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Articolo metodologico

"Avatar", un ciclo di lavoro ex vivo modificato che utilizza la tensione e l'attivazione in vivo

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DOI:

10.3791/65610

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18 agosto 2023

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In questo articolo

Sommario

Questo articolo descrive in dettaglio la metodologia per emulare la produzione di forza muscolare in vivo durante esperimenti di ciclo di lavoro ex vivo utilizzando un muscolo "avatar" di un roditore di laboratorio per valutare i contributi dei transitori di deformazione e l'attivazione alla risposta della forza muscolare.

Abstract

I comportamenti di movimento sono caratteristiche emergenti dei sistemi dinamici che derivano dalla produzione di forza muscolare e dall'output di lavoro. L'interazione tra sistemi neurali e meccanici avviene contemporaneamente a tutti i livelli dell'organizzazione biologica, dalla regolazione delle proprietà muscolari delle gambe durante la corsa alla dinamica degli arti che interagiscono con il suolo. Comprendere le condizioni in cui gli animali spostano le loro strategie di controllo neurale verso la meccanica muscolare intrinseca ("preflessi") nella gerarchia di controllo consentirebbe ai modelli muscolari di prevedere la forza muscolare in vivo e lavorare in modo più accurato. Per comprendere la meccanica muscolare in vivo, è necessario studiare ex vivo la forza muscolare e lavorare in condizioni di sforzo e carico dinamicamente variabili simili alla locomozione in vivo. Le traiettorie di deformazione in vivo mostrano tipicamente cambiamenti bruschi (cioè transitori di deformazione e velocità) che derivano da interazioni tra attivazione neurale, cinematica muscoloscheletrica e carichi applicati dall'ambiente. L'obiettivo principale della nostra tecnica "avatar" è quello di studiare come funzionano i muscoli durante bruschi cambiamenti nella velocità di deformazione e nel carico, quando il contributo delle proprietà meccaniche intrinseche alla produzione di forza muscolare può essere più alto. Nella tecnica "avatar", l'approccio tradizionale del ciclo di lavoro viene modificato utilizzando traiettorie di deformazione misurate in vivo e segnali elettromiografici (EMG) dagli animali durante i movimenti dinamici per guidare i muscoli ex vivo attraverso più cicli di allungamento-accorciamento. Questo approccio è simile alla tecnica del ciclo di lavoro, tranne per il fatto che le traiettorie di deformazione in vivo sono scalate in modo appropriato e imposte ai muscoli del topo ex vivo collegati a un servomotore. Questa tecnica consente di: (1) emulare in vivo i modelli di deformazione, attivazione, frequenza del passo e ciclo di lavoro; (2) variare questi modelli per abbinare le risposte della forza in vivo nel modo più accurato; e (3) variare le caratteristiche specifiche della deformazione e/o dell'attivazione in combinazioni controllate per testare ipotesi meccanicistiche.

Introduzione

Gli animali in movimento raggiungono impressionanti imprese atletiche di resistenza, velocità e agilità in ambienti complessi. La locomozione animale è particolarmente impressionante in contrasto con le macchine progettate dall'uomo: la stabilità e l'agilità dei robot, delle protesi e degli esoscheletri con le zampe attuali rimangono scarse rispetto agli animali. La locomozione a zampe in terreni naturali richiede un controllo preciso e regolazioni rapide per modificare la velocità e manovrare le caratteristiche ambientali che agiscono come perturbazioni impreviste1,2,3,....

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Protocollo

Tutti gli studi sugli animali sono stati approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali presso la Northern Arizona University. Per il presente studio sono stati utilizzati muscoli estensori digitali brevi (EDL) di topi di sesso maschile e femminile di tipo selvatico (ceppo B6C3Fe a/a-Ttnmdm/J), di età compresa tra 60 e 280 giorni. Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedere la Tabella dei materiali) e allevati in un allevamento presso la Northern Arizona University.

1. Selezione della traiettoria del ceppo in vivo e preparazione per l'uso durante esperim....

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Risultati

L'obiettivo degli esperimenti con "avatar" è replicare nel modo più fedele possibile la produzione di forza e il lavoro meccanico in vivo durante esperimenti ex vivo con cicli di lavoro. In questo studio è stato scelto di utilizzare l'EDL del topo come "avatar" del gastrocnemio mediale (MG) del ratto, poiché l'EDL del topo e il MG del ratto sono entrambi costituiti principalmente da fibre muscolari veloci20,21. Entrambi i muscoli sono i principa.......

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Discussione

Mentre gli organismi si muovono senza soluzione di continuità attraverso i paesaggi, i carichi e le tensioni sottostanti che i muscoli subiscono variano drasticamente 1,6,23. Durante sia la locomozione in vivo 1,24 che gli esperimenti "avatar", i muscoli vengono stimolati in modo submassimale in condizioni cicliche e non stazionarie. Le relazioni isometriche for.......

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Dichiarazioni

Tutti gli autori riconoscono che non vi è alcun conflitto di interessi.

Ringraziamenti

Ringraziamo il Dr. Nicolai Konow per aver fornito i dati utilizzati in questo studio. Finanziato da NSF IOS-2016049 e NSF DBI-2021832.

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Sutura di seta intrecciata non assorbibile 4-0 Mersilk 734H
Cloruro di calcio diidrato (CaCl2)Sigma-Aldrich1086436Krebs-Henseleit  soluzione
Destrosio Sigma-AldrichD9434Krebs-Henseleit soluzione
HEPESSigma-AldrichPHR1428Krebs-Henseleit  soluzione
Acido Idorclorico (HCl) Sigma-Aldrich1.37055Krebs-Henseleit  soluzione
LabView Data Collection Lab-View
Solfato di magnesio (MgSO4)Sigma-AldrichM7506Krebs-Henseleit  soluzione
Cloruro di potassio (KCl) Sigma-AldrichP3911Krebs-Henseleit  soluzione
Fosfato di potassio monobasico (KH2PO4)Sigma-Aldrich5.43841Krebs-Henseleit  soluzione
S88 StimolatoreErbaM643H05Disponibile per l'acquisto su Ebay
Serie 300B Sistema a levaAurora1200Ainclude bagno in tessuto a camicia d'acqua
Bicarbonato di sodio (NaHCO3)Sigma-AldrichS5761Krebs-Henseleit  soluzione
Cloruro di sodio (NaCl) Sigma-AldrichS9888Krebs-Henseleit  soluzione
Idrossido di sodio (NaOH)Sigma-AldrichS5881Krebs-Henseleit  soluzione
Wild Type MiceJackson LaboratoryB6C3Fe a/a Ttn mdm/J

Riferimenti

  1. Dickinson, M. H. How Animals move: an integrative view. Science. 288 (5463), 100-106 (2000).
  2. Sponberg, S., Abbott, E., Sawicki, G. S. Perturbing the muscle work loop paradigm to unravel the neuromechanics of unsteady locomotion. Journal of Experimental Biology

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Ristampe e permessi

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