कैंसर के एक माउस मॉडल में शिरापरक घनास्त्रता परख
Summary
इस लेख का उद्देश्य शिरापरक बंधाव प्राप्त करने के लिए संवहनी क्लिप का उपयोग करके, माउस कैंसर मॉडल में शिरापरक घनास्त्रता का आकलन करने के लिए एक अनुकूलित विधि प्रस्तुत करना है। अनुकूलन घनास्त्रता से संबंधित मापों में परिवर्तनशीलता को कम करता है और मानव कैंसर से जुड़े शिरापरक घनास्त्रता के लिए प्रासंगिकता को बढ़ाता है।
Abstract
यह पद्धति पत्र शिरापरक घनास्त्रता के एक कृंतक मॉडल की सर्जिकल बारीकियों पर प्रकाश डालता है, विशेष रूप से कैंसर से जुड़े घनास्त्रता (कैट) के संदर्भ में। गहरी शिरापरक घनास्त्रता कैंसर से बचे लोगों में एक आम जटिलता है और संभावित रूप से घातक हो सकती है। वर्तमान murine शिरापरक घनास्त्रता मॉडल आम तौर पर एक सिवनी का उपयोग कर अवर वेना कावा (आईवीसी) के एक पूर्ण या आंशिक यांत्रिक रोड़ा शामिल. यह प्रक्रिया रक्त और एंडोथेलियल क्षति के कुल या आंशिक ठहराव को प्रेरित करती है, जिससे थ्रोम्बोजेनेसिस ट्रिगर होता है। वर्तमान मॉडलों में थक्के के वजन में उच्च परिवर्तनशीलता, महत्वपूर्ण मृत्यु दर और लंबे समय तक सीखने की अवस्था जैसी सीमाएं हैं। यह रिपोर्ट इनमें से कुछ सीमाओं को संबोधित करने के लिए संवहनी क्लिप का उपयोग करके सर्जिकल शोधन का परिचय देती है। एक syngeneic बृहदान्त्र कैंसर xenograft माउस मॉडल का उपयोग कर, हम infrarenal vena कावा ligate अनुकूलित संवहनी क्लिप रोजगार. ये क्लिप आईवीसी बंधाव के बाद 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी के समान अवशिष्ट होंठ स्थान की अनुमति देते हैं। सिवनी विधि के साथ चूहों नियंत्रण के रूप में सेवा. संवहनी क्लिप विधि एक सुसंगत प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य आंशिक संवहनी रोड़ा और सिवनी विधि की तुलना में कम परिवर्तनशीलता के साथ अधिक से अधिक थक्का वजन में हुई. बड़े थक्के वजन, अधिक से अधिक थक्का द्रव्यमान, और आईवीसी ल्यूमिनल सतह क्षेत्र के लिए थक्का 6-0 पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी की तुलना में संवहनी क्लिप के उच्च दबाव प्रोफ़ाइल के कारण अपेक्षित थे। दृष्टिकोण को ग्रे स्केल अल्ट्रासोनोग्राफी द्वारा मान्य किया गया था, जिसने सिवनी विधि की तुलना में संवहनी क्लिप के साथ इन्फ्रारेनल वेना कावा में लगातार अधिक थक्का द्रव्यमान का खुलासा किया। इन टिप्पणियों को इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला होने के साथ और अधिक प्रमाणित किया गया था। यह अध्ययन चूहों में एक शिरापरक घनास्त्रता मॉडल उत्पन्न करने के लिए एक बेहतर विधि प्रदान करता है, जिसे कैट की यंत्रवत समझ को गहरा करने और दवा की खोज जैसे अनुवाद संबंधी अनुसंधान में नियोजित किया जा सकता है।
Introduction
कैंसर से जुड़े शिरापरक थ्रोम्बोम्बोलिज़्म (VTE)
शिरापरक थ्रोम्बोम्बोलिज़्म (वीटीई) जोखिम सामान्य जनसंख्या 1,2,3 की तुलना में कैंसर से बचे लोगों में 4 से 7 गुना अधिक है। कैंसर के सात में से एक मरीज में यह स्थिति जानलेवा साबित होती है। वीटीई की घटना कैंसर के प्रकार और ट्यूमर के बोझ के आधार पर भिन्न होती है और अग्नाशय और गैस्ट्रिक कैंसरके रोगियों में सबसे अधिक होती है।
कैंसर रोगियों में कैंसर से जुड़े वीटीई का रोगनिरोधी महत्व है। यह कैंसर निदान के बाद पहले वर्ष में प्रतिकूल समग्र अस्तित्व के साथ जुड़ा हुआ है, यहां तक कि उम्र, दौड़ और अंतर्निहित कैंसर के चरण के समायोजन के बाद भी5. ये निष्कर्ष कैंसर से जुड़े वीटीई की जांच के महत्व और पशु मॉडल का उपयोग करके इसके तंत्र की जांच करने की आवश्यकता पर प्रकाश डालते हैं। इस क्षेत्र की अनुवाद संबंधी प्रासंगिकता को इस तथ्य से और जोर दिया जाता है कि कैंसर रोगियों में वीटीई थ्रोम्बोप्रोफिलैक्सिस और एंटीथ्रॉम्बोटिक थेरेपीके साथ रोकथाम और उपचार योग्य है।
कैंसर और शिरापरक घनास्त्रता के पशु मॉडल
कैंसर मॉडल को पारंपरिक रूप से ज़ेनोग्राफ्ट्स कहा जाता है, जो चूहों में कैंसर कोशिकाओं के इंजेक्शन को लागू करता है। इसकी उत्पत्ति जैसी साइट पर कैंसर कोशिकाओं के इंजेक्शन को ऑर्थोटोपिक मॉडल के रूप में संदर्भित किया जाता है, जबकि एक अलग साइट (फ्लैंक पर चमड़े के नीचे का विमान) को हेटरोटोपिक मॉडल के रूप में जाना जाता है। कैंसर कोशिकाओं की उत्पत्ति की प्रजाति उन्हें एचटी-29 सेल लाइन (मानव बृहदान्त्र कैंसर)7,8,9जैसे एक एलोजेनिक मॉडल, के रूप में निर्धारित करता है. इसके विपरीत, syngeneic मॉडल murine कैंसर सेल लाइनों, RenCa और MC-38 सेल लाइनों 3,10 सहित का उपयोग करें.
साहित्य ने कृन्तकों में धमनी, शिरापरक और केशिका घनास्त्रता मॉडल का वर्णन किया है। शिरापरक घनास्त्रता अवर वेना कावा (आईवीसी) में यांत्रिक चोट (गाइड तार) या पूर्ण आईवीसी बंधाव, रासायनिक (फेरिक क्लोराइड), या इलेक्ट्रोलाइटिक चोट से प्रेरित होती है। फेरिक क्लोराइड-प्रेरित घनास्त्रता या आईवीसी बंधाव पूर्ण रोड़ा मॉडल का प्रतिनिधित्व करता है। उत्तरार्द्ध रक्त के ठहराव में परिणाम और नसों में भड़काऊ घुसपैठ11,12,13. पूर्ण बंधाव मॉडल के परिणामस्वरूप 95% से 100% चूहों में घनास्त्रता गठन की उच्च दर होती है। आंशिक IVC बंधाव मॉडल पार्श्व iliolumbar शाखाओं की रुकावट शामिल हो सकता है, और शिरापरक वापसी IVC12 के बाहर का लक्ष्य अंक में सिवनी बंधाव लागू करने के द्वारा निरस्त कर दिया है. कभी-कभी, शिरापरक वापसी को आंशिक रूप से बाधित करने के लिए एक अंतरिक्ष धारक का उपयोग किया जाता है। हालांकि, थ्रोम्बस वजन वर्तमान आंशिक रोड़ा मॉडल में असंगत है, थक्का वजन और ऊंचाई12,14 में उच्च परिवर्तनशीलता में जिसके परिणामस्वरूप.
इन दोनों बड़े नस यांत्रिक मॉडल (आंशिक और पूर्ण) की सीमाएं हैं। सबसे पहले, आईवीसी बंधाव (स्टैसिस मॉडल) अक्सर हाइपोटेंशन में परिणाम देता है। रक्त कशेरुक नसों के माध्यम से अलग हो जाता है। हालांकि अनुभवी हाथों में, इस मॉडल के साथ मृत्यु दर 5% -30% से होती है, सीखने की अवस्था के दौरान उच्च दर की उम्मीद होती है। महत्वपूर्ण रूप से, पूर्ण रोड़ा मॉडल मनुष्यों में गहरी शिरा घनास्त्रता (डीवीटी) को पुन: उत्पन्न नहीं करता है, जहां एक थ्रोम्बस आमतौर पर गैर-ऑक्लुसिव होता है। पूर्ण रोड़ा रक्तस्रावी कारकों और फार्माकोडायनामिक मापदंडों को बदलने की संभावना है, स्थानीय साइट पर यौगिकों की जैव उपलब्धता को बदल देता है। इन सीमाओं के कारण, पूर्ण रोड़ा मॉडल चिकित्सीय प्रयोजनों और दवा की खोजों12 के लिए उपन्यास रासायनिक यौगिकों के परीक्षण के लिए इष्टतम नहीं हो सकता है.
यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि एंडोथेलियल क्षति के साथ कम प्रवाह के साथ शिरापरक घनास्त्रता का अधिक नैदानिक रूप से प्रासंगिक म्यूरिन मॉडल प्रदान करने के लिए, एक शिरापरक घनास्त्रता मॉडल पेश किया गया है, जहां एंडोथेलियल व्यवधान की अनुपस्थिति में रक्त प्रवाह के प्रतिबंध से डीवीटी शुरू होता है। मॉडल इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी15 स्कैनिंग द्वारा मान्य किया गया था. एक पसंदीदा नैदानिक रूप से प्रासंगिक घनास्त्रता मॉडल लगभग पूर्ण घनास्त्रता के साथ एक है जो दवा की खोजों को सक्षम बनाता है। वर्तमान आंशिक रोड़ा मॉडल में थक्का गठन असंगत है, थक्का वजन और ऊंचाई12,16 में उच्च परिवर्तनशीलता में जिसके परिणामस्वरूप. इसके अलावा, थक्का वजन पारंपरिक तरीकों के साथ परिवर्तनशील है, अध्ययन12 प्रति अधिक चूहों की आवश्यकता होती है.
पिछले कैंसर से जुड़े घनास्त्रता मॉडल बृहदान्त्र, अग्नाशय, और फेफड़ों के कैंसर पर ध्यान केंद्रित और सभी पूर्ण रोड़ा मॉडल17,18,19थे. यह पांडुलिपि कम परिवर्तनशीलता और माउस मृत्यु दर(चित्रा 1)के साथ थक्के प्रदान करने के लिए आंशिक रोड़ा घनास्त्रता मॉडल को संशोधित करती है। पूर्व अध्ययनों ने इम्यूनोकॉम्प्रोमाइज्ड एथिमिक चूहों की पृष्ठभूमि 19,20,21पर एलोजेनिक कैंसर सेल लाइनों का इस्तेमाल किया। यह पांडुलिपि C57Bl6/J चूहों में MC-38 सेल सिनजेनिक ज़ेनोग्राफ्ट का उपयोग करती है, जो प्रतिरक्षात्मक चूहों के उपयोग और थ्रोम्बोजेनेसिस के लिए प्रतिरक्षा घटकों की परीक्षा की अनुमति देती है।
Protocol
Representative Results
Discussion
एक syngeneic xenograft बृहदान्त्र कैंसर मॉडल में, हम नियंत्रण समूह की तुलना में प्रयोगात्मक समूह में उच्च thrombogenicity और जमावट मार्करों की अभिव्यक्ति का निरीक्षण करते हैं. महत्वपूर्ण बात यह है कि इन सभी मापदंडों में वि?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को AHA कार्डियो-ऑन्कोलॉजी SFRN CAT-HD CENTER GRANT 857078 (KR, VCC, XY, और SL) और R01HL166608 (KR और VCC) द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| Buprenorphine 0.3 mg/mL | PAR Pharmaceutical | NDC 42023-179-05 | |
| C57BL/6J mice | The Jackson Lab | IMSR_JAX:000664 | |
| Caliper | VWR International, Radnor, PA | 12777-830 | |
| CD31 | Abcam | Ab9498 | |
| Cell Counter | MOXIE | MXZ000 | |
| Clamp | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Clips ASSI.B2V Single Clamp, General Purpose, | Accurate Surgical & Scientific Instruments | PR 2 144.50 289.00 | |
| Dumont #5SF Forceps | Fine Science Tools | 11252-00 | |
| Fibrin | Millipore | MABS2155-100UG | |
| Fine Scissors – Large Loops | Fine Science Tools | 14040-10 | |
| Forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | |
| Hill Hemostat | Fine Science Tools | 13111-12 | |
| Isoflurane, USP | Covetrus | NDC 11695-6777-2 | |
| MC-38 cell | Sigma Aldrich | SCC172 | |
| Microscope | Nikon Eclipse Inverted Microscope | TE2000 | |
| Scissors | Fine Science Tools | 14079-10 | |
| Suture- Vicryl | AD-Surgical | #L-G330R24 | |
| Suture-Nylon 2-0 | Ethilon | 664H | |
| Suture-Prolene 5-0 | Ethicon | 8661G | |
| Suture-Prolene 6-0 | Ethicon | PDP127 | |
| VEV03100 | VisualSonics | FujiFilm | |
| Vitrogel Matrigel Matrix | The Well Bioscience | VHM01 |
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