माउस 2-photon माइक्रोस्कोपी का उपयोग thymus के स्वस्थानी इमेजिंग में
Summary
हम नवजात chimeras की पीढ़ी के रूप में के रूप में अच्छी तरह से विच्छेदन और 2-photon माइक्रोस्कोपी द्वारा पूर्व vivo इमेजिंग के लिए thymus की तैयारी के लिए कदम दर कदम निर्देश उपस्थित थे.
Abstract
दो photon माइक्रोस्कोपी (TPM) हमें thymus में गहरी छवि के लिए सक्षम बनाता है और घटनाओं है कि thymocyte विकास के लिए महत्वपूर्ण हैं दस्तावेज़. Thymocytes की एक भीड़ में व्यक्तियों के प्रवास का पालन करने के लिए, हम नवजात chimeras जहां thymocytes के एक प्रतिशत से भी कम है कि सर्वत्र व्यक्त फ्लोरोसेंट प्रोटीन के लिए ट्रांसजेनिक है एक दाता से प्राप्त कर रहे हैं उत्पन्न करते हैं. इन आंशिक hematopoetic chimeras उत्पन्न करने के लिए, नवजात प्राप्तकर्ताओं उम्र के 3-7 दिनों के बीच अस्थि मज्जा के साथ अंतःक्षिप्त रहे हैं. 4-6 सप्ताह के बाद, माउस और बलिदान और thymus ध्यान से dissected है और ऊतक कि imaged किया जाएगा की वास्तुकला के संरक्षण bissected. thymus coverslip पर TPM द्वारा पूर्व vivo इमेजिंग के लिए तैयारी में सरेस से जोड़ा हुआ है. इमेजिंग के दौरान thymus DMEM में phenol के लाल है कि 95% ऑक्सीजन और 5% कार्बन डाइऑक्साइड के साथ perfused है और 37 को गरम डिग्री सेल्सियस के बिना रखा है इस दृष्टिकोण का उपयोग करना, हम एक विविध टी सेल प्रदर्शनों की सूची की पीढ़ी के लिए आवश्यक घटनाओं का अध्ययन कर सकते हैं.
Protocol
Discussion
Thymus में दो photon इमेजिंग हमें रहने वाले, बरकरार बातचीत और प्रवास है कि thymus भीतर चयन घटनाओं आबाद अंगों में जांच करने के लिए सक्षम बनाता है.
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम मैट पॉल और तकनीकी सहायता के लिए जिमी वू धन्यवाद.
Riferimenti
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