Påvisning av Rabies IgG og IgM antistoffer ved hjelp av Rabies indirekte fluorescerende antistoff test
Summary
Målet med dette manuskriptet er å undersøke bruken av rabies indirekte fluorescerende antistofftest for påvisning av rabiesspesifikke IgG- og IgM-antistoffer.
Abstract
Rabies indirekte fluorescerende antistoff (IFA) -testen ble utviklet for å oppdage forskjellige rabiesspesifikke antistoffisotyper i sera eller cerebral spinalvæske. Denne testen gir raske resultater og kan brukes til å oppdage rabiesantistoffer i flere forskjellige scenarier. Rabies IFA-testen er spesielt nyttig for rask og tidlig påvisning av antistoffer for å evaluere immunresponsen hos en pasient som har utviklet rabies. Selv om andre metoder for antemortem rabiesdiagnose har forrang, kan denne testen brukes til å demonstrere nylig rabiesviruseksponering gjennom antistoffdeteksjon. IFA-testen gir ikke et virusnøytraliserende antistoff (VNA) titer, men preeksponeringsprofylakse (PrEP) respons kan evalueres gjennom positiv eller negativ antistofftilstedeværelse. Denne testen kan brukes i ulike situasjoner og kan gi resultater for en rekke ulike siktemål. I denne studien brukte vi flere parrede serumprøver fra personer som fikk PrEP og demonstrerte deres rabiesantistofftilstedeværelse over tid ved bruk av IFA-testen.
Introduction
Rabies indirekte fluorescerende antistoff (IFA) test brukes til å oppdage ulike rabiesspesifikke antistoffisotyper i sera eller cerebral spinalvæske. Det er en av et arsenal av tester tilgjengelig for overvåking av en antemortem rabies pasient. Det er spesielt nyttig for tidlig påvisning av antistoffer for å evaluere pasientens immunrespons mot rabiesinfeksjon. Når den brukes sammen med andre tester, sakshistorie og pasientens vaksinasjonsstatus, kan IFA-testen hjelpe til med å bestemme eksponering for rabiesvirus eller en vaksine1. Som IFA-testen måler IgM og / eller IgG, kan verdiene av det spesifikke antistoffet indikere en omtrentlig tidsramme fra eksponering for antigenet1. Denne testen kan være nyttig i de listede applikasjonene eller andre som ennå ikke er utforsket.
Det finnes flere rabieserologiske analyser. Den raske fluorescerende fokusinhiberingstesten (RFFIT), fluorescerende antistoffvirusnøytraliseringstest (FAVN) eller modifikasjoner av disse er de primære metodene for å måle rabiesvirusnøytraliserende antistoffer (RVNA)1. Imidlertid skiller disse testene ikke IgM- og IgG-antistoffer. Når differensiering av antistoffisotype er viktig for å overvåke rabiesimmunresponsen, brukes rabies IFA og rabies enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA) tester, men de måler ikke RVNA. Selv om IFA- og ELISA-testene kan brukes til å bestemme tilstedeværelsen av rabiesspesifikke antistoffer i en prøve, er det noen forskjeller i hvordan de utføres. IFA-testen benytter et cellekulturert levende virus som antigensubstrat, mens en typisk ELISA for rabiesdeteksjon bruker ett eller flere av virusproteinene. I en laboratorieinnstilling hvor rabiesviruset kan dyrkes, kan IFA-testen lettere utføres i stedet for å kjøpe eller dyrke individuelle virale proteiner for ELISA. Formålet med testingen og informasjonen som er oppnådd fra resultatene av en hvilken som helst rabieserologisk analyse, bør vurderes når man bestemmer hvilken som skal velges2.
IgM er den første som reagerer, og øker til klassebytte observeres rundt dag 28, da IgG blir det dominerende sirkulerende antistoffet3. Derfor vil IgM bare forventes i en begrenset periode etter eksponering for rabiesvirus eller vaksinasjon. Testing av både serum og cerebrospinalvæske (CSF) kan indikere om eksponeringen var gjennom vaksinasjon, der antistoffer bare ville bli sett i sera, eller fra en virusinfeksjon, som potensielt ville vise antistoffer i CSF1.
Det er fastslått at rabiesantistoffer vedvarer i flere år etter preeksponeringsprofylakse (PrEP)4. IFA-testen kan være et nyttig verktøy for å demonstrere dette på forskjellige tidspunkter etter vaksinasjon eller eksponering.
Protocol
Representative Results
Discussion
IFA-testen utnytter et antigen-antistoffkompleks, noe som gjør det mulig for et merkingssted å visualisere rabiesspesifikke antistoffer. Neuroblastom- eller BHK-celler blir sådd på flerbrønns PTFE-belagte mikroskopglass og inokulert med rabiesviruslaboratoriestamme CVS-11. Når monolaget er konfluent og cellene når ønsket smittsomhet på ca. 50%, lagres lysbildene til de er klare til bruk6.
Pasientserum eller CSF påføres det infiserte cellemonolaget og inkubere…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vi er takknemlige for New York State Department of Health Wadsworth Center for å støtte dette prosjektet.
Materials
| 25x55mm glass cover slips | Any | ||
| Acetone | Any | ||
| Anti-Human IgG Labeled Conjugate | Sigma-Aldrich | F9512 | |
| Anti-Human IgM Labeled Conjugate | SeraCare | 5230-0286 | |
| Aspirating pipette tip | Any | ||
| BHK-21 Cells | ATCC | CCL-10 | |
| BION IFA Diluent | MBL BION | DIL-9993 | |
| Cell Culture water | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Coplin Jars | Any | ||
| Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| Fluorescent microscope with FITC filter | Any | ||
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
| Gullsorb IgM inactivation reagent | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG Inactivation Reagent |
| L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| Mouse Neuroblastoma Cells | ATCC | CCL-131 | |
| Multi-well Teflon coating glass slides | Any | ||
| PBS | Any | pH 7.6 | |
| Penicillin | Sigma | P-3032 | EGM |
| Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate | Millipore Sigma | 5100, 5500 or 6500 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
| Sodium Chloride crystals | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
| Sterile dropper | Any | ||
| Streptomycin sulfate salt | Sigma | S9137 | EGM |
| Trizma pre-set crystals pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
| Tryptose Phosphate Broth | BD | 260300 | EGM |
| Vitamin mix | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
Riferimenti
- Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1. World Health Organization. , 232-245 (2018).
- Moore, S. M. Challenges of rabies serology: defining context of interpretation. Viruses. 13 (8), 1516 (2021).
- Zajac, M. D. Development and evaluation of a rabies enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) targeting IgM and IgG in human sera. Viruses. , 40-49 (2019).
- Mills, D. J., Lau, C. L., Mills, C., Furuya-Kanamori, L. Long-term persistence of antibodies and boostability after rabies intradermal pre-exposure prophylaxis. Journal of Travel Medicine. 29 (2), (2022).
- Ramakrishnan, M. A. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World Journal of Virology. 5 (2), 85-86 (2016).
- Rudd, R. J., Appler, K. A., Wong, S. J. Presence of cross-reactions with other viral encephalitides in the indirect fluorescent-antibody test for diagnosis of rabies. Journal of Clinical Microbiology. 51 (12), 4079-4082 (2013).
- Fooks, A. R., Jackson, A. C. . Rabies: scientific basis of the disease and its management. , (2020).
- Paldanius, M., Bloigu, A., Leinonen, M., Saikku, P. Measurement of Chlamydia pneumoniae-specific immunoglobulin A (IgA) antibodies by the microimmunofluorescence (MIF) method: comparison of seven fluorescein-labeled anti-human IgA conjugates in an in-house MIF test using one commercial MIF and one enzyme immunoassay kit. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 10 (1), 8-12 (2003).
- Rodriguez, M. C., Fontana, D., Garay, E., Prieto, C. Detection and quantification of anti-rabies glycoprotein antibodies: current state and perspectives. Applied Microbiology and Biotechnology. 105 (18), 6547-6557 (2021).
- Katz, I. S. S., Guedes, F., Fernandes, E. R., Dos Ramos Silva, S. Immunological aspects of rabies: a literature review. Archives of Virology. 162 (1), 3251-3268 (2017).
- Moore, S. M., Hanlon, C. A. Rabies-specific antibodies: measuring surrogates of protection against a fatal disease. PLoS Neglected Tropical Diseases. 4 (3), 595 (2010).
