रेबीज का उपयोग करके रेबीज आईजीजी और आईजीएम एंटीबॉडी का पता लगाना अप्रत्यक्ष फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी परीक्षण
Summary
इस पांडुलिपि का उद्देश्य रेबीज-विशिष्ट आईजीजी और आईजीएम एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए रेबीज अप्रत्यक्ष फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी परीक्षण के उपयोग की जांच करना है।
Abstract
रेबीज अप्रत्यक्ष फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी (आईएफए) परीक्षण सीरा या सेरेब्रल स्पाइनल तरल पदार्थ में विभिन्न रेबीज-विशिष्ट एंटीबॉडी आइसोटाइप का पता लगाने के लिए विकसित किया गया था। यह परीक्षण तेजी से परिणाम प्रदान करता है और इसका उपयोग कई अलग-अलग परिदृश्यों में रेबीज एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए किया जा सकता है। रेबीज आईएफए परीक्षण विशेष रूप से रेबीज विकसित करने वाले रोगी में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करने के लिए एंटीबॉडी के त्वरित और शुरुआती पता लगाने के लिए उपयोगी है। यद्यपि एंटीमॉर्टम रेबीज निदान के लिए अन्य तरीकों को प्राथमिकता दी जाती है, इस परीक्षण का उपयोग एंटीबॉडी का पता लगाने के माध्यम से हाल ही में रेबीज वायरस के जोखिम को प्रदर्शित करने के लिए किया जा सकता है। IFA परीक्षण वायरस-न्यूट्रलाइजिंग एंटीबॉडी (VNA) टिटर प्रदान नहीं करता है, लेकिन प्री-एक्सपोज़र प्रोफिलैक्सिस (PrEP) प्रतिक्रिया का मूल्यांकन सकारात्मक या नकारात्मक एंटीबॉडी उपस्थिति के माध्यम से किया जा सकता है। इस परीक्षण का उपयोग विभिन्न स्थितियों में किया जा सकता है और कई अलग-अलग लक्ष्यों के लिए परिणाम प्रदान कर सकता है। इस अध्ययन में, हमने उन व्यक्तियों से कई युग्मित सीरम नमूनों का उपयोग किया, जिन्होंने पीईईपी प्राप्त किया और आईएफए परीक्षण का उपयोग करके समय के साथ अपनी रेबीज एंटीबॉडी उपस्थिति का प्रदर्शन किया।
Introduction
रेबीज अप्रत्यक्ष फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी (आईएफए) परीक्षण का उपयोग सीरा या सेरेब्रल स्पाइनल फ्लूइड में विभिन्न रेबीज-विशिष्ट एंटीबॉडी आइसोटाइप का पता लगाने के लिए किया जाता है। यह एक एंटीमॉर्टम रेबीज रोगी की निगरानी के लिए उपलब्ध परीक्षणों के एक शस्त्रागार में से एक है। यह रेबीज संक्रमण के लिए रोगी की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करने के लिए एंटीबॉडी के शुरुआती पता लगाने के लिए विशेष रूप से उपयोगी है। जब अन्य परीक्षणों, केस इतिहास और रोगी के टीकाकरण की स्थिति के संयोजन में उपयोग किया जाता है, तो IFA परीक्षण रेबीज वायरस या वैक्सीन1 के संपर्क को निर्धारित करने में सहायता कर सकता है। जैसा कि IFA परीक्षण IgM और/या IgG को मापता है, विशिष्ट एंटीबॉडी के मान एंटीजन1 के संपर्क में आने से अनुमानित समय सीमा का संकेत दे सकते हैं। यह परीक्षण सूचीबद्ध अनुप्रयोगों या अभी तक खोजे नहीं गए अन्य में उपयोगी हो सकता है।
कई रेबीज सीरोलॉजिकल परख उपलब्ध हैं। रैपिड फ्लोरोसेंट फोकस निषेध परीक्षण (आरएफएफआईटी), फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी वायरस न्यूट्रलाइजेशन (एफएवीएन) परीक्षण, या इनमें से संशोधन रेबीज वायरस न्यूट्रलाइजिंग एंटीबॉडी (आरवीएनए)1को मापने के प्राथमिक तरीके हैं। हालांकि, ये परीक्षण आईजीएम और आईजीजी एंटीबॉडी में अंतर नहीं करते हैं। जब रेबीज प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की निगरानी में एंटीबॉडी आइसोटाइप को अलग करना महत्वपूर्ण होता है, तो रेबीज आईएफए और रेबीज एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) परीक्षणों का उपयोग किया जाता है, लेकिन वे आरवीएनए को मापते नहीं हैं। यद्यपि IFA और ELISA परीक्षणों का उपयोग एक नमूने में रेबीज-विशिष्ट एंटीबॉडी की उपस्थिति को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है, लेकिन उन्हें निष्पादित करने के तरीके में कुछ अंतर हैं। आईएफए परीक्षण अपने एंटीजन सब्सट्रेट के रूप में एक सेल-सुसंस्कृत जीवित वायरस का उपयोग करता है, जबकि रेबीज का पता लगाने के लिए एक विशिष्ट एलिसा वायरल प्रोटीन में से एक या अधिक का उपयोग करता है। एक प्रयोगशाला सेटिंग में जहां रेबीज वायरस को सुसंस्कृत किया जा सकता है, एलिसा के लिए व्यक्तिगत वायरल प्रोटीन खरीदने या खेती करने के बजाय आईएफए परीक्षण अधिक आसानी से किया जा सकता है। परीक्षण का उद्देश्य और किसी भी रेबीज सीरोलॉजिकल परख के परिणामों से प्राप्त जानकारी पर विचार किया जाना चाहिए जब यह निर्धारित किया जाए किकौन सा चुनना है 2.
आईजीएम प्रतिक्रिया देने वाला पहला है, जब तक कि कक्षा स्विचिंग 28 दिन के आसपास नहीं देखी जाती है, जिस बिंदु पर आईजीजी प्रमुख परिसंचारी एंटीबॉडी3 बन जाता है। इसलिए, आईजीएम केवल रेबीज वायरस या टीकाकरण के संपर्क में आने के बाद सीमित समय के लिए अपेक्षित होगा। सीरम और मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) दोनों का परीक्षण यह संकेत दे सकता है कि क्या जोखिम टीकाकरण के माध्यम से था, जिसमें एंटीबॉडी केवल सीरा में या वायरल संक्रमण से देखा जाएगा, जो संभावित रूप से सीएसएफ1 में एंटीबॉडी दिखाएगा।
यह स्थापित किया गया है कि रेबीज एंटीबॉडी प्री-एक्सपोजर प्रोफिलैक्सिस (पीईईपी)4के बाद कई वर्षों तक बनी रहती है। आईएफए परीक्षण टीकाकरण या जोखिम के बाद अलग-अलग समय बिंदुओं पर इसे प्रदर्शित करने के लिए एक उपयोगी उपकरण हो सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
आईएफए परीक्षण एक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का लाभ उठाता है, जिससे रेबीज-विशिष्ट एंटीबॉडी की कल्पना करने के लिए एक लेबलिंग साइट की अनुमति मिलती है। न्यूरोब्लास्टोमा या बीएचके कोशिकाओं को बहु-अच्छी …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम इस परियोजना का समर्थन करने के लिए न्यूयॉर्क स्टेट डिपार्टमेंट ऑफ हेल्थ वड्सवर्थ सेंटर के आभारी हैं।
Materials
| 25x55mm glass cover slips | Any | ||
| Acetone | Any | ||
| Anti-Human IgG Labeled Conjugate | Sigma-Aldrich | F9512 | |
| Anti-Human IgM Labeled Conjugate | SeraCare | 5230-0286 | |
| Aspirating pipette tip | Any | ||
| BHK-21 Cells | ATCC | CCL-10 | |
| BION IFA Diluent | MBL BION | DIL-9993 | |
| Cell Culture water | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Coplin Jars | Any | ||
| Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| Fluorescent microscope with FITC filter | Any | ||
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
| Gullsorb IgM inactivation reagent | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG Inactivation Reagent |
| L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| Mouse Neuroblastoma Cells | ATCC | CCL-131 | |
| Multi-well Teflon coating glass slides | Any | ||
| PBS | Any | pH 7.6 | |
| Penicillin | Sigma | P-3032 | EGM |
| Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate | Millipore Sigma | 5100, 5500 or 6500 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
| Sodium Chloride crystals | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
| Sterile dropper | Any | ||
| Streptomycin sulfate salt | Sigma | S9137 | EGM |
| Trizma pre-set crystals pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
| Tryptose Phosphate Broth | BD | 260300 | EGM |
| Vitamin mix | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
Riferimenti
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