小鼠下颌磨牙拔牙窝愈合模型的建立
Summary
该协议演示了如何提取小鼠下颌第一磨牙的分步细节。它为专注于颚骨愈合和再生的研究人员提供了一种替代方法。
Abstract
本研究介绍了鼠下颌骨磨牙拔除模型的发展，为研究牙槽骨再生和膜内骨化提供实用的模型。使用C57 / J6小鼠提取下颌第一磨牙以建立该模型。他们分别在手术后1周和4周被安乐死，并收获双侧下颌骨。随后进行连续立体采集、组织学评估和免疫荧光染色，以证明手术成功。手术后，立体图像立即显示一个空的提取窝。手术后1周的苏木精和伊红（H&E）和术后4周的Masson染色显示，原始根部的区域分别部分和完全充满骨小梁。免疫荧光染色显示，与稳态侧相比，术后1周Sp7表达增加，提示牙槽窝成骨剧烈。所有这些结果都证明了一种可行的鼠牙拔牙槽愈合模型。即将进行的揭示颚骨缺陷愈合或牙槽愈合机制的研究可以采用这种方法。
Introduction
拔牙后的牙槽愈合是一种常见的临床情况，在不期望的愈合下，这可能导致不适当的并发症，例如牙槽出血、干槽症，甚至颌骨骨髓炎1，2，3。这些合并症可能会损害患者的生活质量，更糟糕的是，由于大量骨质流失，对假体康复构成重大挑战4。虽然牙槽愈合阶段已经阐明，但在遇到各种预后挑战时，它们不足以指导拔牙手术后的临床护理4。
已经进行了多项基于动物模型的研究，以更好地了解插座愈合过程中的潜在机制并避免上述情况。Sp7是成骨细胞分化的主要调节剂，在骨骼发育、骨止血和骨再生中起着至关重要的作用5，6。合理的牙槽愈合模型可以显示Sp7创伤后在骨再生中的冗余。此外，与长骨骨折愈合不同，只有一个单一的成骨过程，即膜内骨化，涉及拔牙窝7的愈合过程。这使得动物拔牙模型成为研究基于种植体的疗法的最佳选择，因为种植体骨整合遵循相同的成骨规则8。
几十年来，拔牙模型已经在大鼠、兔子和狗身上进行，因为这些物种的大牙齿便于在9、10、11 上操作。然而，鉴于对转基因的蓬勃发展的需求以及作为人类更具适应性的遗传背景，小鼠越来越多地被用来建立拔牙模型。然后，研究人员可以使用基因组修饰的小鼠来揭示特定细胞群在插座愈合过程中的作用，而不是仅观察表型12。在鼠牙拔牙窝模型中，已有研究证明了鼠上颌牙和门牙拔牙窝的建立和愈合过程13，14，15，16。然而，预后的愈合模式以及检测和观察时间点可能因方案而异。这为学者建立鼠窝愈合模型提供了一个普遍标准。
本研究旨在为上述问题构建一个切实可行的鼠窝愈合模型。小鼠的下颌磨牙与上颌磨牙和门牙相比具有独特的形态特征，具有独特的优缺点。由于专注于小鼠下颌骨的模型目前是基于真空的，因此该协议试图提供一种完成的方法来提取小鼠的下颌第一磨牙。我们希望该协议能够启发基础研究人员新的想法，以揭示插座愈合的潜在机制并指示临床护理。
Protocol
Representative Results
Discussion
鼠窝愈合模型是揭示骨愈合和再生潜在机制的重要方法，最终解决临床挑战。现有的研究已经证明了门牙拔除模型和上颌磨牙拔除模型的可能性，而研究尚未使用下颌第一磨牙模型13，17，18。然而，门牙对啮齿动物的生活至关重要，它们的损伤可能是致命的。此外，由于上颌骨中的骨骼比下颌骨更松质，因此在愈合过程中，潜…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作得到了国家自然科学基金81825005（L.Y.）、82201045（F.Y.）和82100982（F.L.）以及四川省科技计划2021JDRC0144（F.L.），2022JDRC0130（F.Y.）的支持。
Materials
| 23/25/26 G needle | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB1-074(IV) | |
| C57/B6J | Gempharmatech Experimental Animals Company, Chengdu, China | C57/B6J | |
| DAPI Staining Solution | Beyotime | Cat#C1005 | |
| Embedding Cassettes | CITOTEST Scientific | 80106-1100-16 | |
| Hematoxylin and Eosin Stain Kit | Biosharp | BL700B | |
| Isoflurane | RWD Life Science Co.,Ltd | R510-22-10 | |
| Masson’s Trichrome Stain Kit | Solarbio | G1340 | |
| Microtome | Leica | RM2235 | |
| Pentobarbital Sodium | Huaxia Chemical Reagent Co., Ltd | 2018042001 | |
| Rabbit polyclonal | anti-Sp7 | Abcam Cat# ab22552 | |
| Tweezers | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB2-115 |
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