लगाया जा सकता है। इसके अलावा, हम हमेशा प्रत्येक माउस में कई सूक्ष्म पदों को हटाने और छवि बनाने की सलाह देते हैं ताकि उन क्षेत्रों को ध्यान में रखा जा सके जिन्हें बाद के इमेजिंग सत्र में वापस स्थानीयकृत नहीं किया जा सकता है। यदि क्षेत्रों को नहीं पाया जा सकता है, भले ही आंत की स्थिति सही है, यह माउस को पुनर्स्थापित करने और उजागर क्षेत्र के अभिविन्यास को बदलने में मदद कर सकता है। समय के साथ क्रिप्ट्स को ट्रैक करना प्रयोगों के लिए बोझिल हो सकता है जहां कई आसन्न क्रिप्ट्स के बड़े आंतों के क्षेत्रों को हटा दिया जाता है। इस तरह के हानिकारक अपमान उपकला मोनोलेयर से परे ऊतक रीमॉडेलिंग पैदा कर सकते हैं, जो समय के साथ क्षेत्र की ट्रैकिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले ऊतक स्थलों के संशोधन में समाप्त हो सकता है। क्षतिग्रस्त साइट के लिए पर्याप्त दूरी पर स्थलों का चयन करना और दृश्य के बड़े क्षेत्रों को कैप्चर करना जो क्षतिग्रस्त क्षेत्र को कई सौ माइक्रोमीटर से पार करते हैं, सफल दीर्घकालिक प्रयोगों की संभावना को बढ़ाते हैं। माइक्रोस्कोप चरण पर आंत की गलत स्थिति के अलावा, जठरांत्र संबंधी मार्ग के पेरिस्टालिक आंदोलन इमेजिंग में हस्तक्षेप कर सकते हैं। इस समस्या को दो तरीकों से सुधारा जा सकता है। यदि आंदोलनों की आवृत्ति बहुत अधिक नहीं है, तो प्रक्रिया को एक ही क्षेत्र में बढ़े हुए जोखिम समय के साथ दोहराया जा सकता है। वैकल्पिक रूप से, एनेस्थीसिया की उच्च मात्रा का उपयोग पेरिस्टलोसिस को कम करने के लिए किया जा सकता है। हम आइसोफ्लुरेन की उच्च खुराक को छोटे समायोजन तक सीमित करने की सलाह देते हैं। कुल मिलाकर, इमेजिंग सत्रों को तेजी से वसूली सुनिश्चित करने के लिए 3 घंटे से कम, जितना संभव हो उतना छोटा रखा जाना चाहिए।
अन्य क्षति मॉडल की तुलना में संयुक्त लेजर एब्लेशन और अनुदैर्ध्य इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी दृष्टिकोण के कई फायदे हैं। पिछले (रासायनिक) क्षति मॉडल में हानिकारक अपमान 6,11,12,19,20 को स्थानीय रूप से सीमित करने की क्षमता का अभाव था। लेजर एब्लेशन हित के परिभाषित क्षेत्र में नुकसान को सीमित करके इस कमी को दूर करता है। यह शोधकर्ताओं को चोट के स्थान को नियंत्रित करने में सक्षम बनाता है, साथ ही क्षति की सीमा भी। क्रिप्ट स्केल पर पुनर्योजी प्रतिक्रियाओं के बारे में सूचित करने के लिए क्षति की गंभीरता को क्रिप्ट या पूरे सूक्ष्म आंतों के क्षेत्रों को कम करने के लिए संशोधित किया जा सकता है। स्थानिक नियंत्रण के अलावा, लेजर एब्लेशन भी क्षति की शुरुआत को ठीक से समय देने की अनुमति देता है, जिससे पिछली दवा, रासायनिक और संक्रमण मॉडल 9,10,11,12,19,20 की सटीकता को पार किया जा सकता है। हमारा प्रोटोकॉल पिछले अध्ययनों पर विस्तार करता है जो आंत21,23 में स्थानीय क्षति को प्रेरित करने के लिए एक विधि के रूप में लेजर-प्रेरित थर्मल एब्लेशन का उपयोग करते थे। पिछले लेजर-प्रेरित क्षति मॉडल ने छोटी आंत21 या डिस्टल कोलन23 की ल्यूमिनल सतह में स्थानीय क्षेत्रों को चित्रित किया। संयुक्त सर्जरी और लेजर एब्लेशन दृष्टिकोण एक उच्च रिज़ॉल्यूशन पर आंतों के उपकला (विशेष रूप से क्रिप्ट्स) की कल्पना करना संभव बनाता है, और छोटी आंत, सेकम और समीपस्थ बृहदान्त्र की किसी भी स्थिति में ऊतक वसूली की लेजर एब्लेशन और अनुवर्ती इमेजिंग करता है। यह समय के साथ एक ही आंतों के क्षेत्रों की वसूली को पकड़ता है, प्रयोगात्मक सेटअप के अनुसार आंत की विभिन्न परतों (म्यूकोसा, सबम्यूकोसा, मस्कुलरिस और सेरोसा) की कल्पना करने की अनुमति देता है। हमारी तकनीक मुख्य रूप से कई हफ्तों / महीनों की अवधि के लिए दीर्घकालिक दोहराई जाने वाली इमेजिंग के लिए तैयार की गई है। क्रिप्ट्स की अल्पकालिक वसूली गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए (उदाहरण के लिए, क्षति के बाद लगातार कई दिनों के लिए), यहां वर्णित लेजर एब्लेशन दृष्टिकोण को इंट्रावाइटल इमेजिंग विंडो 27,28,40 के साथ जोड़ा जा सकता है।
इस प्रोटोकॉल का उपयोग विभिन्न वैज्ञानिक क्षेत्रों से अनुसंधान अनुप्रयोगों की भीड़ के लिए किया जा सकता है जो पुनर्जनन, इम्यूनोलॉजी और कैंसर अनुसंधान का विस्तार करते हैं। आंतों के पुनर्जनन की अनुदैर्ध्य इमेजिंग सेलुलर गतिशीलता पर प्रकाश डालती है जो उपकला अखंडता और बाधा समारोह को संरक्षित करती है, आंतों के लुमेन में रोगजनकों के खिलाफ मेजबान रक्षा को सक्षम करती है, और जो ऑन्कोजेनिक उत्परिवर्तन की निकासी और प्रसार को रेखांकित करती है। प्रत्येक वैज्ञानिक प्रश्न लेजर-प्रेरित क्षति की सीमा और इमेजिंग की अवधि पर अद्वितीय मांग करेगा। फ्लोरोसेंट रिपोर्टर चूहे और इंजेक्शन रंग उस डेटा का काफी विस्तार और परिष्कृत कर सकते हैं जिसे किसी भी सेल और रुचि की संरचना के विज़ुअलाइज़ेशन की अनुमति देकर प्राप्त किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, एक Lgr5-CreERt2: Rosa26-Confetti माउस का उपयोग स्टेम सेल संतानों की कल्पना करने के लिए किया जा सकता है, जबकि Rosa26-mTmG रिपोर्टर ऊतक वास्तुकला पर सूचित करता है। साथ में, ये हालिया तकनीकी प्रगति आंतों के जीव विज्ञान और बीमारी की हमारी समझ को आगे बढ़ाने के लिए इंट्रावाइटल आंतों के प्रयोग को एक आकर्षक उपकरण बनाती है।
The authors have nothing to disclose.
इस अध्ययन को नीदरलैंड ऑर्गनाइजेशन ऑफ साइंटिफिक रिसर्च एनडब्ल्यूओ (जेवीआर को विसी अनुदान 09150182110004 और एचएएम को वेनी अनुदान 09150161910151), ओसीईएनडब्ल्यू द्वारा समर्थित किया गया था। GROOT.2019.085 (J.v.R के लिए), और एक EMBO पोस्टडॉक्टरल फैलोशिप (H.A.M को ALTF 452-2019 प्रदान करें)।
Anesthesia induction box | Veterinary Technics | ||
Autoclave | Certoclav | ||
Betadine | Mylan | 202809 | |
Diaper (underpad) | Absorin comfort | ||
Dumont forceps | Fine Scientific Tools | 11255-20 or 11272-40 | Inox, style #55, used to hold the peritoneum |
Enzymatic instrument cleaner | Roboz | EC-1000 | |
Ethanol 80% | homemade | NA | |
Eye ointment | Duratears Z (Alcon) | 288/28282-6 | |
Fine Scissors Straight 9 cm | Fine Scientific Tools | 14060-09 | Used to cut skin and peritoneum of the mouse |
Gauze 5 cmX5 cm | Cutisoft (Bsn medical) | 45847-00 | |
Graefe Forceps Curved Serrated | Fine Scientific Tools | 11051-10 | Used to hold the skin |
Hartman Hemostat Straight | Fine Scientific Tools | 13002-10 | Used for suturing |
Heating pad | Comfort | T5-5000 | |
Imaging box | Custom made | ||
Incision film | Nobafilm | 172215 | |
Inverted multi-photon microscope with automated stage | Leica Microsystems | NA | |
Isoflurane (vetflurane) | Pharmachemie BV, Haarlem, Netherlands | 305788 | |
Isoflurane vaporizer | Penlon sigma delta | ||
Micropore paper tape | Micropore | ||
NaCl 0.9% | Braun | Other brands available | |
Needle 25G | BD | 300600 | |
Paper tape tesa | Tesa | NA | |
Parafilm | Bemis | PM-994 | semi-transparent tape |
Razor blades | Supermax stainless steel | Other brands available | |
Rectal probe | Kent Scientific | 20250-91 | |
Rimadyl Cattle (carprofen) | Zoetis B.V | Registration# REG NL 10130 | |
Student Fine Scissors Straight 11.5 cm | Fine Scientific Tools | 91460-11 | Used to cut gauze |
Surgical instrument cleaner | Roboz | IC-1000 | |
Surgical instrument lubricant | Roboz | IL-1000 | |
Syringes (1 ml) | BD | 303172 | Other brands available |
Tamoxifen | Sigma | T5648 | |
Temgesic (Buprenorphine hydrochloride) | Indivior UK Limited/Reckitt Benckiser Healthcare | Registration# RVG 08725 | |
Vicryl polyglactin suture 5-0 FS-2 needle | Ethicon | V292ZH | |
VirkonS | Bio-services | antiseptic solution | |
Wooden cotton swab (sterile) | Klinion | 531530 | Other brands available |