यहां, हम आणविक ऑक्सीजन का उपभोग करने की उनकी क्षमता से स्वतंत्र रूप से स्तनधारी कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को सीधे मापने के लिए परख का एक संकलन प्रस्तुत करते हैं।
माइटोकॉन्ड्रियल इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला (ईटीसी) में इलेक्ट्रॉनों का प्रवाह स्तनधारी कोशिकाओं में बहुमुखी बायोसिंथेटिक, बायोएनर्जेटिक और सिग्नलिंग कार्यों का समर्थन करता है। चूंकि ऑक्सीजन (ओ 2) स्तनधारी ईटीसी के लिए सबसे सर्वव्यापी टर्मिनल इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता है, इसलिए ओ2 खपत दर अक्सर माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन के लिए प्रॉक्सी के रूप में उपयोग की जाती है। हालांकि, उभरते शोध से पता चलता है कि यह पैरामीटर हमेशा माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का संकेत नहीं है, क्योंकि फ्यूमरेट को हाइपोक्सिया में माइटोकॉन्ड्रियल कार्यों को बनाए रखने के लिए वैकल्पिक इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता के रूप में नियोजित किया जा सकता है। यह लेख प्रोटोकॉल की एक श्रृंखला संकलित करता है जो शोधकर्ताओं को ओ2 खपत दर से स्वतंत्र रूप से माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को मापने की अनुमति देता है। हाइपोक्सिक वातावरण में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का अध्ययन करते समय ये परख विशेष रूप से उपयोगी होते हैं। विशेष रूप से, हम माइटोकॉन्ड्रियल एटीपी उत्पादन, डी नोवो पाइरिमिडीन बायोसिंथेसिस, कॉम्प्लेक्स आई द्वारा एनएडीएच ऑक्सीकरण और सुपरऑक्साइड उत्पादन को मापने के तरीकों का वर्णन करते हैं। शास्त्रीय श्वास-मिथुमिति प्रयोगों के संयोजन में, ये ऑर्थोगोनल और किफायती परख शोधकर्ताओं को उनकी रुचि की प्रणाली में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का अधिक व्यापक मूल्यांकन प्रदान करेंगे।
माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन सेलुलर स्वास्थ्य का एक महत्वपूर्ण मीट्रिक है, क्योंकि यहस्तनधारी कोशिकाओं में प्रमुख बायोसिंथेटिक, बायोएनर्जेटिक और सिग्नलिंग कार्यों को बनाए रखता है। माइटोकॉन्ड्रियल कार्यों के विशाल बहुमत को इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला (ईटीसी) के माध्यम से इलेक्ट्रॉन प्रवाह की आवश्यकता होती है, और ईटीसी में इलेक्ट्रॉन प्रवाह में व्यवधान गंभीर माइटोकॉन्ड्रियल रोग2 का कारण बनता है। ईटीसी में कमी और ऑक्सीकरण (रेडॉक्स) प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला शामिल है जो आंतरिक माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली में एम्बेडेड हैं, और ये इलेक्ट्रॉन स्थानांतरण प्रतिक्रियाएं मुक्त ऊर्जा जारी करती हैं जिन्हें एटीपी संश्लेषण, थर्मोजेनेसिस जैसी शारीरिक प्रक्रियाओं, बायोसिंथेटिक मार्गों जैसे डे नोवो पाइरीमिडीन बायोसिंथेसिस और एनएडीएच जैसे सह-कारकों की रेडॉक्स स्थिति के संतुलन का समर्थन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है। ईटीसी कॉम्प्लेक्स I और III प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS) 3,4,5 का उत्पादन करते हैं, जो बदले में, HIF, PI3K, NRF2, NF3B, और MAP6 जैसे सिग्नलिंग प्रमुख मार्गों को नियंत्रित करते हैं। नतीजतन, ईटीसी में इलेक्ट्रॉन प्रवाह के मैट्रिक्स को स्तनधारी कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन के लिए प्रॉक्सी के रूप में शास्त्रीय रूप से उपयोग किया जाता है।
स्तनधारी कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को मापने के लिए श्वसनमिति प्रयोगों को अक्सर नियोजित किया जाता है। चूंकि ओ2 स्तनधारी ईटीसी के लिए सबसे सर्वव्यापी टर्मिनल इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता है, इसलिए इसकी कमी का उपयोग माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन के लिए प्रॉक्सी के रूप में किया जाता है। हालांकि, उभरते सबूत दर्शाते हैं कि स्तनधारी माइटोकॉन्ड्रिया माइटोकॉन्ड्रियल कार्यों को बनाए रखने के लिए इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता के रूप में फ्यूमरेट को नियोजित कर सकते हैं जो ईटीसी पर निर्भर करते हैं, जिसमें डे नोवो पाइरीमिडीन बायोसिंथेसिस 7, एनएडीएच ऑक्सीकरण7, और हाइड्रोजन सल्फाइड8 का विषहरण शामिल है। इस प्रकार, कुछ संदर्भों में, विशेष रूप से हाइपोक्सिक वातावरण में, ओ2 खपत दर (ओसीआर) के माप माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का सटीक या सटीक संकेत प्रदान नहीं करते हैं।
यहां, हम परख की एक श्रृंखला को रेखांकित करते हैं जिसे ओसीआर से स्वतंत्र रूप से माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को मापने के लिए नियोजित किया जा सकता है। हम सीधे जटिल आई-मध्यस्थता एनएडीएच ऑक्सीकरण, डाइहाइड्रोरोटेट डिहाइड्रोजनेज-मध्यस्थता डे नोवो पाइरिमिडीन बायोसिंथेसिस, जटिल वी-निर्भर एटीपी संश्लेषण, सक्सिनेट डिहाइड्रोजनेज (एसडीएच) कॉम्प्लेक्स की शुद्ध दिशात्मकता और माइटोकॉन्ड्रियल-व्युत्पन्न आरओएस को मापने के लिए परख प्रदान करते हैं। ये परख सुसंस्कृत स्तनधारी कोशिकाओं पर किए जाने के लिए हैं, हालांकि कई को विवो में माइटोकॉन्ड्रियल कार्यों का अध्ययन करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। विशेष रूप से, इस प्रोटोकॉल में वर्णित परख ओसीआर की तुलना में माइटोकॉन्ड्रियल कार्यों के अधिक प्रत्यक्ष माप हैं। इसके अलावा, वे हाइपोक्सिया में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन के माप को सक्षम करते हैं, एक संदर्भ जिसमें ओसीआर एक संकेतक माप नहीं है। एक साथ लिया गया, शास्त्रीय श्वास-मिथुमिति प्रयोगों के संयोजन में ये परख, शोधकर्ताओं को स्तनधारी कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का अधिक व्यापक मूल्यांकन प्रदान करेंगे।
जैसा कि उभरते शोध से पता चलता है कि स्तनधारी माइटोकॉन्ड्रिया आणविक ऑक्सीजन का उपभोग किए बिना कार्य कर सकते हैं, शोधकर्ताओं के लिए माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को सटीक रूप से निर्धारित करने के लिए ओसीआर माप से परे ऑर्थोगोनल परख को नियोजित करना अत्यंत महत्वपूर्ण है। यहां, हमने परख ों की एक श्रृंखला संकलित की है जिसका उपयोग माइटोकॉन्ड्रियल एनएडी + / एनएडीएच संतुलन, अनुकूली टर्मिनल इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता के उपयोग, एटीपी के उत्पादन, डी नोवो पाइरीमिडीन बायोसिंथेसिस और माइटोकॉन्ड्रियल-व्युत्पन्न आरओएस को मापकर कॉम्प्लेक्स I, कॉम्प्लेक्स II, कॉम्प्लेक्स वी और डीएचओडीएच की गतिविधियों का सीधे आकलन करने के लिए किया जा सकता है। विशेष रूप से, ये परख ओसीआर माप की तुलना में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को अधिक सीधे मापते हैं। इसके अलावा, ये परख शोधकर्ताओं को हाइपोक्सिया के दौरान माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को निर्धारित करने के लिए वापस लेने योग्य तरीके प्रदान करते हैं, जिसके लिए ओसीआर माप पसंदीदा टर्मिनल इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता के रूप में उपयोग किए जाने वाले फ्यूमरेट के कारण काफी हद तक अप्रासंगिक हैं। अंत में, यहां वर्णित प्रसार-आधारित विधियां शास्त्रीय श्वास-मिथुमिति प्रयोगों की तुलना में अधिक लागत प्रभावी हैं, इस प्रकार स्तनधारी प्रणालियों में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का अध्ययन करने के लिए व्यापक रूप से सुलभ तरीका प्रदान करती हैं।
सुसंस्कृत कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को मापने के लिए इन परखों का उपयोग करते समय महत्वपूर्ण विचार हैं। प्रसार परख के संबंध में, प्रत्येक सेल लाइन की दोगुनी दर के लिए बीज ति कोशिकाओं की संख्या को समायोजित करना महत्वपूर्ण है। कोशिकाओं को कम से कम 10% संगम के लिए बीज दिया जाना चाहिए और तीन से चार दोहरीकरण की अनुमति देने के लिए पर्याप्त जगह के साथ ताकि प्रसार में अंतर को निर्धारित किया जा सके। प्रत्येक परख के लिए एक और विचार प्रत्येक ईटीसी कॉम्प्लेक्स की गतिविधियों के लिए नियंत्रण के रूप में उपयोग किए जाने वाले छोटे अणुओं की एकाग्रता है। चूंकि विभिन्न सेल लाइनें इन अवरोधकों के लिए अलग-अलग संवेदनशीलता प्रदर्शित कर सकती हैं, इसलिए इष्टतम एकाग्रता की पहचान करने के लिए इन छोटे अणुओं की खुराक का परीक्षण करना महत्वपूर्ण है।
ओसीआर माप और यहां वर्णित सभी परखों सहित विट्रो में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का अध्ययन करने वाले परख ों की एक सार्वभौमिक सीमा, संस्कृति माध्यम की चयापचय संरचना है। मानक सेल कल्चर माध्यम माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन के सतही रूप से उच्च स्तर में सिस्टम को पूर्वाग्रह ति करता है। उदाहरण के लिए, सुप्राफिजियोलॉजिकल ग्लूटामाइन का स्तर टीसीए चक्र25 के अपने एनाप्लेरोसिस को बढ़ाता है, जो माइटोकॉन्ड्रियल एनएडीएच संश्लेषण को ईंधन देता है और परिणामस्वरूप, ऑक्सीडेटिव फॉस्फोराइलेशन को बढ़ाता है। इसी तरह, स्तनधारी ऊतकों में ऑक्सीजन का आंशिक दबाव 3 mmHg और 100 mmHg (लगभग 0.1% -13%O2) के बीच होता है, लेकिन विट्रो26,27 में वायुमंडलीय (140 mmHg, लगभग 21%) है। यह अतिरिक्त ओ2 माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन क्षमता और सुपरऑक्साइड उत्पादन28 को अधिकतम करता है। हाल ही में, संस्कृति मीडिया को अधिक शारीरिक29,30 बनाने के लिए प्रयास किए गए हैं। विशेष रूप से, मानव प्लाज्मा जैसे मीडिया में कोशिकाओं की खेती कुछ कैंसर सेल लाइनों30 में माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन को कम करती है, टी कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस31, और कैंसर चिकित्सीय32 में माइटोकॉन्ड्रियल अनुकूलन। इस प्रकार, उपयोग किए जा रहे संस्कृति मीडिया की संरचना के प्रति सावधान रहना और समझना महत्वपूर्ण है कि यह माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को कैसे प्रभावित कर सकता है।
माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन की व्याख्या में एक और महत्वपूर्ण और सार्वभौमिक सीमा माइटोकॉन्ड्रिया की संख्या में अंतर की संभावना है। इसलिए, एमटीडीएनए33 की मात्रा का परिमाणन, झिल्ली संभावित-असंवेदनशील रंजक34 के साथ माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान का माप, या माइटोकॉन्ड्रियल मार्करों के पश्चिमी सोख्ता के माध्यम से माइटोकॉन्ड्रियल सामग्री को मापना महत्वपूर्ण है। यह एक महत्वपूर्ण नियंत्रण है ताकि माइटोकॉन्ड्रिया की संख्या में कमी को माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन में कमी के लिए गलत न माना जाए।
विशिष्ट सीमाएं और समस्या निवारण भी हैं जो यहां वर्णित परखों पर लागू होते हैं। सबसे पहले, यह देखते हुए कि विभेदित कोशिकाएं प्रसार नहीं करती हैं, प्रसार-आधारित परख इस संदर्भ में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का आकलन करने के लिए उपयोगी नहीं होगी। डीएचओडीएच गतिविधि को मापने के लिए 13सी 4-एस्पार्टेट ट्रेसिंग प्रोटोकॉल की एक प्रमुख सीमा यह है कि कोशिकाओं में एस्पार्टेट अपटेकबेहद अक्षम हो सकता है। इस संभावित सीमा को दूर करने के लिए, शोधकर्ता 13सी 4-एस्पार्टेट अपटेक35 की सुविधा के लिए एस्पार्टेट ट्रांसपोर्टर, एसएलसी 1 ए 3 को ओवरएक्सप्रेस कर सकते हैं।
एसडीएच गतिविधि को मापने के लिए 13सी 5-ग्लूटामाइन ट्रेसिंग का उपयोग करने वाले प्रोटोकॉल की एक सीमा यह है कि इस परख को रिवर्स गतिविधि को मापने के लिए एम + 3 आइसोटोपोलॉग को समृद्ध करने के लिए कोशिकाओं को रिडक्टिव कार्बोक्सिलेशन मार्ग का उपयोग करने की आवश्यकता होती है। कुछ सेल लाइनें कम एटीपी साइट्रेट लाइज़ अभिव्यक्ति36, अपर्याप्त एचआईएफ स्थिरीकरण 37, या α-केजी: साइट्रेट अनुपात के कारण रिडक्टिव कार्बोक्सिलेशन फ्लक्स में असमर्थ हैं जो बहुत कम38 है। इस सीमा को दूर करने के लिए, कोई एसडीएच आगे औररिवर्स गतिविधियों को मापने के लिए 13सी 4-एस्पार्टेट ट्रेसिंग का उपयोग कर सकता है। इस परख में, एसडीएच फॉरवर्ड गतिविधि को फ्यूमरेट एम + 2: सक्सिनेट एम + 2 के अनुपात और सक्सिनेट एम + 4: फ्यूमरेट एम + 4 द्वारा रिवर्स प्रतिक्रिया द्वारा मापा जा सकता है। विशेष रूप से, यह अनुरेखण रिडक्टिव कार्बोक्सिलेशन मार्ग में अधिकांश एंजाइमों को दरकिनार करता है।
रीडआउट के रूप में डीसीपीआईपी कमी का उपयोग करके जटिल आई गतिविधि परख की एक सीमा यह है कि माइटोकॉन्ड्रिया संरचनात्मक रूप से बरकरार नहीं हैं। परख के लिए उनके एनएडीएच अपटेक को सक्षम करने के लिए माइटोकॉन्ड्रिया को फ्रीज-पिघलाने की प्रक्रिया निश्चित रूप से माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली39 की संरचनात्मक अखंडता को धूमिल कर सकती है। इस परख को जटिल आई प्रसार परख जैसे परखों के समानांतर किया जाना चाहिए ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि जटिल आई गतिविधि में परिवर्तन बरकरार कोशिकाओं के साथ भी सच हैं।
भविष्य के अध्ययनों में, इनमें से कुछ तकनीकों को चूहों और केनोरहाब्डिस एलिगेंस जैसे मॉडल जीवों का उपयोग करके विवो में माइटोकॉन्ड्रियल कार्यों को मापने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।विवो में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को मापने के लिए उपयोग की जाने वाली वर्तमान विधियां जीव-स्तर ओसीआर पर केंद्रित हैं, विशेष रूप से माउस मॉडल का उपयोग करते समय श्वसन विनिमय दर। इस विधि की एक स्पष्ट सीमा यह है कि ऑक्सीजन माइटोकॉन्ड्रियल ईटीसी में सर्वव्यापी टर्मिनल इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता के रूप में अपनी भूमिका से परे कई जैव रासायनिक और सिग्नलिंग कार्यों को पूरा करता है। उदाहरण के लिए, डाइऑक्सीजेनेस परिवार में एंजाइमों की उत्प्रेरक गतिविधि द्वारा ऑक्सीजन का “खपत” किया जाता है। यद्यपि ये एंजाइम सेलुलर ऑक्सीजन खपत दर में योगदान करते हैं, वे माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन में भाग नहीं लेते हैं, विनियमित करते हैं या प्रतिबिंबित नहीं करते हैं। विट्रो में शास्त्रीय श्वसन-मिथुमेट्री प्रयोग आमतौर पर “गैर-माइटोकॉन्ड्रियल ओसीआर” के लिए नियंत्रण करते हैं, जबकि जीव श्वसन विनिमय अनुपात (आरईआर) प्रयोग इसके लिए नियंत्रित नहीं कर सकते हैं, विवो में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन के लिए एक मीट्रिक के रूप में आरईआर की व्याख्या को सीमित करते हैं। हालांकि, विवो में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को मापने के लिए 13 सी 4-एस्पार्टेट ट्रेसिंग के माध्यम से डीएचओडीएच गतिविधि को मापने के लिए प्रोटोकॉल को अनुकूलित करना संभव है, 13सी5-ग्लूटामाइन ट्रेसिंग के माध्यम से जटिल द्वितीय गतिविधि, ऊतकों से शुद्ध माइटोकॉन्ड्रिया पर जटिल आई गतिविधि, और एलसी-एमएस अनुकूल यौगिकों जैसे कि माइटोबी का उपयोग करके माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस।. शास्त्रीय श्वसनमिति प्रयोगों के संयोजन में माइटोकॉन्ड्रियल कार्यों से पूछताछ करने के लिए ये प्रत्यक्ष परख, शोधकर्ताओं को स्तनधारी कोशिकाओं और ऊतकों में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का अधिक व्यापक और सटीक मूल्यांकन प्रदान करते हैं।
The authors have nothing to disclose.
इस पांडुलिपि में उत्पादित आंकड़े BioRender.com के साथ बनाए गए थे। हम इस लेख पर प्रतिक्रिया प्रदान करने के लिए एमी वॉकर के आभारी हैं। जेबीएस को बायोमेडिकल रिसर्च ग्रांट के लिए वॉर्सेस्टर फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था।
1.5 mL tube | Cell Treat | 667443 | |
2.0 mL tube | Cell Treat | 229446 | |
6-well plate | Cell Treat | 229106 | |
12-well plate | Cell Treat | 229112 | |
13C4-aspartate | Sigma-Aldrich | 604852 | |
13C5-Glutamine | Cambridge Isotope Laboratories | 285978-14-5 | |
15 mL centrifuge tube | Cell Treat | 667411 | |
50 mL centrifuge tube | Cell Treat | 667421 | |
150 mm tissue culture dish | Cell Treat | 229651 | |
1x Phosphate-buffered saline | Gibco | 10010049 | |
2,6-dichlorophenolindophenol | Honeywell | 33125 | |
Ammonium Carbonate | Sigma-Aldrich | 37999 | |
Antimycin | Sigma-Aldrich | A8674 | |
Ascentis Express C18 | Sigma-Aldrich | 53825-U | |
Bottle top filter 500 mL, 0.22 µm, PES 9 9 mm membrane diameter | Cell Treat | 229717 | |
Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A3294 | |
Brequinar | Sigma-Aldrich | SML0113 | |
Cell Lifter, Double End Flat and Narrow Blade | Cell Treat | 229305 | |
CentriVap -105 Cold Trap | Labconco | 7385020 | |
Complete Protease Inhibitor Tablets | Sigma-Aldrich | 4693116001 | |
Coulter Counter Cups | Fisher Scientific | 07-000-694 | |
Decylubiquinone | Sigma-Aldrich | D7911 | |
DMSO | Invitrogen | D12345 | |
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) | Gibco | 11995-065 | |
EDTA | Sigma-Aldrich | E6758 | |
EGTA | Sigma-Aldrich | E3889 | |
Eppendorf Centrifuge 5425R | Eppendorf | 2231000908 | |
Eppendorf Centrifuge 5910 Ri | Eppendorf | 5943000343 | |
Galactose | Sigma-Aldrich | G5388 | |
Glucose | Sigma-Aldrich | G7021 | |
Glucose-free DMEM | Gibco | 11966025 | |
Glutamine-free DMEM | Thermo Fisher | 11960044 | |
Heat-Inactivated Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F4135 | |
Hepes | Sigma-Aldrich | H3375 | |
HPLC-grade 35% Ammonium hydroxide | Thermo Scientific | 460801000 | |
HPLC-grade Acetonitrile | Sigma-Aldrich | 900667 | |
HPLC-grade Chloroform | Sigma-Aldrich | 366927 | |
HPLC-grade formic acid | Thermo Scientific | 28905 | |
HPLC-grade Isopropanol | Sigma-Aldrich | 563935 | |
HPLC-grade MeOH | Sigma-Aldrich | 900688 | |
HPLC-grade Water | Sigma-Aldrich | 270733 | |
Human Osteosarcome Cell Line 143B | ATCC | CRL-8303 | |
Hydrochloric Acid | Sigma-Aldrich | 320331-500ML | |
Isotone buffer | Beckman Coulter | 8546719 | |
K2HPO4 | Sigma-Aldrich | P2222 | |
Mannitol | Sigma-Aldrich | M4125 | |
MitoSox Red | Invitrogen | M36008 | |
N-acetyl-L-cysteine | Sigma-Aldrich | A9165 | |
Oligomycin | Sigma-Aldrich | 75351-5MG | |
Pencillin Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
Potter-Elvehjem Tissue Grinder, Size 21 | Kimble | 885502-0021 | |
Pyruvate | Sigma-Aldrich | P5280 | |
Pyruvate-free DMEM media | Gibco | 11965175 | |
Q Exactive Plus Mass Spectrometer | Thermo Scientific | 726030 | |
ReCO2ver Incubator | Baker | ||
Refrigerated Centrivap Benchtop Vacuum Concentrator | Labconco | 7310020 | |
RIPA Buffer | Millipore Sigma | 20188 | |
Rotenone | Sigma-Aldrich | R8875 | |
SeQuant ZIC-pHILIC 5μm 150 x 2.1 mm analytical column | Sigma-Aldrich | 1.50460.0001 | |
SeQuant ZIC-pHILIC guard kit | Millipore Sigma | 1.50438.0001 | |
Sodium Hydroxide, Pellets | Millipore Sigma | 567530-250GM | |
Sucrose | Sigma-Aldrich | S0389 | |
SW, TRACEFINDER 5.1 SP3 | Thermo Scientific | OPTON-31001 | |
Tert-butyl hydroperoxide solution | Sigma-Aldrich | 458139 | |
Tris | Sigma-Aldrich | 93352 | |
Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | Gibco | 25-200-114 | |
Uridine | Sigma-Aldrich | U3003 | |
VANQUISH HORIZON / FLEX HPLC | Thermo Scientific | VF-S01-A-02 | |
Z2 Coulter Particle count and size analyzer | Beckman Coulter | BZ10131270 |