Este protocolo demonstra passo-a-passo detalhes de como extrair o primeiro molar inferior no camundongo. Ele fornece um método alternativo para pesquisadores com foco na cicatrização e regeneração dos ossos maxilares.
Este estudo introduz o desenvolvimento de um modelo de extração molar na mandíbula murina para fornecer um modelo viável para o estudo da regeneração óssea alveolar e ossificação intramembranosa. Camundongos C57/J6 foram utilizados para extrair o primeiro molar inferior para estabelecer este modelo. Eles foram sacrificados e as mandíbulas bilaterais retiradas em 1 e 4 semanas pós-cirurgia, respectivamente. Subsequente coleta estereoscópica seriada, avaliação histológica e coloração por imunofluorescência foram realizadas para demonstrar o sucesso da cirurgia. Imediatamente após a cirurgia, as imagens estereoscópicas mostraram um alvéolo de extração vazio. A hematoxilina e a eosina (H&E) em 1 semana e a coloração de Masson em 4 semanas de pós-operatório mostraram que a área da raiz original estava parcial e totalmente preenchida por trabéculas ósseas, respectivamente. A coloração por imunofluorescência mostrou que, em comparação com o lado da homeostase, a expressão de Sp7 aumentou com 1 semana de pós-operatório, sugerindo osteogênese vigorosa na fossa alveolar. Todos esses resultados demonstraram um modelo praticável de cicatrização de alvéolos para extração dentária murina. Estudos futuros revelando os mecanismos de cicatrização de defeitos maxilares ou cicatrização de alvéolos poderão adotar esse método.
A cicatrização do alvéolo após exodontia é um cenário clínico comum, que pode resultar em complicações inconsequentes, como hemorragia alveolar, alveolite seca ou mesmo osteomielite mandibular sob cicatrização indesejável 1,2,3. Essas comorbidades podem comprometer a qualidade de vida dos pacientes e, pior ainda, desafiar vitalmente a reabilitação protética devido à perda ósseamaciça4. Embora os estágios de cicatrização do alvéolo tenham sido elucidados, eles são inadequados para direcionar o cuidado clínico pós-cirurgia de exodontia quando se deparam com vários desafios prognósticos4.
Múltiplos estudos baseados em modelos animais têm sido conduzidos para obter uma melhor compreensão dos mecanismos subjacentes no processo de cicatrização do alvéolo e evitar as situações acima. A Sp7 é um regulador mestre na diferenciação osteoblástica, desempenhando um papel vital no desenvolvimento do esqueleto, hemostasia ósseae regeneração óssea5,6. Modelos racionais de cicatrização de alvéolos poderiam mostrar a redundância da Sp7 pós-traumática na regeneração óssea. Além disso, diferentemente da consolidação da fratura de ossos longos, apenas um único processo osteogênico, a ossificação intramembranosa, envolve o processo de cicatrização do alvéolo deextração7. Isso torna o modelo de extração dentária animal ideal para o estudo de terapias baseadas em implantes, uma vez que a osseointegração de implantes obedece àmesma regra osteogênica8.
Há décadas, o modelo de exodontia vem sendo realizado em ratos, coelhos e cães, uma vez que essas espécies possuem dentes grandes e convenientes para operar 9,10,11. No entanto, dadas as crescentes demandas por modificação genética e como um fundo genético mais adaptativo aos seres humanos, camundongos estão sendo cada vez mais usados para estabelecer um modelo de extração dentária. A partir daí, os pesquisadores puderam desvendar o papel de uma população celular específica no processo de cicatrização usando camundongos modificados pelo genoma, em vez de observar fenótipos apenas12. Entre os modelos de alvéolos para extração dentária murina, estudos prévios demonstraram o estabelecimento e o processo de cicatrização de alvéolos de extração de dentes maxilares e incisivosmurinos 13,14,15,16. No entanto, o padrão de cicatrização do prognóstico e os momentos de detecção e observação podem diferir entre os protocolos. Isso apela para um critério universal para que os estudiosos estabeleçam um modelo de cura de alvéolos murinos.
Este estudo teve como objetivo constituir um modelo prático de cicatrização de alvéolos murinos para as questões acima. Molares mandibulares em camundongos apresentam características morfológicas distintas em relação aos molares superiores e incisivos, trazendo vantagens e desvantagens únicas. Como os modelos com foco na mandíbula murina são atualmente baseados em vácuo, este protocolo tentou fornecer um método realizado para extrair o primeiro molar inferior em camundongos. Esperamos que este protocolo ilumine os pesquisadores básicos com novas ideias para descobrir os mecanismos subjacentes da cicatrização da cavidade e indicar cuidados clínicos.
O modelo de cicatrização de alvéolos murinos é um método importante para desvendar os mecanismos subjacentes na cicatrização e regeneração óssea, resolvendo desafios clínicos. Estudos existentes demonstraram a possibilidade do modelo de extração de incisivos e do modelo de extração de molares superiores, enquanto estudos não utilizaram o modelo de primeiro molar inferior13,17,18. No entanto, os incisivos são cru…
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho é apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China 81825005 (L.Y.), 82201045 (F.Y.) e 82100982 (F.L.), e pelo Programa de Ciência e Tecnologia da Província de Sichuan 2021JDRC0144 (F.L.), 2022JDRC0130 (F.Y.).
23/25/26 G needle | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB1-074(IV) | |
C57/B6J | Gempharmatech Experimental Animals Company, Chengdu, China | C57/B6J | |
DAPI Staining Solution | Beyotime | Cat#C1005 | |
Embedding Cassettes | CITOTEST Scientific | 80106-1100-16 | |
Hematoxylin and Eosin Stain Kit | Biosharp | BL700B | |
Isoflurane | RWD Life Science Co.,Ltd | R510-22-10 | |
Masson’s Trichrome Stain Kit | Solarbio | G1340 | |
Microtome | Leica | RM2235 | |
Pentobarbital Sodium | Huaxia Chemical Reagent Co., Ltd | 2018042001 | |
Rabbit polyclonal | anti-Sp7 | Abcam Cat# ab22552 | |
Tweezers | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB2-115 |