L'istituzione di un modello murino di guarigione dell'orbita di estrazione molare mandibolare
Summary
Questo protocollo dimostra i dettagli passo-passo su come estrarre il primo molare mandibolare nel topo. Fornisce un metodo alternativo per i ricercatori che si concentrano sulla guarigione e la rigenerazione della mandibola.
Abstract
Questo studio introduce lo sviluppo di un modello di estrazione molare nella mandibola murina per fornire un modello praticabile per lo studio della rigenerazione ossea alveolare e dell’ossificazione intramembranosa. I topi C57/J6 sono stati utilizzati per estrarre il primo molare mandibolare per stabilire questo modello. Sono stati eutanasizzati e le mandibole bilaterali raccolte, rispettivamente a 1 settimana e 4 settimane dopo l’intervento. La successiva raccolta stereoscopica seriale, la valutazione istologica e la colorazione con immunofluorescenza sono state eseguite per dimostrare il successo della chirurgia. Subito dopo l’intervento chirurgico, le immagini stereoscopiche mostravano una presa di estrazione vuota. L’ematossilina e l’eosina (H & E) a 1 settimana e la colorazione Masson a 4 settimane dopo l’intervento chirurgico hanno mostrato che l’area della radice originale era parzialmente e completamente riempita con trabecole ossee, rispettivamente. La colorazione con immunofluorescenza ha mostrato che, rispetto al lato omeostasi, l’espressione di Sp7 è aumentata a 1 settimana dopo l’intervento, suggerendo un’osteogenesi vigorosa nella fossa alveolare. Tutti questi risultati hanno dimostrato un modello praticabile di guarigione dell’alveolo di estrazione del dente murino. I prossimi studi che rivelano i meccanismi di guarigione dei difetti dell’osso mascellare o della guarigione dell’alveolo potrebbero adottare questo metodo.
Introduction
La guarigione dell’alveolo dopo l’estrazione del dente è uno scenario clinico comune, che può causare complicazioni sconvenienti come emorragia dell’orbita, presa secca o persino osteomielite della mascella in caso di guarigione indesiderata 1,2,3. Queste comorbidità possono compromettere la qualità della vita dei pazienti e, peggio ancora, sfidare in modo vitale la riabilitazione protesica a causa della massiccia perdita ossea4. Sebbene le fasi di guarigione dell’alveolo siano state chiarite, sono inadeguate per dirigere l’assistenza clinica post-chirurgia di estrazione dentale quando si incontrano varie sfide prognosi4.
Sono stati condotti diversi studi basati su modelli animali per ottenere una migliore comprensione dei meccanismi sottostanti nel processo di guarigione dell’alveolo e prevenire le situazioni di cui sopra. Sp7 è un regolatore principale nella differenziazione degli osteoblasti, svolgendo un ruolo vitale nello sviluppo dello scheletro, nell’emostasi ossea e nella rigenerazione ossea 5,6. I modelli di guarigione delle prese razionali potrebbero mostrare la ridondanza di Sp7 post-traumatica nella rigenerazione ossea. Inoltre, a differenza della guarigione delle fratture ossee lunghe, solo un singolo processo osteogenico, l’ossificazione intramembranosa, comporta il processo di guarigione della presa di estrazione7. Ciò rende il modello di estrazione del dente animale ottimale per lo studio di terapie basate su impianti, poiché l’osteointegrazione dell’impianto obbedisce alla stessa regola osteogenica8.
Per decenni, il modello di estrazione dei denti è stato eseguito su ratti, conigli e cani, poiché queste specie hanno denti grandi che sono convenienti per operare su 9,10,11. Tuttavia, date le fiorenti richieste di modificazione genetica e come background genetico più adattabile agli esseri umani, i topi vengono sempre più utilizzati per stabilire un modello di estrazione dei denti. Da quel momento in poi, i ricercatori potrebbero svelare il ruolo di una specifica popolazione cellulare nel processo di guarigione della presa usando topi modificati dal genoma invece di osservare fenotipi solo12. Tra i modelli di presa per l’estrazione dei denti murini, studi precedenti hanno dimostrato l’istituzione e il processo di guarigione del dente masculare murino e delle prese di estrazione degli incisivi13,14,15,16. Tuttavia, il modello di guarigione della prognosi e i punti temporali detective e osservativi possono differire tra i protocolli. Questo fa appello a un criterio universale per gli studiosi per stabilire un modello di guarigione della presa murina.
Questo studio mirava a costituire un modello praticabile di guarigione della presa murina per i problemi di cui sopra. I molari della mandibola nei topi hanno tratti morfologici distintivi rispetto ai molari mascellari e agli incisivi, portando vantaggi e svantaggi unici. Poiché i modelli incentrati sulla mandibola murina sono attualmente basati sul vuoto, questo protocollo ha cercato di fornire un metodo compiuto per estrarre il primo molare mandibolare nei topi. Speriamo che questo protocollo illumini i ricercatori di base con nuove idee per scoprire i meccanismi sottostanti della guarigione delle prese e indicare la cura clinica.
Protocol
Representative Results
Discussion
Il modello di guarigione della presa murina è un metodo importante per svelare i meccanismi sottostanti nella guarigione e nella rigenerazione ossea, risolvendo in definitiva le sfide cliniche. Gli studi esistenti hanno dimostrato la possibilità del modello di estrazione degli incisivi e del modello di estrazione molare mascellare, mentre gli studi non hanno utilizzato il modello mandibolare del primo molare13,17,18. Tuttavia,…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è supportato dalla National Natural Science Foundation of China 81825005 (L.Y.), 82201045 (F.Y.) e 82100982 (F.L.) e dal Sichuan Province Science and Technology Program 2021JDRC0144 (F.L.), 2022JDRC0130 (F.Y.).
Materials
| 23/25/26 G needle | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB1-074(IV) | |
| C57/B6J | Gempharmatech Experimental Animals Company, Chengdu, China | C57/B6J | |
| DAPI Staining Solution | Beyotime | Cat#C1005 | |
| Embedding Cassettes | CITOTEST Scientific | 80106-1100-16 | |
| Hematoxylin and Eosin Stain Kit | Biosharp | BL700B | |
| Isoflurane | RWD Life Science Co.,Ltd | R510-22-10 | |
| Masson’s Trichrome Stain Kit | Solarbio | G1340 | |
| Microtome | Leica | RM2235 | |
| Pentobarbital Sodium | Huaxia Chemical Reagent Co., Ltd | 2018042001 | |
| Rabbit polyclonal | anti-Sp7 | Abcam Cat# ab22552 | |
| Tweezers | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB2-115 |
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