Detectie van rabiës IgG- en IgM-antilichamen met behulp van de Rabiës Indirect Fluorescerende Antilichaamtest
Summary
Het doel van dit manuscript is om het gebruik van de rabiës indirecte fluorescerende antilichaamtest voor de detectie van rabiës-specifieke IgG- en IgM-antilichamen te onderzoeken.
Abstract
De rabiës indirecte fluorescerende antilichaam (IFA) test is ontwikkeld om verschillende rabiës-specifieke antilichaamisotypes in sera of cerebrale spinale vloeistof te detecteren. Deze test levert snelle resultaten op en kan worden gebruikt om antilichamen tegen hondsdolheid in verschillende scenario’s te detecteren. De rabiës IFA-test is vooral nuttig voor de snelle en vroege detectie van antilichamen om de immuunrespons te evalueren bij een patiënt die hondsdolheid heeft ontwikkeld. Hoewel andere methoden voor antemortem rabiësdiagnose voorrang hebben, kan deze test worden gebruikt om recente blootstelling aan het rabiësvirus aan te tonen door middel van antilichaamdetectie. De IFA-test geeft geen virusneutraliserende antilichaamtiter (VNA), maar de pre-exposure profylaxerespons (PrEP) kan worden geëvalueerd aan de hand van positieve of negatieve aanwezigheid van antilichamen. Deze test kan in verschillende situaties worden gebruikt en kan resultaten opleveren voor een aantal verschillende doelen. In deze studie gebruikten we verschillende gepaarde serummonsters van personen die PrEP kregen en toonden we hun aanwezigheid van rabiësantilichamen in de loop van de tijd aan met behulp van de IFA-test.
Introduction
De rabiës indirecte fluorescerende antilichaam (IFA) test wordt gebruikt om verschillende rabiës-specifieke antilichaamisotypes in sera of cerebrale spinale vloeistof te detecteren. Het is een van een arsenaal aan tests die beschikbaar zijn voor het monitoren van een antemortem rabiëspatiënt. Het is vooral nuttig voor de vroege detectie van antilichamen om de immuunrespons van een patiënt op rabiësinfectie te evalueren. Bij gebruik in combinatie met andere tests, casusgeschiedenis en de vaccinatiestatus van de patiënt, kan de IFA-test helpen bij het bepalen van de blootstelling aan het rabiësvirus of een vaccin1. Aangezien de IFA-test IgM en/of IgG meet, kunnen de waarden van het specifieke antilichaam een geschat tijdsbestek aangeven vanaf blootstelling aan het antigeen1. Deze test kan nuttig zijn in de vermelde toepassingen of andere die nog niet zijn onderzocht.
Er zijn verschillende serologische tests voor hondsdolheid beschikbaar. De snelle fluorescerende focusremmingstest (RFFIT), fluorescerende antilichaamvirusneutralisatietest (FAVN) of modificaties hiervan zijn de primaire methoden voor het meten van rabiësvirusneutraliserende antilichamen (RVNA’s)1. Deze tests maken echter geen onderscheid tussen IgM- en IgG-antilichamen. Wanneer het differentiëren van het antilichaamisotype belangrijk is bij het bewaken van de rabiës-immuunrespons, worden de rabiës-IFA- en de rabiës-enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA) -tests gebruikt, maar ze meten geen RVNA’s. Hoewel de IFA- en ELISA-tests kunnen worden gebruikt om de aanwezigheid van rabiësspecifieke antilichamen in een monster te bepalen, zijn er enkele verschillen in de manier waarop ze worden uitgevoerd. De IFA-test maakt gebruik van een in cellen gekweekt levend virus als antigeensubstraat, terwijl een typische ELISA voor de detectie van hondsdolheid een of meer van de virale eiwitten gebruikt. In een laboratoriumomgeving waar het rabiësvirus kan worden gekweekt, kan de IFA-test gemakkelijker worden uitgevoerd in plaats van individuele virale eiwitten voor de ELISA te kopen of te kweken. Bij het bepalen van de keuze van de serologische rabiëstest moet rekening worden gehouden met het doel van de tests en de informatie die is verkregen uit de resultaten van een serologische rabiëstest2.
IgM is de eerste die reageert, toenemend totdat rond dag 28 klassewisseling wordt waargenomen, waarna IgG het overheersende circulerende antilichaam3 wordt. Daarom zou IgM slechts gedurende een beperkte tijd worden verwacht na blootstelling aan het rabiësvirus of vaccinatie. Het testen van zowel serum als hersenvocht (CSF) kan aangeven of de blootstelling plaatsvond door vaccinatie, waarbij antilichamen alleen in sera zouden worden gezien, of door een virale infectie, die mogelijk antilichamen in CSF1 zou vertonen.
Er is vastgesteld dat rabiësantilichamen enkele jaren aanhouden na pre-expositieprofylaxe (PrEP)4. De IFA-test kan een handig hulpmiddel zijn om dit op verschillende tijdstippen na vaccinatie of blootstelling aan te tonen.
Protocol
Representative Results
Discussion
De IFA-test maakt gebruik van een antigeen-antilichaamcomplex, waardoor een etiketteringsplaats rabiës-specifieke antilichamen kan visualiseren. Neuroblastoom- of BHK-cellen worden gezaaid op multi-well PTFE-gecoate microscoopglaasjes en geïnoculeerd met rabiësviruslaboratoriumstam CVS-11. Zodra de monolaag samenvloeit en de cellen de gewenste besmettelijkheid van ongeveer 50% bereiken, worden de objectglaasjes bewaard tot ze klaar zijn voor gebruik6.
Patiëntenserum…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We zijn het Wadsworth Center van het New York State Department of Health dankbaar voor het ondersteunen van dit project.
Materials
| 25x55mm glass cover slips | Any | ||
| Acetone | Any | ||
| Anti-Human IgG Labeled Conjugate | Sigma-Aldrich | F9512 | |
| Anti-Human IgM Labeled Conjugate | SeraCare | 5230-0286 | |
| Aspirating pipette tip | Any | ||
| BHK-21 Cells | ATCC | CCL-10 | |
| BION IFA Diluent | MBL BION | DIL-9993 | |
| Cell Culture water | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Coplin Jars | Any | ||
| Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| Fluorescent microscope with FITC filter | Any | ||
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
| Gullsorb IgM inactivation reagent | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG Inactivation Reagent |
| L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| Mouse Neuroblastoma Cells | ATCC | CCL-131 | |
| Multi-well Teflon coating glass slides | Any | ||
| PBS | Any | pH 7.6 | |
| Penicillin | Sigma | P-3032 | EGM |
| Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate | Millipore Sigma | 5100, 5500 or 6500 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
| Sodium Chloride crystals | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
| Sterile dropper | Any | ||
| Streptomycin sulfate salt | Sigma | S9137 | EGM |
| Trizma pre-set crystals pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
| Tryptose Phosphate Broth | BD | 260300 | EGM |
| Vitamin mix | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
Riferimenti
- Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1. World Health Organization. , 232-245 (2018).
- Moore, S. M. Challenges of rabies serology: defining context of interpretation. Viruses. 13 (8), 1516 (2021).
- Zajac, M. D. Development and evaluation of a rabies enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) targeting IgM and IgG in human sera. Viruses. , 40-49 (2019).
- Mills, D. J., Lau, C. L., Mills, C., Furuya-Kanamori, L. Long-term persistence of antibodies and boostability after rabies intradermal pre-exposure prophylaxis. Journal of Travel Medicine. 29 (2), (2022).
- Ramakrishnan, M. A. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World Journal of Virology. 5 (2), 85-86 (2016).
- Rudd, R. J., Appler, K. A., Wong, S. J. Presence of cross-reactions with other viral encephalitides in the indirect fluorescent-antibody test for diagnosis of rabies. Journal of Clinical Microbiology. 51 (12), 4079-4082 (2013).
- Fooks, A. R., Jackson, A. C. . Rabies: scientific basis of the disease and its management. , (2020).
- Paldanius, M., Bloigu, A., Leinonen, M., Saikku, P. Measurement of Chlamydia pneumoniae-specific immunoglobulin A (IgA) antibodies by the microimmunofluorescence (MIF) method: comparison of seven fluorescein-labeled anti-human IgA conjugates in an in-house MIF test using one commercial MIF and one enzyme immunoassay kit. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 10 (1), 8-12 (2003).
- Rodriguez, M. C., Fontana, D., Garay, E., Prieto, C. Detection and quantification of anti-rabies glycoprotein antibodies: current state and perspectives. Applied Microbiology and Biotechnology. 105 (18), 6547-6557 (2021).
- Katz, I. S. S., Guedes, F., Fernandes, E. R., Dos Ramos Silva, S. Immunological aspects of rabies: a literature review. Archives of Virology. 162 (1), 3251-3268 (2017).
- Moore, S. M., Hanlon, C. A. Rabies-specific antibodies: measuring surrogates of protection against a fatal disease. PLoS Neglected Tropical Diseases. 4 (3), 595 (2010).
