क्वांटिटेटिव पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूपीसीआर) -आधारित हेलिकोबैक्टर पाइलोरी संक्रमण और एंटीबायोटिक प्रतिरोध का तेजी से निदान
Summary
प्रोटोकॉल स्ट्रिंग परीक्षण के माध्यम से हेलिकोबैक्टर पाइलोरी पेट के संक्रमण के तेजी से निदान के लिए एक गैर-आक्रामक विधि प्रस्तुत करता है और मात्रात्मक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूपीसीआर) का उपयोग करके क्लैरिथ्रोमाइसिन और लेवोफ़्लॉक्सासिन के लिए इसके एंटीबायोटिक प्रतिरोध को निर्धारित करता है।
Abstract
हेलिकोबैक्टर पाइलोरी एक प्रमुख मानव रोगज़नक़ है जो वैश्विक आबादी के लगभग आधे हिस्से को संक्रमित करता है और इसके बढ़ते एंटीबायोटिक प्रतिरोध के कारण एक गंभीर स्वास्थ्य खतरा बनता जा रहा है। यह क्रोनिक सक्रिय गैस्ट्र्रिटिस, पेप्टिक अल्सर रोग और गैस्ट्रिक कैंसर का प्रेरक एजेंट है और इसे इंटरनेशनल एजेंसी फॉर रिसर्च ऑन कैंसर द्वारा ग्रुप 1 कार्सिनोजेन के रूप में वर्गीकृत किया गया है। इसलिए, एच पाइलोरी का तेजी से और सटीक निदान और इसके एंटीबायोटिक प्रतिरोध का निर्धारण इस जीवाणु रोगज़नक़ के कुशल उन्मूलन के लिए महत्वपूर्ण है। पाइलोरी निदान विधियों में मुख्य रूप से यूरिया सांस परीक्षण (यूबीटी), एंटीजन परीक्षण, सीरम एंटीबॉडी परीक्षण, गैस्ट्रोस्कोपी, रैपिड यूरिया टेस्ट (आरयूटी), और बैक्टीरियल कल्चर शामिल हैं। उनमें से, पहले तीन पहचान विधियां गैर-आक्रामक हैं, जिसका अर्थ है कि वे संचालन करने के लिए आसान परीक्षण हैं। हालांकि, इन तकनीकों के माध्यम से बैक्टीरिया को पुनः प्राप्त नहीं किया जा सकता है; इस प्रकार, दवा प्रतिरोध परीक्षण नहीं किया जा सकता है। अंतिम तीन आक्रामक परीक्षाएं हैं, लेकिन वे महंगे हैं, उच्च कौशल की आवश्यकता होती है, और रोगियों को नुकसान पहुंचाने की क्षमता होती है। इसलिए, नैदानिक अभ्यास में एच पाइलोरी को कुशलतापूर्वक समाप्त करने के लिए एच पाइलोरी का पता लगाने और दवा प्रतिरोध परीक्षण के लिए एक गैर-प्रमुख, तेजी से और एक साथ विधि बहुत महत्वपूर्ण है। इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य एच पाइलोरी संक्रमण और एंटीबायोटिक प्रतिरोध का तेजी से पता लगाने के लिए मात्रात्मक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूपीसीआर) के साथ संयोजन में स्ट्रिंग परीक्षण को शामिल करने वाली एक विशिष्ट प्रक्रिया प्रस्तुत करना है। बैक्टीरियल संस्कृतियों के विपरीत, यह विधि एच पाइलोरी संक्रमण की स्थिति और दवा प्रतिरोध के आसान, तेजी से, गैर-आक्रामक निदान की अनुमति देती है। पाइलोरी संक्रमण और 23 एस आरआरएनए और गाइरा जीन में उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए क्यूपीसीआर का उपयोग किया, जो क्रमशः क्लेरिथ्रोमाइसिन और लेवोफ़्लॉक्सासिन के खिलाफ प्रतिरोध को एन्कोड करते हैं। नियमित रूप से उपयोग की जाने वाली संवर्धन तकनीकों की तुलना में, यह प्रोटोकॉल एच पाइलोरी संक्रमण का पता लगाने और क्यूपीसीआर का उपयोग करके इसके एंटीबायोटिक प्रतिरोध को निर्धारित करने के लिए एक गैर-आक्रामक, कम लागत वाली और समय की बचत तकनीक प्रदान करता है।
Introduction
पाइलोरी एक सर्पिल आकार का, अत्यधिक गतिशील, ग्राम-नकारात्मक जीवाणु है जो मुख्य रूपसे पेट के पाइलोरस क्षेत्र में रहता है। यह एक आम रोगज़नक़ है जोवैश्विक आबादी के लगभग 50% को संक्रमित करता है। पाइलोरी संक्रमण वाले अधिकांश लोगों में कोई नैदानिक अभिव्यक्तियां नहीं होती हैं, और अधिकांश संक्रमण के कई वर्षों के बाद विभिन्न बीमारियों का विकास करते हैं, जिसमें पुरानी गैस्ट्र्रिटिस, पेप्टिक अल्सर, गैस्ट्रिक अल्सर और गैस्ट्रिक कैंसर3 शामिल हैं। विभिन्न आबादी के आधार पर कई अध्ययनों में, पेट के कैंसर और प्रीकैंसर घावों को रोकने के लिए एच पाइलोरी को खत्म करने कीप्रभावकारिता का प्रदर्शन किया गया है। इसलिए, विश्व स्वास्थ्य संगठन (डब्ल्यूएचओ) इंटरनेशनल एजेंसी फॉर रिसर्च ऑन कैंसर ने एच पाइलोरी उन्मूलन को निवारक उपाय के रूप में सलाह दीहै।
पाइलोरी संक्रमण की पहचान करने के लिए गैर-आक्रामक तरीकों का उपयोग स्पर्शोन्मुख अपच वाले अधिकांश व्यक्तियों के लिए उपचार का एक प्रमुख घटक है। यूरिया सांस परीक्षण (यूबीटी), एच पाइलोरी फेकल एंटीजन टेस्ट (एसएटी), और सीरोलॉजिकल परीक्षण लोकप्रिय गैर-आक्रामक तकनीकें हैं। इनमें से, यूबीटी कम से कम घुसपैठ और सबसे सटीक प्रक्रिया उपलब्ध है। यूबीटी यूरिया का उपयोग करता है, जो एच पाइलोरी में प्रचुर मात्रा में मौजूद है, आइसोटोपिक रूप से लेबल यूरिया को अमोनिया और कार्बन डाइऑक्साइड (13 सी या 14 सी) में हाइड्रोलाइज करने के लिए। इसके विपरीत, इम्यूनोक्रोमैटोग्राफिक परख (आईसीए) 7 नमूने के लिए सुविधाजनक, सरल और गैर-प्रभावी है। हालांकि, परीक्षण की सटीकता कई कारकों से प्रभावित होती है, जैसे मल के नमूने की गुणवत्ता, तापमान और नमूना संग्रह और परीक्षण के बीच अंतराल। प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के आधार पर एक अन्य परीक्षण सीरम एच पाइलोरी एंटीबॉडी परीक्षण है, जो रोगी के सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाता है। हालांकि, यह परीक्षण उपचार के बाद के विश्लेषण के लिए उपयुक्त नहीं है क्योंकि बैक्टीरियाको साफ करने के बाद एंटीबॉडी लंबे समय तक रहते हैं। एक और बड़ी कमी यह है कि ये विधियां केवल एच पाइलोरी संक्रमण का निदान करती हैं और संवेदनशीलता-आधारित उपचार का मार्गदर्शन करने के लिए दवा प्रतिरोध परीक्षण की अनुमति नहीं देती हैं।
आक्रामक परीक्षण विधियों के लिए, गैस्ट्रिक बायोप्सी ऊतक को एंडोस्कोपी द्वारा लिया जाना चाहिए और फिर हिस्टोलॉजी, यूरिया रैपिड टेस्ट और बैक्टीरियल कल्चर के अधीन किया जाना चाहिए। ये परीक्षण विधियां भी कई कारकों के कारण बहुत सीमित हैं। वर्तमान में, ये तकनीक बुजुर्ग रोगियों, प्रीकैंसरस या घातक बीमारी के लिए उच्च जोखिम वाले रोगियों और गैस्ट्रोओसोफेगल रिफ्लक्स रोग या एच पाइलोरी संक्रमण9 के लिए पहली पंक्ति की चिकित्सा में विफल रहे रोगियों तक सीमित हैं। पाइलोरी की अनूठी विकास विशेषताओं के कारण, बैक्टीरिया संस्कृति की सफलता दर केवल 50% 10 तक पहुंचती है। इस प्रकार, आणविक पहचान विधियां आक्रामक पहचान विधियों की उच्च मांगों को दूर करने और संवेदनशीलता-आधारित उपचार का मार्गदर्शन करने के लिए नई आशा प्रदान करती हैं। आणविक पहचान विधियों के बीच, मात्रात्मक पीसीआर हाल के वर्षों में काफी विकसित हुआ है। क्यूपीसीआर, पारंपरिक पीसीआर के विपरीत, जेल वैद्युतकणसंचलन की आवश्यकता नहीं होती है और एनीलिंग चरण में प्राइमर और जांच जोड़कर नमूनों में डीएनए / आरएनए को सटीक रूप से निर्धारित करता है। पाइलोरी संक्रमण और दवा प्रतिरोध का पता लगाने के लिए क्यूपीसीआर किट अब व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं। फिर भी, प्रत्येक विधि की अपनी सीमाएं हैं; इसलिए, एक रोगी के नैदानिक निदान और उपचार को उनके लक्षणों, संकेतों, इतिहास, अन्य प्रयोगशाला परीक्षणों और उपचार की प्रतिक्रिया के साथ संयोजन के रूप में माना जाना चाहिए।
वर्तमान में, एच.पाइलोरी संक्रमण के इलाज की प्राथमिक विधि एंटीबायोटिक्स ले रही है, लेकिन हाल ही में, एंटीबायोटिक प्रतिरोध में वृद्धि के कारण इन संक्रमणों का इलाज करना मुश्किल होता जा रहा है। इसके बाद, विश्व स्तर पर एच पाइलोरी उपचार प्रभावकारिता में उल्लेखनीय गिरावट देखी गई है, जिससे एच पाइलोरी उन्मूलन एक प्रमुख सार्वजनिकस्वास्थ्य मुद्दा बन गया है।
क्लैरिथ्रोमाइसिन और लेवोफ़्लॉक्सासिन दो व्यापक स्पेक्ट्रम एंटीबायोटिक्स हैं जिनका उपयोग एच.पाइलोरी के कारण होने वाले संक्रमण के इलाज के लिए किया जाता है, लेकिन कई अध्ययनों ने एच.पाइलोरी आइसोलेट्स में इन दो दवाओं के खिलाफ व्यापक प्रतिरोध की सूचना दी है। ए 2143 जी, ए 2142 जी, और ए 2142 सी 2.9 केबी 23 एस आरआरएनए जीन में पाए जाने वाले कई बिंदु उत्परिवर्तनों में से तीन हैं जिनके परिणामस्वरूप मैक्रोलाइड को बंधन से रोककर क्लैरिथ्रोमाइसिन प्रतिरोध होता है। इसी समय, लिवोफ़्लॉक्सासिन प्रतिरोध जीन के उत्परिवर्तन लोकी मुख्य रूप से गाइरा जीन12 के छह उत्परिवर्तन साइटों (ए 260 टी, सी 261 ए, टी 261 जी, जी 271 ए, जी 271 टी, ए 272 जी) में स्थित हैं। आनुवंशिक उत्परिवर्तन के आधार पर इन प्रतिरोध तंत्रों की खोज ने आणविक परीक्षण के लिए सांस्कृतिक-आधारित अध्ययनों के माध्यम से एच पाइलोरी का पता लगाने में क्रमिक बदलाव किया है।
कुल मिलाकर, एच पाइलोरी संक्रमण और दवा प्रतिरोध का पता लगाने के लिए एक गैर-प्रमुख, प्रभावी और एक साथ नैदानिक विधि की तत्काल नैदानिक आवश्यकता है। हमने नमूनाकरण की कठिनाइयों को दूर करने और विभिन्न प्राइमर जांच का उपयोग करके एच पाइलोरी संक्रमण और दवा प्रतिरोध का एक साथ पता लगाने के लक्ष्य को प्राप्त करने के लिए एक संयुक्त स्ट्रिंग परीक्षण और क्यूपीसीआर विधि अपनाई।
Protocol
Representative Results
Discussion
पाइलोरी का पता लगाने को आक्रामक और गैर-आक्रामकदोनों तरीकों का उपयोग करके किया जा सकता है। आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली आक्रामक तकनीकों जैसे हिस्टोपैथोलॉजी, रैपिड यूरिया टेस्ट, पोलीमरे?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को शेन्ज़ेन में सनमिंग प्रोजेक्ट ऑफ मेडिसिन द्वारा समर्थित किया गया था (ग्रांट नंबर 1)। SZSM201510050) और गुआंग्डोंग बेसिक एंड एप्लाइड बेसिक रिसर्च फाउंडेशन (अनुदान संख्या 2022 ए 1515220023)। गुआनडोंग प्रांतीय पीपुल्स अस्पताल के उन्नत प्रतिभाओं के लिए रिसर्च फाउंडेशन (सं। KJ012021097), और चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81871734, 82072380, 82272423)। अध्ययन डिजाइन, डेटा संग्रह और विश्लेषण, प्रकाशित करने का निर्णय, या पांडुलिपि की तैयारी में फंड की कोई भूमिका नहीं थी।
Materials
| 23S rRNA and gyrA gene point mutations detection kit (PCR-Fluorescence Probing) | Hongmed Infagen | Detection of Helicobacter pylori resistance to clarithromycin and levofloxacin | |
| ABI 7500 fluorescence quantitative PCR machine | Thermo Fisher Scientific | SEDA 20163220767 | Fluorescent quantitative PCR amplification |
| ABI 7500 software | Thermo Fisher Scientific | Data Analysis | |
| BSC-1500IIA2-X | BIOBASE | SEDA 20143222263 | Biosafety cabinet |
| DNA extraction kit | Daan Gene | ||
| E-Centrifuge | WEALTEC | Centrifuge the residual liquid off the wall of the tube. | |
| H. Pylori DNA detection kit (PCR-Fluorescence Probing) | Hongmed Infagen | Testing for H. pylori infection | |
| Stream SP96 automated nucleic acid extractor | Daan Gene | SEDA 20140104 | For DNA extraction |
| String test kit | Hongmed Infagen | It contains a capsule attached to a string, scissors, cotton swab, and sample preservation tube | |
| Ultra-low temperature freezers (DW-YL450) | MELING | SEDA 20172220091 | -20 °C for storing reagents |
| Vortex-5 | Kylin-bell | For mixing reagent |
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