Lo scopo di questo manoscritto è quello di esaminare l'uso del test degli anticorpi fluorescenti indiretti per la rabbia per la rilevazione di anticorpi IgG e IgM specifici per la rabbia.
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Articolo metodologico
Rilevamento degli anticorpi IgG e IgM della rabbia utilizzando il test degli anticorpi fluorescenti indiretti della rabbia
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il test degli anticorpi fluorescenti indiretti (IFA) per la rabbia è stato sviluppato per rilevare vari isotipi di anticorpi anti-rabbia specifici nei sieri o nel liquido cerebrospinale. Questo test fornisce risultati rapidi e può essere utilizzato per rilevare gli anticorpi antirabbici in diversi scenari. Il test antirabbico IFA è particolarmente utile per la diagnosi rapida e precoce degli anticorpi per valutare la risposta immunitaria in un paziente che ha sviluppato la rabbia. Sebbene altri metodi per la diagnosi di rabbia ante mortem abbiano la precedenza, questo test può essere utilizzato per dimostrare la recente esposizione al virus della rabbia attraverso il rilevamento degli anticorpi. Il test IFA non fornisce un titolo anticorpale neutralizzante il virus (VNA), ma la risposta della profilassi pre-esposizione (PrEP) può essere valutata attraverso la presenza di anticorpi positivi o negativi. Questo test può essere utilizzato in varie situazioni e può fornire risultati per una serie di obiettivi diversi. In questo studio, abbiamo utilizzato diversi campioni di siero accoppiati di individui che hanno ricevuto la PrEP e abbiamo dimostrato la loro presenza di anticorpi antirabbici nel tempo utilizzando il test IFA.
Introduzione
Il test degli anticorpi fluorescenti indiretti (IFA) della rabbia viene utilizzato per rilevare vari isotipi di anticorpi specifici per la rabbia nei sieri o nel liquido cerebrospinale. Fa parte di un arsenale di test disponibili per il monitoraggio di un paziente con rabbia ante mortem. È particolarmente utile per la diagnosi precoce degli anticorpi per valutare la risposta immunitaria di un paziente all'infezione da rabbia. Se utilizzato in combinazione con altri test, l'anamnesi e lo stato di vaccinazione del paziente, il test IFA può aiutare a determinare l'esposizione al virus della rabbia o a un vaccino1. Poiché il test IFA misura le IgM ....
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Protocollo
Il seguente protocollo è stato approvato per l'uso etico di campioni umani dal Wadsworth Center del Dipartimento della Salute dello Stato di New York per lo sviluppo di test, numero di approvazione del protocollo #03-019.
1. Sicurezza
- Indossare dispositivi di protezione individuale (DPI), una protezione minima per gli occhi (occhiali o visiera), una mascherina chirurgica e guanti non in lattice.
- Assicurarsi che il personale sia vaccinato per la rabbia e che sia stato dimostrato un titolo di ≥0,5 UI/mL negli ultimi 6 mesi.
2. Preparazione dei vetrini antigenici
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Risultati
Tutti i campioni di siero sono stati raccolti dai pazienti all'incirca nello stesso periodo di tempo dopo la PrEP. I campioni sono stati testati da cinque diversi pazienti nei seguenti momenti: 2 settimane dopo l'inoculazione finale del vaccino antirabbico, 6 mesi dopo la serie di vaccini antirabbici e 18 mesi dopo la serie di vaccini antirabbici. Ogni campione di siero è stato diluito in serie e classificato sia per la presenza di IgM che di IgG, come descritto nelle fasi 5.2 e 5.3 del protocollo. Il valore anticorpale .......
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Discussione
Il test IFA sfrutta un complesso antigene-anticorpo, consentendo a un sito di marcatura di visualizzare gli anticorpi specifici per la rabbia. Le cellule di neuroblastoma o BHK vengono seminate su vetrini da microscopio rivestiti in PTFE a più pozzetti e inoculate con il ceppo di laboratorio CVS-11 del virus della rabbia. Una volta che il monostrato è confluente e le cellule raggiungono l'infettività desiderata di circa il 50%, i vetrini vengono conservati fino al momento dell'uso6.
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Siamo grati al Wadsworth Center del Dipartimento della Salute dello Stato di New York per aver sostenuto questo progetto.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 25x55mm vetrini di copertura | Qualsiasi | ||
| acetone | Qualsiasi | ||
| Coniugato etichettato con IgG anti-umano | Sigma-Aldrich | F9512 | |
| Coniugato marcato con IgM anti-umane | SeraCare | 5230-0286 | |
| Punta per pipetta aspirante | Qualsiasi | ||
| CCL-10 | |||
| BION IFA Diluente | MBL BION | DIL-9993 | |
| Acqua per colture cellulari | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Coplin Jars | Qualsiasi | ||
| siero fetale bovino | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| Microscopio fluorescente con filtro FITC | Qualsiasi | ||
| Glicerolo | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
| Gullsorb Reagente di inattivazione IgM | Fisher Scientific | 23-043-158 | Reagente di inattivazione IgG |
| L-Glutammina | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| Minimo essenziale Media Eagle – con Earle' sali di s, L-glutammina e aminoacidi non essenziali, senza bicarbonato di sodio | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| Cellule di neuroblastoma di topo | ATCC | CCL-131 | |
| Vetrini con rivestimento in PTFE a più pozzetti Qualsiasi | |||
| PBS | Qualsiasi | pH 7,6 | |
| Penicillina | Sigma | P-3032 | EGM |
| Rabbia Coniugato con anticorpi fluorescenti diretti | Millipore Sigma | 5100, 5500, 6500, RU5100 o RU5500 | |
| Bicarbonato di sodio | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
| Cristalli di cloruro di sodio | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
| Contagocce sterile | Qualsiasi | ||
| Sale solfato di streptomicina | Sigma | S9137 | EGM |
| Cristalli preimpostati Trizma pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
| Triptosio Fosfato Brodo | BD | 260300 | EGM |
| Miscela vitaminica | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
Riferimenti
- Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1. World Health Organization. , Geneva. 232-245 (2018).
- Moore, S. M. Challenges of rabies serology: defining context of interpretation. Viruses. 13 (8), 1516(2021).
- Zajac, M. D.
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Ristampe e permessi
