हमने यह आकलन करने के लिए एक पद्धति विकसित की है कि आनुवंशिक रूप से इंजीनियर चूहों में तंत्रिका तंत्र नियोप्लाज्म अपने मानव समकक्षों के विकृति विज्ञान को सटीक रूप से पुन: व्यवस्थित करता है या नहीं। यहां, हम इन हिस्टोलॉजिक तकनीकों, परिभाषित पैथोलॉजिकल मानदंड, और संस्कृति पद्धतियों को न्यूरोफिब्रोमस और पी 0-जीजीएफ β 3 माउस मॉडल में उत्पन्न होने वाले घातक परिधीय तंत्रिका म्यान ट्यूमर पर लागू करते हैं।
ऑटोसोमल प्रमुख ट्यूमर संवेदनशीलता सिंड्रोम न्यूरोफाइब्रोमैटोसिस टाइप 1 (एनएफ 1) वाले मरीजों में आमतौर पर प्लेक्सीफॉर्म न्यूरोफिब्रोमस (पीएन) विकसित होता है जो बाद में अत्यधिक आक्रामक घातक परिधीय तंत्रिका म्यान ट्यूमर (एमपीएनएसटी) में बदल जाता है। उस प्रक्रिया को समझना जिसके द्वारा एक पीएन एमपीएनएसटी में बदल जाता है, आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस (जीईएम) मॉडल की उपलब्धता से सुविधा होगी जो एनएफ 1 के साथ मनुष्यों में देखी गई पीएन-एमपीएनएसटी प्रगति को सटीक रूप से दोहराती है। दुर्भाग्य से, Nf1 पृथक्करण वाले GEM मॉडल इस प्रक्रिया को पूरी तरह से पुन: व्यवस्थित नहीं करते हैं। इसने हमें P 0-GGFβ3 चूहों को विकसित करने के लिए प्रेरित किया, एक GEM मॉडल जिसमें श्वान कोशिकाओं में श्वान सेल मिटोजेन न्यूरेगुलिन -1 (NRG1) की अतिअभिव्यक्ति के परिणामस्वरूप PNs का विकास होता है जो उच्च आवृत्ति के साथ MPNST बनने के लिए प्रगति करते हैं। हालांकि, यह निर्धारित करने के लिए कि P 0-GGFβ3 चूहों में ट्यूमरजेनेसिस और नियोप्लास्टिक प्रगति NF1 रोगियों में देखी गई प्रक्रियाओं को सटीक रूप से मॉडल करती है, हमें पहले यह साबित करना था कि P0-GGFβ3 परिधीय तंत्रिका म्यान ट्यूमर की विकृति उनके मानव समकक्षों की विकृति को पुन: व्यवस्थित करती है।
यहां, हम P 0-GGFβ3 और P0-GGFβ3 का उपयोग करके GEM मॉडल में परिधीय तंत्रिका तंत्र नियोप्लाज्म का सटीक निदान और ग्रेड करने के लिए उपयोग की जाने वाली विशेष पद्धतियों का वर्णन करते हैं; एक उदाहरण के रूप में Trp53+/- चूहे। हम पीएन और एमपीएनएसटी के निदान के लिए उपयोग किए जाने वाले हिस्टोलॉजिक, इम्यूनोहिस्टोकेमिकल और हिस्टोकेमिकल तरीकों का वर्णन करते हैं, इन नियोप्लाज्म को अन्य ट्यूमर प्रकारों से कैसे अलग किया जाए जो उनकी पैथोलॉजी की नकल करते हैं, और इन नियोप्लाज्म को कैसे ग्रेड करें। हम जीईएम एमपीएनएसटी से प्रारंभिक मार्ग संस्कृतियों की स्थापना पर चर्चा करते हैं, इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री का उपयोग करके इन संस्कृतियों को कैसे चिह्नित किया जाए, और एलोग्राफ्ट स्थापित करके उनकी ट्यूमरजेनिसिटी को कैसे सत्यापित किया जाए। सामूहिक रूप से, ये तकनीकें पीएन और एमपीएनएसटी की विकृति को चिह्नित करती हैं जो जीईएम मॉडल में उत्पन्न होती हैं और गंभीर रूप से इन म्यूरिन ट्यूमर की विकृति की तुलना उनके मानव समकक्षों से करती हैं।
पिछले तीन दशकों में, कई प्रयोगशालाओं ने मानव कैंसर से जुड़े उत्परिवर्तन को माउस जीनोम में पेश करके या मानव कैंसर में अतिरंजित जीन उत्पाद को ओवरएक्सप्रेस करके मानव कैंसर के माउस मॉडल बनाने का प्रयास किया है। परिणामी आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस (जीईएम) मॉडल का उपयोग विभिन्न उद्देश्यों के लिए किया जा सकता है जैसे कि यह स्थापित करना कि नया शुरू किया गया जीनोमिक संशोधन ट्यूमरजेनेसिस शुरू करता है, अन्य बाद में होने वाले आनुवंशिक या एपिजेनेटिक परिवर्तनों की पहचान करता है जो ट्यूमर प्रगति में योगदान करते हैं, और प्रमुख सिग्नलिंग मार्गों को परिभाषित करते हैं जो ट्यूमर दीक्षा और प्रगति को चलाते हैं। ऑर्थोटोपिक ज़ेनोग्राफ्ट मॉडल के विपरीत, जो इम्यूनोडेफिशिएंसी चूहों के उपयोग पर भरोसा करते हैं, जीईएम कैंसर मॉडल में पूरी तरह कार्यात्मक प्रतिरक्षा प्रणाली होती है और इसलिए उम्मीदवार चिकित्सीय एजेंटों के लिए अधिक सटीक मॉडल प्रतिक्रियाएं होती हैं। हालांकि, इन जैसे उद्देश्यों के लिए जीईएम कैंसर मॉडल का उपयोग करते समय, यह आवश्यक है कि जांचकर्ता पुष्टि करें कि जीईएम नियोप्लाज्म के साथ किए गए अवलोकन उनके मानव समकक्षों के लिए प्रासंगिक हैं। इस सत्यापन में जीईएम नियोप्लाज्म के विकृति विज्ञान का गहन मूल्यांकन और यह निर्धारित करना शामिल होना चाहिए कि क्या जीईएम नियोप्लाज्म की पैथोलॉजिकल विशेषताएं संबंधित मानव ट्यूमर प्रकार की विकृति को पुन: व्यवस्थित करती हैं।
ट्यूमर संवेदनशीलता सिंड्रोम न्यूरोफाइब्रोमैटोसिस टाइप 1 (एनएफ 1) मानव तंत्रिका तंत्र को प्रभावित करने वाली सबसे आम आनुवंशिक बीमारी है, जो प्रत्येक 3,000-3,500 जीवित जन्मों में लगभग 1 में होती है। एनएफ 1 से पीड़ित व्यक्ति कई सौम्य परिधीय तंत्रिका म्यान ट्यूमर विकसित करते हैं जिन्हें उनकी त्वचा (त्वचीय न्यूरोफिब्रोमास) और बड़ी नसों और तंत्रिका प्लेक्सस (प्लेक्सीफॉर्म न्यूरोफिब्रोमास) में न्यूरोफिब्रोमस के रूप में जाना जाता है। जबकि त्वचीय और प्लेक्सीफॉर्म न्यूरोफिब्रोमस दोनों शारीरिक, व्यवहारिक और/या सामाजिक हानि पैदा करके रोगी के जीवन की गुणवत्ता को खराब करते हैं, प्लेक्सीफॉर्म न्यूरोफिब्रोमस (पीएन) विशेष रूप से खतरनाक 4,5 हैं। ऐसा इसलिए है क्योंकि पीएन अक्सर घातक परिधीय तंत्रिका म्यान ट्यूमर (एमपीएनएसटी) में बदल जाते हैं, जो असाधारण रूप से कम जीवित रहने की दर 1,2 के साथ आक्रामक स्पिंडल सेल नियोप्लाज्म होते हैं। बड़े हिस्से में, यह कम जीवित रहने की दर इसलिए है क्योंकि रेडियो- और कीमोथेरेपी रेजिमेंस जो वर्तमान में एमपीएनएसटी के इलाज के लिए उपयोग किए जाते हैं, अप्रभावी हैं। हालांकि, नए, अधिक प्रभावी उपचार विकसित करना चुनौतीपूर्ण रहा है। ऐसा इसलिए है, क्योंकि एनएफ 1 रोगियों में आमतौर पर एमपीएनएसटी होने के बावजूद, वे अभी भी दुर्लभ नियोप्लाज्म हैं। नतीजतन, अध्ययन के लिए बड़ी संख्या में मानव ट्यूमर प्राप्त करना बहुत मुश्किल है; नैदानिक परीक्षणों के लिए एमपीएनएसटी के साथ पर्याप्त रोगियों की भर्ती करना भी चुनौतीपूर्ण है। इन सीमाओं को दूर करने के लिए, न्यूरोफिब्रोमा रोगजनन और पीएन-एमपीएनएसटी प्रगति को चलाने वाली असामान्यताओं में और अंतर्दृष्टि प्राप्त करने और उम्मीदवार चिकित्सीय एजेंटों के साथ प्रीक्लिनिकल परीक्षणों की सुविधा के लक्ष्य के साथ कई जीईएम मॉडल तैयार किए गए हैं।
एनएफ 1 रोगियों में एनएफ 1 जीन की एक प्रति में निष्क्रिय उत्परिवर्तन होते हैं। न्यूरोफिब्रोमा रोगजनन तब ट्रिगर होता है जब शेष कार्यात्मक एनएफ 1 जीन में एक निष्क्रिय उत्परिवर्तन श्वान सेल वंश में एक सेल में होता है। हैरानी की बात है, हालांकि, जब चूहों को एनएफ 1 उत्परिवर्तन को निष्क्रिय करने वाले जर्मलाइन के साथ उत्पन्न किया गया था, तो उन्होंने न्यूरोफिब्रोमस 6,7 विकसित नहीं किया। बाद का प्रदर्शन कि Nf1-null Schwann कोशिकाओं और Nf1 haploinsufficiency के साथ चूहों अन्य सभी सेल प्रकारों में (Krox20-Cre;Nf1flox/- चूहों) विकसित plexiform neurofibromas ने सुझाव दिया कि अतिरिक्त सेल प्रकार में कम Nf1 जीन खुराक neurofibroma रोगजनन8 के लिए आवश्यक था. फिर भी, Krox20-Cre में plexiform neurofibromas; Nf1flox/- चूहों MPNST बनने के लिए प्रगति नहीं की और इसलिए केवल आंशिक रूप से उनके मानव समकक्षों के जीव विज्ञान की नकल की. एमपीएनएसटी रोगजनन तब हुआ जब एनएफ 1 उत्परिवर्तन को अतिरिक्त ट्यूमर शमन जीन जैसे टीआरपी 539 या सीडीकेएन 2 ए10 में उत्परिवर्तन के साथ भागीदारी की गई थी, लेकिन इन जीईएम मॉडल में एमपीएनएसटी ने डी नोवो या अनिश्चित जैविक क्षमता (एएनयूबीपी) 11,12 के एटिपिकल न्यूरोफाइब्रोमैटस नियोप्लाज्म से विकसित किया, बजाय पहले से मौजूद सौम्य प्लेक्सिफॉर्म न्यूरोफिब्रोमस से (13,14 देखें इन मॉडलों की उत्कृष्ट समीक्षाओं के साथ-साथ अन्य मॉडलों के लिए जो सुज12 और पीटीईएन15 जैसे जीन में फ़ंक्शन म्यूटेशन के अतिरिक्त एमपीएनएसटी-जुड़े नुकसान को पेश करते हैं)।
ये माउस मॉडल एनएफ 1 से जुड़े परिधीय तंत्रिका तंत्र नियोप्लाज्म के रोगजनन में और उम्मीदवार चिकित्सीय एजेंटों का परीक्षण करने वाले प्रीक्लिनिकल परीक्षणों के लिए एनएफ 1, टीपी 53, और सीडीकेएन 2 ए जैसे जीन की भूमिका स्थापित करने के लिए अमूल्य रहे हैं। हालांकि, हमें अभी भी उस प्रक्रिया की अधूरी समझ है जिसके द्वारा प्लेक्सीफॉर्म न्यूरोफिब्रोमस अनिश्चित जैविक क्षमता (एएनयूबीपी16) और फिर एमपीएनएसटी के एटिपिकल न्यूरोफाइब्रोमैटस नियोप्लाज्म बनने के लिए प्रगति करता है। हाल ही में इस प्रक्रिया को समझने में कुछ प्रगति हुई है, हाल ही में रिपोर्ट के साथ कि एनएफ 1 और एआरएफ में विलोपन वाले चूहे एएनयूबीपी विकसित करते हैं जो एमपीएनएसटी11 बनने के लिए प्रगति करते हैं। हालांकि, एनएफ 1 उत्परिवर्तन-आधारित माउस मॉडल जो मनुष्यों में देखे गए प्लेक्सीफॉर्म न्यूरोफिब्रोमा-एमपीएनएसटी प्रगति की प्रक्रिया को पूरी तरह से पुन: व्यवस्थित करते हैं, अभी तक मौजूद नहीं हैं। इसके अलावा, यह स्पष्ट नहीं है कि एमपीएनएसटी के विकास के लिए कई अलग-अलग रास्ते हैं या नहीं। इसे देखते हुए, यह संभव है कि ऊपर वर्णित जीईएम केवल कई अलग-अलग मार्गों का एक सबसेट मॉडल करते हैं जो न्यूरोफिब्रोमा-एमपीएनएसटी प्रगति और एमपीएनएसटी रोगजनन की ओर ले जाते हैं। इस बिंदु पर इस तथ्य पर जोर दिया जाता है कि एमपीएनएसटी भी छिटपुट रूप से होते हैं और कुछ छिटपुट एमपीएनएसटी में स्पष्ट रूप से एनएफ 1 उत्परिवर्तन17,18नहीं होता है।
हालांकि इस बाद के बिंदु को मैगोलोन-लोरेंज एट अल के हालिया सुझाव द्वारा चुनौती दी गई है कि एनएफ 1 म्यूटेशन की कमी वाले कम से कम कुछ छिटपुट एमपीएनएसटी मेलेनोमा या एक अलग प्रकार के सारकोमा19 हैं, हमने हाल ही में एक छिटपुट एमपीएनएसटी और इस ट्यूमर (2 एक्सएसबी कोशिकाओं) से प्राप्त एक सेल लाइन की सूचना दी है जो एनएफ 1 जंगली प्रकार20 था. माता-पिता ट्यूमर और 2XSB सेल लाइन के लक्षण वर्णन के दौरान, हमने व्यवस्थित रूप से वैकल्पिक नैदानिक संभावनाओं को खारिज कर दिया, जिसमें मेलेनोमा और कई अन्य सरकोमा प्रकार शामिल हैं जिन्हें नियमित रूप से छिटपुट घातक परिधीय तंत्रिका म्यान ट्यूमर20 के विभेदक निदान में माना जाता है। इसके अलावा, हम ध्यान दें कि मैगोलोन-लोरेंज एट अल ने स्वीकार किया कि तीन छिटपुट एमपीएनएसटी सेल लाइनों में उनके निष्कर्षों का अध्ययन किया गया है कि यह इंगित करने के लिए सामान्यीकृत नहीं किया जा सकता है कि छिटपुट एमपीएनएसटी के रूप में पहचाने जाने वाले सभी ट्यूमर एमपीएनएसटी नहीं हैं।
एक जीईएम मॉडल का निर्माण करने के लिए जिसमें न्यूरोफिब्रोमा और एमपीएनएसटी रोगजनन आवश्यक रूप से विशिष्ट ट्यूमर शमन जीन उत्परिवर्तन पर निर्भर नहीं थे, हमने ट्रांसजेनिक चूहों को उत्पन्न किया जिसमें शक्तिशाली श्वान सेल माइटोजेन न्यूरेगुलिन -1 (एनआरजी 1) की अतिअभिव्यक्ति श्वान सेल-विशिष्ट माइलिन प्रोटीन शून्य (पी0) प्रमोटर (पी 0-जीजीएफβ3 चूहों)21 द्वारा संचालित की गई थी. हमने पहले दिखाया है कि मानव न्यूरोफिब्रोमास, एमपीएनएसटी, और एमपीएनएसटी सेल लाइनें कई एनआरजी 1 आइसोफॉर्म को एआरबीबी रिसेप्टर टायरोसिन किनेसेस (एआरबीबी 2, ईआरबी 3, और एआरबीबी 4) के साथ व्यक्त करती हैं जो एनआरजी 1 सिग्नलिंग में मध्यस्थता करती हैं और ये एआरबीबी रिसेप्टर्स संवैधानिक रूप सेसक्रिय होते हैं 22. हमने यह भी प्रदर्शित किया है कि एर्बीबी किनेसेस के फार्माकोलॉजिकल अवरोधक एमपीएनएसटी प्रसार22, उत्तरजीविता23 और प्रवासन24 को संभावित रूप से रोकते हैं। मनुष्यों में हमारी टिप्पणियों को ध्यान में रखते हुए, पी 0-जीजीएफβ3 चूहों ने प्लेक्सीफॉर्म न्यूरोफिब्रोमस25 विकसित किया है जो उच्च आवृत्ति21,25 पर एमपीएनएसटी बनने के लिए प्रगति करता है। हमने दिखाया है कि पी 0-जीजीएफ β 3 एमपीएनएसटी, उनके मानव समकक्षों की तरह, आमतौर पर टीआरपी 53 और सीडीकेएन 2 ए के उत्परिवर्तन विकसित करते हैं, साथ ही साथ कई अन्य जीनोमिक असामान्यताएं जो संभावित रूप से ट्यूमरजेनेसिस25 में योगदान करती हैं। P 0-GGFβ3 चूहों में उत्पन्न होने वाले MPNSTs में Nf1 उत्परिवर्तन निष्क्रिय नहीं होते हैं। हालांकि, आनुवंशिक पूरकता का उपयोग करते हुए, हमने दिखाया कि NRG1 P 0-GGFβ3 चूहों में ट्यूमरजेनेसिस को बढ़ावा देता है, मुख्य रूप से उसी सिग्नलिंग कैस्केड के माध्यम से जो Nf1 नुकसान26 द्वारा बदल दिया जाता है; यह निष्कर्ष हमारी खोज पर आधारित है कि Trp1 haploinsufficiency (P 0-GGFβ3;Trp53+/- चूहे) ऐसे जानवरों का उत्पादन करते हैं जिनमें MPNSTs नए सिरे से विकसित होते हैं, जैसा कि cis-Nf1+/- में देखा जाता है; Trp53+/- चूहे27.
यह और अन्य जानकारी प्राप्त करने के लिए कि P 0-GGFβ3 चूहों ने NF1 के साथ मनुष्यों में देखी जाने वाली न्यूरोफिब्रोमा रोगजनन और न्यूरोफिब्रोमा-MPNST प्रगति की प्रक्रियाओं को सटीक रूप से मॉडल किया है, हमने इन जानवरों से ऊतकों को संसाधित करने के लिए विशेष तरीके विकसित किए हैं, उनके ट्यूमर का सटीक निदान करना, इन चूहों में उत्पन्न होने वाले MPNSTs की ग्रेडिंग करना, प्रारंभिक मार्ग P0-GGFβ3 और P0-GGFβ3 की स्थापना और विशेषता करना; Trp53+/- MPNST संस्कृतियों और गंभीर रूप से P 0-GGFβ3 PNs और MPNSTs और P0-GGFβ3 की विकृति की तुलना; Trp53+/- MPNSTs उनके मानव समकक्षों के लिए। इनमें से कई पद्धतियां तंत्रिका तंत्र नियोप्लासिया के अन्य जीईएम मॉडल के लिए सामान्य हैं। इसके अतिरिक्त, इनमें से कई पद्धतियां जीईएम मॉडल पर अधिक व्यापक रूप से लागू होती हैं जिसमें अन्य अंग साइटों में नियोप्लाज्म उत्पन्न होते हैं। नतीजतन, यहां हम इन पद्धतियों का विस्तृत विवरण प्रस्तुत करते हैं।
यहां प्रस्तुत हिस्टोलॉजिकल और जैव रासायनिक तरीके न्यूरोफिब्रोमा और एमपीएनएसटी रोगजनन के जीईएम मॉडल के निदान और विशेषता के लिए एक रूपरेखा प्रदान करते हैं। इन वर्षों में, हम इन पद्धतियों जीईएम मॉडल <sup c…
The authors have nothing to disclose.
इस काम को नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ न्यूरोलॉजिकल डिजीज एंड स्ट्रोक (R01 NS048353 और R01 NS109655 से एसएलसी को अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था; R01 NS109655-03S1 से D.P.J.), राष्ट्रीय कैंसर संस्थान (R01 CA122804 से SLC) और रक्षा विभाग (X81XWH-09-1-0086 और W81XWH-12-1-0164 से SLC)।
100 mm Tissue Culture Plates | Corning Falcon | 353003 | |
3, 3'- Diaminobensidine (DAB) | Vector Laboratories | SK-400 | |
6- well plates | Corning Costar | 3516 | |
Acetic Acid | Fisher Scientific | A38-212 | |
Alexa Fluor 488 Secondary (Goat Anti-Mouse) | Invitrogen | A11029 | |
Alexa Fluor 568 Secondary (Goat Anti-Mouse) | Invitrogen | A21043 or A11004 | |
Alexa Fluor 568 Secondary (Goat Anti-Rabbit) | Invitrogen | A11036 | |
Ammonium Chloride (NH4Cl) | Fisher Scientific | A661-500 | |
BCA Protein Assay Kit | Thermo Scientific | 23225 | |
Bovine Serum Albumin | Fisher Scientific | BP1600-100 | |
Caldesmon | ABCAM | E89, ab32330 | |
CD117 | Cell Marque | 117R-18-ASR | |
CD163 | Leica | NCL-L-CD163 | |
CD31 | ABCAM | ab29364 | |
CD34 | ABCAM | ab81289 | |
CD86 | ABCAM | ab53004 | |
Cell Scraper | Sarstedt | 83.183 | |
Cell Stripper | Corning | 25-056-CI | |
Circle Coverslip | Fisher Scientific | 12-545-100 | |
Citrisolve Hybrid (d-limonene-based solvent) | Decon Laboratories | 5989-27-5 | |
Critic Acid | Fisher Scientific | A104-500 | |
Cytokeratin | ABCAM | C-11, ab7753 | |
Desmin | Agilent Dako | clone D33 (M0760) | |
Diaminobensizdine (DAB) Solution | Vector Laboratories | SK-4100 | |
DMEM | Corning | 15-013-CV | |
Eosin Y | Thermo Scientific | 7111 | |
Ethanol (200 Proof) | Decon Laboratories | 2716 | |
Fetal Calf Serum | Omega Scientific | FB-01 | |
Forksolin | Sigma-Aldrich | F6886 | |
Glycerol | Sigma-Aldrich | G6279 | |
Hank's Balanced Salt Solution (HBSS) | Corning | 21-022-CV | |
Harris Hematoxylin | Fisherbrand | 245-677 | |
Hemacytometer | Brightline-Hauser Scientific | 1490 | |
Hydrochloric Acid | Fisher Scientific | A144-212 | |
Hydrogen Peroxide | Fisher Scientific | 327-500 | |
Iba1 | Wako Chemicals | 019-19741 | |
ImmPRESS HRP (Peroxidase) Polymer Kit ,Mouse on Mouse | Vector Laboratories | MP-2400 | |
ImmPRESS HRP (Peroxidase) Polymer Kit, Horse Anti-Rabbit | Vector Laboratories | MP-7401 | |
Incubator | Thermo Scientific | Heracell 240i CO2 incubator | |
Isoflurane | Piramal | NDC 66794-017-25 | |
Isopropanol | Fisher Scientific | A415 | |
Ki-67 | Cell Signaling | 12202 | |
Laminin | Thermo Fisher Scientific | 23017015 | |
Liquid Nitrogen | |||
MART1 | ABCAM | M2-9E3, ab187369 | |
Microtome | |||
Nestin | Millipore | Human: MAD5236 (10C2), Human:MAB353 (Rat-401) | |
Neuregulin 1 beta | In house | Made by S.L.C. (also available as 396-HB-050/CF from R&D Systems) | |
Neurofibromin | Santa Cruz Biotechnology | sc-67 | |
NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ mice | Jackson Laboratory | 5557 | |
Nonfat Dry Milk | Walmart | Great Value Brand | |
P0-GGFβ3 mice | In house | ||
Paraffin Wax | Leica | Paraplast 39601006 | |
Parafilm M | Sigma-Aldrich | PM-999 | |
Paraformaldehyde (4%) | Thermo Scientific | J19943-K2 | |
Permount (Xylene Mounting Medium) | Fisher Scientific | SP15-100 | |
pH Meter | Mettler Toldedo | Seven Excellence, 8603 | |
Phosphate Buffered Saline (Dulbecco's) | Corning | 20-031-CV | |
PMEL | ABCAM | EP4863(2), ab137078 | |
Poly-L-Lysine Hydrobromide | Sigma-Aldrich | P5899-5MG | |
Portable Isoflurance Machine | VetEquip Inhalation Anesthesia Systems | ||
PVA-DABCO (Aqueous Mounting Medium) | Millipore Sigma | 10981100ML | |
Rice Cooker | Beech Hamilton | ||
S100B | Agilent Dako | Z0311 (now GA504) | |
SMA | Ventana Medical Systems | clone 1A4 | |
Sodium Chloride | Fisher Scientific | S640 | |
Sodium Citrate (Dihydrate) | Fisher Scientific | BP327-1 | |
Sox10 | ABCAM | ab212843 | |
Steel histology mold | |||
Superfrost Plus Microscope Slides | Fisher Scientific | 12-550-15 | |
TCF4/TCFL2 | Cell Signaling | (CH48H11) #2569 | |
Tissue Cassette | |||
Toluidine Blue | ACROS Organics | 348600050 | |
Triton X-100 | Fisher Scientific | BP151-500 | |
TRIzol | Invitrogen | 15596026 | |
Trypsin | Corning | 25-051-31 |