Gli embrioni di vespa Nasonia sono stati sezionati dalle pupe Lucillia sericata dopo parassitazione per 12-24 ore e lavati con alcool e soluzione di ipoclorito di sodio al 10% per ottenere embrioni privi di germi. Dopo aver allevato gli embrioni privi di germi e aver fornito loro il terreno di allevamento di Nasonia per crescere e svilupparsi in vitro, sono stati ottenuti adulti di Nasonia privi di germi.
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Articolo metodologico
Ottimizzazione della procedura di allevamento delle vespe prive di germi
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
La tecnologia di allevamento asettico è un metodo di coltura di insetti in condizioni sterili o quasi sterili, che può eliminare efficacemente l'influenza di microrganismi esterni sul microbiota degli insetti e quindi promuovere il rapido sviluppo della ricerca sul microbiota degli insetti. Nasonia (genere vespa) è un insetto vespa parassita che ha molti vantaggi, come una breve durata della vita, un'elevata variazione genetica, un funzionamento facile, ecc., Ed è ampiamente usato come sistema modello di insetti. A differenza del trattamento antibiotico, che può solo ridurre il numero di microrganismi negli animali, le tecniche di allevamento asettico possono controllare sia la composizione che la quantità di microrganismi negli animali, facilitando ulteriormente lo studio delle interazioni ospite-microbo. Tuttavia, le versioni precedenti del terreno di allevamento Nasonia (NRM) presentano alcuni difetti e problemi, come un processo di preparazione complesso e dispendioso in termini di tempo, una facile contaminazione da batteri o funghi e un breve tempo di conservazione. Pertanto, questo studio risolve questi problemi ottimizzando gli strumenti utilizzati nel processo di preparazione NRM, le condizioni di stoccaggio e i rapporti dei componenti. Il mezzo ottimizzato potrebbe consentire la conservazione a -20 °C per almeno 3 mesi ed eliminare la possibilità di contaminazione da NRM durante l'alimentazione di vespe sterili. Ciò migliora ulteriormente il tasso di sopravvivenza e il livello di salute della nasonia asettica , che è importante per l'utilizzo della nasonia come modello per la ricerca microbica.
Introduzione
Gli animali privi di germi sono animali che non hanno microrganismi viventi e parassiti rilevabili1. Gli embrioni privi di germi possono essere ottenuti sezionando la madre in condizioni asettiche e successivamente allevati in sistemi di barriera2. Tali animali possono essere utilizzati per studiare gli effetti dei microrganismi sugli animali, come sul microbiota intestinale, sul sistema immunitario e sul metabolismo1. Con alcuni mezzi tecnici, molti insetti e persino mammiferi possono essere resi sterili 3,4. Gli ani....
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Protocollo
1. Preparazione delterreno di allevamento dellaNasonia privo di germi
- Posizionare le pupe di L. sericata disponibili in commercio (vedi Tabella dei materiali) su una superficie che possa ospitare tutte le pupe, come un vassoio o un foglio di carta. Scartare eventuali larve sottosviluppate, vecchie pupe scure, gusci vuoti, segatura o altre impurità. Tenere solo le giovani pupe di colore rosso-brunastro e trasferirle in un becher (circa 3.000-4.000 pupe).
NOTA: Dopo aver condotto molti esperimenti, è stato scoperto che il mezzo ricavato dalle vecchie pupe scure diventava facilmente scuro ....
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Risultati
L'efficienza di preparazione di NRM è stata notevolmente migliorata migliorando gli strumenti di preparazione. Inoltre, il problema dell'inquinamento NMR nel processo di alimentazione è stato eliminato ottimizzando la strategia e il metodo di conservazione. Allo stesso tempo, l'NRM aggiustato aveva un rapporto nutrizionale più adatto per la crescita e lo sviluppo di vespe prive di germi con L. sericata come ospiti. Il tasso di sopravvivenza delle vespe prive di germi dalle larve alle pupe è stato significativame.......
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Discussione
Con l'applicazione di tecnologie di rilevamento ad alto rendimento come la genomica e la metabolomica, i ricercatori hanno gradualmente capito che esiste un'enorme diversità genetica e complessità metabolica nel microbiota intestinale16. Questi batteri simbionti sono strettamente correlati a vari stati fisiologici o patologici, come il metabolismo nutrizionale dell'ospite, i tumori, l'immunità e l'invecchiamento attraverso complesse interazioni con l'ospite17. Tuttavia, la .......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Finanziamento: questo lavoro è stato sostenuto dalla National Science Foundation of China (32270538), dal National Key R&D Program of China (2022YFF0710603), dalla Natural Science Foundation di Pechino (6222046) e dal finanziamento strategico CAS tramite lo schema di finanziamento CAS-CSIRO (152111KYSB20210011) assegnato a G.H.W. Contributi dell'autore: tutti gli autori hanno sviluppato la portata e il focus della revisione e hanno contribuito alla stesura del manoscritto.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 0,22 Filtro sterile per vuoto | NEST | 331011 | |
| 10% ipoclorito di sodio | LIRCON | XB-84BS-1 | |
| 1x soluzione PBS | Solarbio | P1020 | |
| rete di nylon da 200 maglie | BIOBYING | BY-378Z | |
| 24 piastre a pozzetti | NEST | 702001 | |
| 8, 1,2, 0,8 e 0,45 µ m filtri | Shanghai Xingya Fabbrica di materiali di purificazione | HN-AA-JT-10079 | |
| Alcool etilico assoluto | Macklin | E809057-500ml | |
| Filtro cellulare | BIOLOGIX | 15-1100 | |
| Drosophila commerciale Boero medio | B645446-500ml | ||
| Ago da dissezione | Bioroyee | 17-9140 | |
| Pressa | per aglioTaobao | No Numeri di catalogo | Acquista su Taobao |
| Lucillia sericata pupae | Hefei Dayuan Biotechnology Co., Ltd. | Nessun numero di catalogo | Acquista su Taobao |
| Pennello da scrittura piccolo | Cestidur | BL0508 | |
| Stereoscopio | SOPTOP | RX50 | |
| Pinzetta | SALMART | A109001-56 |
Riferimenti
- Diviccaro, S., et al. Exploring the impact of the microbiome on neuroactive steroid levels in germ-free animals. International Journal of Molecular Sciences. 22 (22), 12551(2021).
- Pang, X., et al. Inter-specie....
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Ristampe e permessi
