Tuina intervention i natriummonoiodoacetat injektionsinduceret rotte Model af knæartrose

Summary

Denne protokol beskriver metoderne til Tuina-intervention i natriummonoiodoacetatinjektionsinduceret rottemodel af knæartrose (KOA), som giver en reference for anvendelsen af Tuina i KOA-dyremodeller. Denne protokol undersøger også Tuinas effektive mekanisme for KOA, og resultaterne vil bidrage til at fremme dens anvendelse.

Abstract

Knæartrose (KOA), en almindelig degenerativ ledlidelse, er karakteriseret ved kronisk smerte og handicap, som kan udvikle sig til uoprettelig strukturel skade på leddet. Undersøgelser af sammenhængen mellem ledbrusk, muskler, synovium og andet væv omkring knæleddet i KOA er af stor betydning. I øjeblikket omfatter styring af KOA livsstilsændringer, motion, medicin og kirurgiske indgreb; dog mangler der stadig belysning af de indviklede mekanismer, der ligger til grund for KOA-relateret smerte. Derfor er KOA smerter fortsat en vigtig klinisk udfordring og en terapeutisk prioritet. Tuina har vist sig at have en regulerende virkning på motor-, immun- og endokrine systemer, hvilket giver anledning til udforskning af, om Tuina kunne lindre KOA-symptomer forårsaget af opregulering af inflammatoriske faktorer, og yderligere, hvis de inflammatoriske faktorer i skeletmuskulatur kan øge udviklingen af KOA.

Vi randomiserede 32 hanrotter (SD) (180-220 g) i fire grupper på otte dyr hver: antiPD-L1+Tuina (gruppe A), model (gruppe B), Tuina (gruppe C) og skinkirurgi (gruppe D). For gruppe A, B og C injicerede vi 25 μL natriummonoiodoacetat (MIA) opløsning (4 mg MIA fortyndet i 25 μL steril saltopløsning) i højre knæledshulrum, og for gruppe D blev den samme mængde steril fysiologisk saltvand injiceret. Alle grupperne blev evalueret ved hjælp af de mindst til mest stressende tests (pote mekanisk tilbagetrækningstærskel, pote tilbagetrækning termisk latenstid, hævelse af højre knæled, Lequesne MG score, hudtemperatur) før injektion og 2, 9 og 16 dage efter injektion.

Introduction

Knæartrose (KOA) er en almindelig degenerativ slidgigt, der er karakteriseret ved kronisk smerte og handicap, og relativt alvorlig KOA vil føre til irreversibel strukturel skade på leddet¹. Den høje globale forekomst af KOA er blevet en stor global folkesundhedsudfordring^2,3, hvilket alvorligt forringer patienternes livskvalitet ^4,5. Undersøgelser har vist, at KOA påvirker mere end 260 millioner mennesker verden over⁶. Med befolkningens aldring er den samlede forekomst af KOA i Kina så høj som 17,0% over 40 år, hvilket lægger en tung byrde på familierne til de berørte ^7,8.

Ifølge kinesisk medicin tilhører KOA kategorien “lammelse”⁹, og den gule kejsers klassiker af intern medicin forbinder sener, knogler og kød med lammelse. Derfor skal vi være opmærksomme på forbindelsen mellem brusk, muskel, synovium samt andre væv omkring knæleddet i KOA. I moderne medicin driver både muskel- og knoglebetændelse, som er hovedkomponenter i immunhomeostase af arthritis, udviklingen af KOA-smerter. Imidlertid fokuserer de fleste undersøgelser på bruskbetændelse og synovial betændelse i knogleled, og der er mangel på artikler, der undersøger inflammatoriske fænomener i skeletmuskler. Derfor er der behov for mere forskning i skeletmuskulaturens rolle i inflammation for at få en mere omfattende forståelse af KOA og give ideer til mere effektive behandlingsmetoder. I en gennemgang af litteraturen fandt vi, at hæmning af den immunrelaterede faktor programmeret dødsligand 1 (PD-L1) forværrede progressionen af KOA^10,11, og at der var differentiel ekspression af IL-15 og FOXO1 i skeletmuskulaturen hos patienter med KOA¹² samt signifikant skeletmuskelbetændelse hos patienter med slutstadiet KOA^, hvilket også var forbundet med ændringer i gang. Det har vist sig, at skeletmuskulaturen også kan udskille faktorer, der er tæt forbundet med inflammatorisk immunitet, såsom IL-6, og at TNF-α også er tæt forbundet med PD-L1-vejen og KOA^13,14,15.

I øjeblikket omfatter tilgængelige behandlinger for KOA vægtkontrol, motion, medicin og kirurgi, som normalt omfatter intraartikulære injektioner, smertestillende medicin, artroskopisk kirurgi og periprostetisk osteotomi i knæet¹⁶. I øjeblikket kan KOA-sygdomsprogression ikke stoppes fuldstændigt eller vendes, og uden en klar forståelse af de komplekse mekanismer, der ligger til grund for KOA-smerter, er KOA-patienter i risiko for overforbrug af smertestillende medicin og en høj forekomst af bivirkninger⁸. De fleste behandlingsstrategier er kun effektive i korte perioder og fokuserer kun på midlertidig lindring af symptomer snarere end på patogenesen af sygdommen. Derfor er KOA smerter fortsat en prioritet og en udfordring for behandling, hvilket udgør en alvorlig klinisk udfordring. Tuina kan dog direkte stimulere skeletmusklerne omkring det berørte led i KOA-behandling og kan give nogle fordele. Kombineret med den foregående beskrivelse er det den ideelle terapi at studere skeletmuskelvævets rolle i KOA, og afklaring af skeletmuskelvævets rolle i betændelse kan også give bedre teoretisk støtte til Tuina of KOA.

Undersøgelser har vist, at massageterapi, osteopatisk manipulerende terapi og spinal manipulation kan hjælpe med at lindre smerter og genoprette kropsfunktionen^17,18. Disse manipulationer kan virke på lokal betændelse og lindre spasmer og analgesi gennem ekstern mekanisk virkning. De kan lindre smerter efter total knæartroplastik, reducere brugen af smertestillende lægemidler, fremme postoperativ genopretning og forbedre biomekanisk balance¹⁹. Svensk massage er mulig i behandlingen af slidgigt og kan reducere stress og forbedre livskvaliteten²⁰. Den terapeutiske virkning af Tuina på KOA er blevet forudset af visse undersøgelser.

I dette eksperiment vil vores team undersøge, om ekspressionen af PD-L1 og relaterede inflammatoriske faktorer i skeletmuskulatur kan inducere KOA og fremme dens udvikling baseret på den MIA-inducerede KOA-model hos rotter. Tuina vil også blive implementeret for at se, om det kan lindre KOA-symptomer forårsaget af øget inflammatorisk faktorekspression. Tuina vil blive kombineret med PD-L1-hæmning for at demonstrere sammenhængen mellem Tuina-medieret PD-1-vej i skeletmuskelbetændelse, der påvirker KOA-udvikling og smerte, hvilket danner grundlaget for yderligere undersøgelser på flere niveauer af de terapeutiske mekanismer ved Tuina-intervention i KOA.

Sammenfattende beskriver dette papir undersøgelsen og udarbejdelsen af mekanismerne for skeletmuskelbetændelse i udviklingen af KOA og dens smerte samt de terapeutiske virkninger af Tuina på KOA ud fra perspektivet af immuninflammatorisk faktorekspression kombineret med adfærdsrelaterede indikatorer for at tilvejebringe moderne forskningsbevis for teorien om “ubalance i sene og knogler” i traditionel kinesisk medicin.

Protocol

Alle forsøg blev godkendt og overvåget af Animal Care and Use Committee ved Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (godkendelsesnummer: SYXK2018-0040), som er i overensstemmelse med bestemmelserne i World Medical Association Helsinki Declaration. 1. Tilberedning af dyr Hus 32 Sprague Dawley (SD) hanrotter i alderen 8 uger og vejer 180-220 g i et specifikt patogenfrit staldapparat under 12 timers lys/12 timers mørke cyklusser ved 24 ± 2 °C og 60% fug…

Representative Results

Den beskrevne protokol blev implementeret i en klinisk indstilling på Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine. Figur 1 viser den nøjagtige placering af akupunkterne, der skubbes i rotter, og tabel 1 illustrerer de fælles fordele ved at stimulere disse punkter. Tabel 2 og tabel 3 giver overbevisende beviser for bemærkelsesværdig smertelindring opnået gennem Tuina-behandling, selv i fravær af PD-1-vejhæm…

Discussion

Denne undersøgelse har til formål at vurdere forbedringen af KOA efter Tuina-intervention ved hjælp af standardiserede adfærdsindikatorer og undersøge Tuinas mekanismer for KOA og sammenhængen mellem skeletmuskulatur og KOA. I modsætning til farmakologiske og kirurgiske terapier har Tuina en positiv regulerende effekt på motor-, immun- og endokrine systemer. Tuina kan lindre betændelse og smerte produceret af sygdom ved at handle på forskellige mål. For eksempel kan det ved at regulere TLR4-vejen og miRNA hæm…

Materials

Anti-PD-L1	Abcam, Cambridge, MA, USA	ab80276
electric von Frey esthesiometer	IITC/Life Science, Woodland Hills, CA, USA	ALMEMO 2450
GraphPad Prism 9.0	GraphPad Software		Software for stastistical analysis
monosodium iodoacetate	Sigma-Aldrich Inc	I9148	Resolved into normal saline for injection
pentasorbital sodium	Sigma-Aldrich Inc	P3761
Sprague Dawley (SD) male rats	Shanghai Jihui Experimental Animal Breeding Co., Ltd	No. SCXK (Hu) 2017-0012
thermal analgesia tester	IITC/Life Science	Model 390