직접적인 풍선 손상으로 인한 토끼 대동맥 판막 협착증 모델
Summary
대동맥판막협착증(AVS)의 기저에 있는 병리학적 기전을 이해하고 치료적 개입의 효능을 평가하기 위해서는 적절한 동물 모델이 필요하다. 본 프로토콜은 생체 내에서 직접 풍선 손상을 통해 AVS 토끼 모델을 개발하기 위한 새로운 절차를 설명합니다.
Abstract
동물 모델은 질병에 걸린 인간 대동맥 판막의 신뢰할 수 있는 출처에 대한 접근이 부족하기 때문에 대동맥 판막 협착증(AVS)의 기저에 있는 병리학적 메커니즘을 이해하는 중요한 도구로 부상하고 있습니다. 다양한 동물 모델 중에서 AVS 토끼 모델은 대형 동물 연구에서 가장 일반적으로 사용되는 모델 중 하나입니다. 그러나 기존의 AVS 토끼 모델은 대동맥 판막에 심각한 협착을 유발하기 위해 장기간 식이 보충제와 유전자 조작이 필요하므로 실험 연구에서 사용이 제한됩니다. 이러한 한계를 해결하기 위해 대동맥 판막에 대한 직접적인 풍선 손상으로 협착이 유발되는 새로운 AVS 토끼 모델이 제안되었습니다. 본 프로토콜은 뉴질랜드 흰토끼(NZW)에서 AVS를 유도하기 위한 성공적인 기술을 준비, 수술 절차 및 수술 후 관리를 위한 단계별 절차와 함께 설명합니다. 이 간단하고 재현 가능한 모델은 AVS의 시작과 진행을 연구하기 위한 유망한 접근 방식을 제공하며 질병의 근본적인 병리학적 메커니즘을 조사하기 위한 귀중한 도구를 제공합니다.
Introduction
대동맥 협착증(AS)의 진행과 관련된 병든 인간 대동맥 판막의 신뢰할 수 있는 출처에 대한 접근이 부족하기 때문에 적절한 동물 모델을 사용하면 대동맥 판막 협착증(AVS)의 기저에 있는 병리학적 메커니즘을 더 잘 이해하는 데 기여할 수 있다는 사실이 점점 더 인식되고 있습니다. AVS를 연구하기 위한 다양한 동물 모델 중에서 토끼는 가장 일반적으로 사용되는 대동물 AVS 모델 중 하나이며, AVS 토끼 모델은 콜레스테롤/비타민 D2 보충 또는 유전자 조작을 통해 유도됩니다 1,2,3,4.
토끼 AVS 모델은 AVS의 개발 및 진행에 대한 중요한 통찰력을 제공했지만, 예비 실험에서 볼 수 있듯이 AVS를 일관되고 재현 가능하게 유도하는 것은 여전히 어려운 과제로 남아 있습니다.
식이요법 유도 및 유전적으로 감수성 동물 모델 외에도 마우스 5,6에서 직접적인 기계적 손상을 통해 AVS의 새로운 모델이 확립되었습니다. 기계적 손상 모델은 대동맥 협착증을 성공적으로 유도하고 야생형 마우스에서 간단하고 재현 가능한 AVS 모델을 나타냅니다. 우리가 아는 한, 토끼 모델에서 대동맥 판막에 대한 기계적 손상의 영향을 조사한 선행 연구는 없었습니다. 따라서 본 연구는 대동맥판막에 대한 직접적인 풍선 손상을 통해 수컷 뉴질랜드 흰토끼에게 AVS를 유도하는 새로운 절차를 제공하며, 이는 판막성 대동맥 협착증의 상태를 정확하게 모방할 수 있습니다. 이 프로토콜에는 준비, 수술 절차 및 수술 후 관리에 대한 단계별 설명이 포함되어 있어 재현 가능한 AVS 토끼 모델을 유도하는 데 유용합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
동물 AVS 모델은 일반적으로 AVS의 시작 및 진행을 포함하여 AVS의 병리학적 측면을 연구하는 데 사용됩니다. 이 프로토콜은 대동맥 판막의 직접적인 풍선 손상으로 인한 새로운 토끼 AVS 모델을 소개합니다. 이 연구에서 대동맥 판막 손상 모델은 상당한 소엽 두꺼움 및 석회화를 보여주었습니다. 식이 보충제에 의해 유도된 경증 AVS 모델과 비교했을 때, 직접 풍선 손상 모델의 대동맥 판막은 선택적?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
본 연구는 한국산업통상자원부(MSIT)가 지원하는 한국연구재단(NRF) 보조금(제2020R1A4A3079570호), 교육부(제2021R1I1A1A01051425호), 산업통상자원부가 지원하는 산업전략기술개발사업(제20014873호)의 지원을 받았다.
Materials
| 3-0 Silk suture | AILEE | SK312 | |
| 4% paraformaldehyde(PFA) | Intron | IBS-BP031-2 | |
| Alizarin red Solution | Millpore | TMS-008-C | |
| ASAHI SION BLUE | ASAHI | Guide wire | |
| Back Table Cover | Yuhan kimberly | 80101-30 | |
| Balloon In-deflation Device | Demax Medical | DID30s | |
| Bionet Veterinary monitor | BIONET | BM3 VET | |
| C-Arm | SIEMENS Healthcare GmbH | Cios alpha | |
| Certified Rabbit Diet | Purina | 5322 | 4.7% Hydrogenated Coconut Oil, 0.5% Cholesterol, & 1% Molasse |
| Curadle Smart Incubator | Autoelex | CS-CV206 | Intensive Care Unit (ICU) |
| Ergocalciferol | Sigma-aldrich | E5750 | Vitamin D2 |
| Fechtner conjunctiva forceps titanium | WORLD PRECISSION Instrument | WP1820 | |
| Forceps | HEBU | HB203 | |
| Gentamicin | Shin Poong | ||
| Glycopyrrolate | SamChunDang | ||
| Greenflex NS | DAI HAN PHARM | Normal saline 500 mL | |
| Hematoxylin solution | Sigma-aldrich | HT1079-1 SET | |
| Heparin | JW pharmaceutical | 25,000 U | |
| Infusion set for single use | SWOON MEDICAL | ||
| Iodine | Green pharmaceutical | ||
| Iodixanol | GE Healthcare | Visipaque | Inflation solution (contrast agent) |
| IV catheter 22 G | BD | 382423 | |
| IV catheter 24 G | BD | 382412 | |
| Ketoprofen | SamChunDang | ||
| Luer-Lok syringe 10 mL | Becton Dickinson Medical | ||
| Luer-Lok syringe 3 mL | Becton Dickinson Medical | ||
| Microscope | OLYMPUS | SZ61 | |
| Microtome | ThermoFisher Scientific | HM 325 | |
| MT stain kit | Sigma-aldrich | HT15-1kt | |
| Needel holder | Solco | 009-1304 | |
| Needle Holder with Lock and Suture | JEUNGDO BIO & PLANT | H-1222-18 | |
| Paraffin | LK LABKOREA | H06-660-107 | |
| PBS | Gibco | 10010-023 | |
| Potassium chloride 40 | Daihan Pharm | KCl | |
| Prelude Ideal Hydrophilic Sheath | MERIT MEDICAL | PID4F11018SS | Sheath 4F |
| PTA Balloon Dilatation catheter | Boston Scientific | H749-3903280208-0 | Balloon catheter 8.0 mm |
| Rompun | Elanco | Xylaxine | |
| sterile Gauze | DAE HAN Medical | 10 cm x 20 cm | |
| Surgical Gloves | Ansell | Ansell | |
| Surgical Gown | Yuhan kimberly | 90002-02 | |
| Surgical Scissors | Nopa, Germany | AC020/16 | |
| Surgical Tape | 3M micopore | 1530-1 | |
| Syringe 1 mL | Shin Chang Medical | ||
| Syringe 10 mL | Shin Chang Medical | ||
| Tissue cassette | Scilav korea | Cas3003 | |
| Transducer gel | SUNGHEUNG | SH102 | |
| Tridol | Yuhan Corp. | Tramadol HCl | |
| Ultrasound system | Philps | Affiniti 50 | |
| Von Kossa stain kit | Abcam | ab105689 | |
| Zoletil 50 | Virbac korea | Tiletamine & zolazepam |
Riferimenti
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