Punción modificada de la vena de la cola y la vena del pene para el muestreo de sangre en el modelo de rata
Summary
Aquí, presentamos un protocolo para ofrecer alternativas de recolección de sangre rápidas, fáciles y confiables para el modelo de rata. Describimos tres métodos diferentes de muestreo de sangre según el contexto: punción de la vena de la cola bajo anestesia o en un animal consciente, y punción de la vena dorsal del pene bajo anestesia.
Abstract
Las muestras de sangre son necesarias en la mayoría de los diseños de animales experimentales para evaluar diversos parámetros hematológicos. Este trabajo presenta dos procedimientos para la recolección de sangre en ratas: la punción de la vena lateral de la cola y la punción de la vena dorsal del pene, que ofrecen ventajas significativas sobre otras técnicas descritas anteriormente. Este estudio muestra que estos dos procedimientos permiten un muestreo rápido (menos de 10 min) y producen volúmenes sanguíneos suficientes para la mayoría de los ensayos (202 μL ± 67,7 μL). La punción de la vena dorsal del pene debe realizarse bajo anestesia, mientras que la punción de la vena lateral de la cola se puede realizar en un animal consciente y restringido.
La alternancia de estas dos técnicas, por lo tanto, permite la extracción de sangre en cualquier situación. Si bien siempre se recomienda que un operador reciba asistencia durante un procedimiento para garantizar el bienestar animal, estas técnicas requieren un solo operador, a diferencia de la mayoría de los métodos de muestreo de sangre que requieren dos. Además, mientras que estos métodos descritos anteriormente (por ejemplo, palo yugular, extracción de sangre de la vena subclavia) requieren un entrenamiento previo extenso para evitar el daño o la muerte del animal, la punción de la vena de la cola y la vena dorsal del pene rara vez son fatales. Por todas estas razones, y de acuerdo con el contexto (por ejemplo, para estudios que incluyen ratas macho, durante el período perioperatorio o postoperatorio inmediato, para animales con venas delgadas de la cola), ambas técnicas se pueden usar alternativamente para permitir extracciones repetidas de sangre.
Introduction
El muestreo de sangre es necesario para la mayoría de los estudios en animales, tanto in vivo como in vitro. En ratas, como la frecuencia y la cantidad de muestreo de sangre pueden ser significativas, es útil tener diferentes alternativas para la recolección. Se han descrito varios métodos en estudios previos.
Las técnicas más utilizadas son la punción de la vena de la cola y la extracción de sangre de la vena safena. El muestreo de venas de la cola es adecuado para todas las cepas de ratas. Con el entrenamiento adecuado, el procedimiento es fácil de realizar y causa una angustia mínima al animal1. Del mismo modo, la extracción de sangre de la vena safena, siempre que se haga correctamente, también es un método de recolección rápido y simple. Ninguno de los métodos requiere anestesia, y ambos permiten extraer repetidamente pequeñas cantidades de sangre. Sin embargo, la punción de la vena safena generalmente produce un volumen sanguíneo más bajo1 y requiere la presencia de dos personas para dejar una extremidad posterior expuesta para la punción2.
Si es necesario recolectar grandes cantidades de sangre de un solo animal, se puede usar una punción cardíaca o punción de la vena cava (se pueden extraer hasta 10 ml de sangre de una rata de 150 g con punción cardíaca2). Estas técnicas requieren anestesia y son procedimientos terminales. El animal debe ser sacrificado después de cualquiera de estas dos técnicas2. El pinchazo yugular es una alternativa que se puede utilizar si es necesario recolectar grandes cantidades de sangre en un estudio que aún no ha alcanzado su punto final. Sin embargo, esta técnica también requiere habilidades técnicas significativas para evitar daños al animal; por lo tanto, su uso debe ser limitado3.
Otras técnicas, como la extracción de sangre de la vena subclavia, no necesitan el uso de anestésicos antes de la recolección de sangre y permiten el muestreo repetido de pequeños volúmenes de sangre. Sin embargo, se requiere un manejo restringido y una incisión de aguja adecuada para esta técnica. Una operación inadecuada puede provocar dolor en los animales o incluso la mortalidad, y el entrenamiento para este método puede ser exigente4.
Otros procedimientos anecdóticos incluyen la punción orbitaria y la punción venosa sublingual, las cuales requieren anestesia, y no son recomendadas ni ampliamente utilizadas. Aunque estudios previos han demostrado una recolección de sangre más rápida por punción orbitaria que por punción de la vena de la cola, se encontró que la punción orbitaria bajo anestesia dietil-éter fue menos tolerada que este último método (basado en las puntuaciones de excitación de los animales y la producción de orina)5. Además, este método está muy influenciado por la habilidad de la persona que realiza el procedimiento y es realizado principalmente por veterinarios experimentados. En comparación, la punción venosa sublingual es menos angustiante y se recomienda para el muestreo repetidode sangre 6. Sin embargo, esta técnica presenta efectos adversos severos como la reducción de la ingesta de alimentos y agua, que puede llevar a la muerte del animal7.
Este estudio describe dos métodos utilizados en nuestro laboratorio para el muestreo repetido de sangre. La punción de la vena de la cola se puede realizar en un animal consciente, y el daño tisular y los efectos adversos son mínimos. La modificación de esta técnica en este estudio incluye la estabilización de la cola con el dedo índice y medio, lo que permite que un solo operador realice la recolección de sangre. La punción de la vena dorsal del pene ya se ha descrito para inyecciones intravenosas simples. Esta técnica se realiza bajo anestesia y permite una fuente de sangre confiable en caso de dificultades con otros métodos (por ejemplo, durante el período postoperatorio inmediato, con un animal pequeño, cuando se realiza una extracción de sangre perioperatoria bajo anestesia). Similar al muestreo de venas de la cola, la lesión en el sitio de punción tendrá un efecto general menor en el animal en comparación con las técnicas mencionadas anteriormente8. El objetivo de este documento de métodos es ofrecer a los investigadores sin experiencia alternativas simples y confiables de muestreo de sangre de acuerdo con el contexto (por ejemplo, para procedimientos realizados bajo anestesia, para estudios que incluyen ratas macho, para animales con venas delgadas de la cola).
Protocol
Representative Results
Discussion
La punción de la vena de la cola es un método eficiente para obtener sangre de una rata consciente. Sin embargo, cuando un animal está bajo anestesia, el efecto del isoflurano puede provocar espasmos vasculares y hacer que la punción de la vena de la cola sea inadecuada11. Como se muestra en este estudio, una alternativa en esta situación es recolectar sangre de la vena del pene, que es más exitosa y produce un volumen significativamente mayor de sangre en menos tiempo. Es importante recorda…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue financiado por Shriners Children’s Boston (B. E. U., K.U., C.L.C.). L.C. está financiado por “La Bourse des Gueules Cassées”, “La Bourse Année Recherche” y “La Bourse de l’Amicale des Anciens Internes des Hôpitaux de Paris”. Y.B. está financiado por “La Bourse des Gueules Cassées”. Y.B. e I.F.v.R. son financiados por los Hospitales Shriners para Niños (la identificación de las becas es #84308-BOS-22 #84302-BOS-21 respectivamente). Este material se basa parcialmente en el trabajo apoyado por la National Science Foundation bajo la subvención No. CEE 1941543. Se agradece el apoyo parcial de los Institutos Nacionales de Salud de los Estados Unidos (R01EB028782, R56AI171958 y R01DK114506). La figura 1 se creó con BioRender.com.
Materials
| 0.5 mL | 28 G ½ Insulin Syringes | BD | 329424 | for tail vein puncture |
| 0.5 mL | 30 G x 5/16 Insulin Syringes | BD | 320468 | for penile vein puncture |
| 250 L Microtainer blood collection tubes with K2EDTA | BD | 365974 | |
| Gauze Sponges | Curity | 6939 | |
| Isoflurane Auto-Flow Anesthesia Machine | E-Z Systems | EZ-190F | for penile vein puncture |
| Isoflurane, USP | Patterson Veterinary | 1403-704-06 | for penile vein puncture |
| Nosecone for Anesthesia | World Precision Instruments | EZ-112 | for penile vein puncture |
| Rodent Restraint Cone | Harvard Apparatus | ST2 52-95-86 | for tail vein puncture |
| Small Animal Heated Operating Table (Adjustable) | Peco Services Ltd | 69023 | |
| Webcol Alcohol prep pads | Simply Medical | 5110 |
Riferimenti
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