直接バルーン損傷によるウサギ大動脈弁狭窄モデル
Summary
大動脈弁狭窄症(AVS)の根底にある病理学的メカニズムを理解し、治療的介入の有効性を評価するには、適切な動物モデルが必要である。本プロトコルは、in vivoでの直接バルーン損傷を介してAVSウサギモデルを開発するための新しい手順を説明しています。
Abstract
動物モデルは、大動脈弁狭窄症(AVS)の根底にある病理学的メカニズムを理解するための重要なツールとして浮上しています。さまざまな動物モデルの中で、AVSウサギモデルは、大動物実験で最も一般的に使用されるモデルの1つです。しかし、従来のAVSウサギモデルでは、大動脈弁に著しい狭窄を誘発するために長期間の栄養補助食品と遺伝子操作が必要であり、実験的研究での使用が制限されています。これらの制限に対処するために、狭窄が大動脈弁への直接バルーン損傷によって誘発される新しいAVSウサギモデルが提案されています。本プロトコルは、ニュージーランドの白ウサギ(NZW)でAVSを誘発するための成功した技術を、準備、外科的処置、および術後ケアの段階的な手順で説明しています。このシンプルで再現性のあるモデルは、AVSの開始と進行を研究するための有望なアプローチを提供し、疾患の根本的な病理学的メカニズムを調査するための貴重なツールを提供します。
Introduction
大動脈弁狭窄症(AS)の進行に関連する罹患したヒト大動脈弁の信頼できる情報源へのアクセスがないため、適切な動物モデルの使用が大動脈弁狭窄症(AVS)の根底にある病理学的メカニズムのより良い理解に貢献できることがますます認識されています。AVSを研究するためのさまざまな動物モデルの中で、ウサギは最も一般的に使用される大型動物のAVSモデルの1つであり、AVSウサギモデルはコレステロール/ビタミンD2の補給または遺伝子操作のいずれかによって誘導されます1,2,3,4。
ウサギAVSモデルは、AVSの発達と進行に関する重要な洞察を提供してきましたが、私たちの予備実験で見られるように、AVSを一貫して再現性よく誘導することは依然として困難です。
食餌誘発性および遺伝的に感受性のある動物モデルに加えて、マウスの直接的な機械的損傷によってAVSの新しいモデルが確立されました5,6。機械的損傷モデルは、大動脈弁狭窄症の誘導に成功し、野生型マウスにおける単純で再現性のあるAVSモデルを表しています。私たちの知る限り、ウサギモデルにおける大動脈弁に対する機械的損傷の影響を調べた先行研究はありません。したがって、この研究は、大動脈弁への直接バルーン損傷を介して雄のニュージーランド白ウサギにAVSを誘発するための新しい手順を提供します 弁膜症の状態を正確に模倣することができます。このプロトコルには、準備、外科的処置、および術後ケアの段階的な説明が含まれており、再現性のあるAVSウサギモデルを誘導するのに役立ちます。
Protocol
Representative Results
Discussion
動物AVSモデルは、AVSの開始と進行を含むAVSの病理学的側面を研究するために一般的に使用されます。このプロトコルは、大動脈弁への直接バルーン損傷によって誘発される新しいウサギAVSモデルを導入します。この研究では、大動脈弁損傷モデルで有意な弁尖肥厚と石灰化が示されました。栄養補助食品によって誘発された軽度のAVSモデルと比較して、直接バルーン損傷モデルの大動脈弁は?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
本研究は、韓国政府(MSIT)の助成を受けた韓国国立研究財団(NRF)(No.2020R1A4A3079570)、教育部(No.2021R1I1A1A01051425)、大韓民国の産業通商資源部が資金提供する産業戦略技術開発計画(No.20014873)の支援を受けて行われました。
Materials
| 3-0 Silk suture | AILEE | SK312 | |
| 4% paraformaldehyde(PFA) | Intron | IBS-BP031-2 | |
| Alizarin red Solution | Millpore | TMS-008-C | |
| ASAHI SION BLUE | ASAHI | Guide wire | |
| Back Table Cover | Yuhan kimberly | 80101-30 | |
| Balloon In-deflation Device | Demax Medical | DID30s | |
| Bionet Veterinary monitor | BIONET | BM3 VET | |
| C-Arm | SIEMENS Healthcare GmbH | Cios alpha | |
| Certified Rabbit Diet | Purina | 5322 | 4.7% Hydrogenated Coconut Oil, 0.5% Cholesterol, & 1% Molasse |
| Curadle Smart Incubator | Autoelex | CS-CV206 | Intensive Care Unit (ICU) |
| Ergocalciferol | Sigma-aldrich | E5750 | Vitamin D2 |
| Fechtner conjunctiva forceps titanium | WORLD PRECISSION Instrument | WP1820 | |
| Forceps | HEBU | HB203 | |
| Gentamicin | Shin Poong | ||
| Glycopyrrolate | SamChunDang | ||
| Greenflex NS | DAI HAN PHARM | Normal saline 500 mL | |
| Hematoxylin solution | Sigma-aldrich | HT1079-1 SET | |
| Heparin | JW pharmaceutical | 25,000 U | |
| Infusion set for single use | SWOON MEDICAL | ||
| Iodine | Green pharmaceutical | ||
| Iodixanol | GE Healthcare | Visipaque | Inflation solution (contrast agent) |
| IV catheter 22 G | BD | 382423 | |
| IV catheter 24 G | BD | 382412 | |
| Ketoprofen | SamChunDang | ||
| Luer-Lok syringe 10 mL | Becton Dickinson Medical | ||
| Luer-Lok syringe 3 mL | Becton Dickinson Medical | ||
| Microscope | OLYMPUS | SZ61 | |
| Microtome | ThermoFisher Scientific | HM 325 | |
| MT stain kit | Sigma-aldrich | HT15-1kt | |
| Needel holder | Solco | 009-1304 | |
| Needle Holder with Lock and Suture | JEUNGDO BIO & PLANT | H-1222-18 | |
| Paraffin | LK LABKOREA | H06-660-107 | |
| PBS | Gibco | 10010-023 | |
| Potassium chloride 40 | Daihan Pharm | KCl | |
| Prelude Ideal Hydrophilic Sheath | MERIT MEDICAL | PID4F11018SS | Sheath 4F |
| PTA Balloon Dilatation catheter | Boston Scientific | H749-3903280208-0 | Balloon catheter 8.0 mm |
| Rompun | Elanco | Xylaxine | |
| sterile Gauze | DAE HAN Medical | 10 cm x 20 cm | |
| Surgical Gloves | Ansell | Ansell | |
| Surgical Gown | Yuhan kimberly | 90002-02 | |
| Surgical Scissors | Nopa, Germany | AC020/16 | |
| Surgical Tape | 3M micopore | 1530-1 | |
| Syringe 1 mL | Shin Chang Medical | ||
| Syringe 10 mL | Shin Chang Medical | ||
| Tissue cassette | Scilav korea | Cas3003 | |
| Transducer gel | SUNGHEUNG | SH102 | |
| Tridol | Yuhan Corp. | Tramadol HCl | |
| Ultrasound system | Philps | Affiniti 50 | |
| Von Kossa stain kit | Abcam | ab105689 | |
| Zoletil 50 | Virbac korea | Tiletamine & zolazepam |
Riferimenti
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