Efterligning af Dings rullemetode på Notexin-induceret muskelskade hos rotter

Summary

Denne protokol beskriver en simpel enhed, der efterligner Dings rullemetode, etablerer en rottemodel af skeletmuskelskade og bruger hæmatoxylin-eosinfarvning til at observere patologien for beskadiget væv og enzymbundet immunosorbentassay til at detektere ændringer i serumskademarkører.

Abstract

Dings rullemetode er en af de mest almindeligt anvendte manipulationer i traditionelle kinesiske massageklinikker (Tuina) og en af de mest indflydelsesrige nutidige Tuina-manipulationer i Kina. Den er baseret på den traditionelle rullemetode, der almindeligvis anvendes i Zen-genren med én finger og hedder Dings rullemetode. På grund af dets antiinflammatoriske og blodcirkulationsfremmende virkninger har Dings rullemetode sunde terapeutiske virkninger på myopati. På grund af det store kraftområde, der påføres menneskelig hud, er Dings rullemetode udfordrende at udføre på forsøgsdyr med små hudområder, såsom rotter og kaniner. Derudover adskiller styrken af Tuina påført menneskekroppen sig fra den, der anvendes på forsøgsdyr, så det kan ske, at styrken er for høj eller for lav til at opnå den terapeutiske virkning af Tuina under eksperimentet. Dette eksperiment sigter mod at skabe et simpelt massageapparat, der er egnet til rotter baseret på Dings rullende manipulationsparametre (styrke, frekvens, Tuina-varighed). Enheden kan standardisere manipulation i dyreforsøg og reducere variationen i Tuina-kraft, der påføres forskellige dyr på grund af subjektive faktorer. En rottemodel af notexin-induceret skeletmuskelskade blev etableret, og plasmaskademarkører kreatinkinase (CK) og fedtsyrebindende protein 3 (FABP3) blev brugt til at vurdere den terapeutiske virkning af Tuina på skeletmuskelskade. Resultaterne viste, at denne Tuina massager kunne reducere niveauerne af CK og FABP3 ekspression og bremse graden af skeletmuskelskade. Derfor bidrager Tuina-massageapparatet, der er beskrevet her, efterligner Dings rullemetode, til standardisering af Tuina-manipulation i eksperimentel forskning og er til stor hjælp for efterfølgende forskning i Tuinas molekylære mekanisme for myopati.

Introduction

Muskelskader er almindelige traumatiske skader i klinisk og dagligdag forårsaget af eksterne slag (kontusioner) eller kronisk overbelastning af muskelfibre (stammer) osv., Hvilket resulterer i muskeldysfunktion og smerte, der endda alvorligt påvirker patientens livskvalitet¹. At starte genoptræning så tidligt som muligt efter en akut belastningsskade er nøglen til at reducere tiden til at vende tilbage til sport² og reducere smerter ^3,4. I moderne vestlig medicin følger klinisk førstehjælp til muskelskader principperne om hvile, is, kompression og højde (RICE) for at stoppe skadelig blødning i muskelvævet⁵ og ikke-steroide antiinflammatoriske lægemidler til at lindre smerter⁶. Opdagelsen af nye terapier som exosomer⁷ og vævsteknik⁸ blev potentielle behandlingsstrategier for skeletmuskelsygdomme, der kompenserede for tidligere farmakologiske behandlingers mangler. Det kan imidlertid også øge behandlingsomkostningerne for patienterne og sætte dem under et enormt økonomisk pres⁹. Derfor anbefales alternative og komplementære terapier til behandling af muskuloskeletale problemer¹⁰. Tuina er meget udbredt klinisk i Kina som en traditionel medicinsk metode og er populær blandt patienter for sin effektivitet og færre bivirkninger. Tuina terapi for muskuloskeletale lidelser kan lindre smerter og forbedre funktionen^11,12,13. Mr. Ding Jifeng, en berømt Shanghai Tuina-udøver, grundlagde Dings rullemetode¹⁴. Det er en unik rulle- og knuseteknik med et stort kraftområde, ensartet og blid kraft og intens penetration.

Forskellige dyremodeller er baseret på forskellige ætiologier. De har fordele og ulemper, og udvælgelsen af korrekte og passende dyremodeller er af stor betydning for grundlæggende eksperimenter, hvilket hjælper med at forstå de cellulære og molekylære signalveje til regenerering og reparation efter skeletmuskelskade for at udvikle nye terapier til behandling af skeletmuskelsygdomme. Kemisk inducerede modeller af muskelskade anvendes i vid udstrækning, med injektioner af skeletmuskulatur, der forårsager myofibernekrose og producerer regenererede områder, der effektivt kan regenerere inden for 2 uger¹⁵. Både notexin og bupivacain kan forårsage muskelskader. Imidlertid kan notexin forårsage mere alvorlig myotoksisk skade på skeletmuskulatur end bupivacain, og naturlig funktionel genopretning er relativt langsommere¹⁶. Lægemiddel intramuskulær sprøjtestøbning tager ikke kun mindre tid, men har også kontrollerede virkninger og omfang af skeletmuskelskader. Denne kvantificerbare kontrol gør vellykket støbning mindre vanskelig^15,17.

Inflammatorisk respons er et essentielt biologisk respons, der er blevet grundigt undersøgt i forbindelse med myopati^18,19. I de tidlige stadier af skeletmuskelskade forstyrrer myofibernekrose lokal muskelhomeostase, og mange inflammatoriske celler infiltrerer skadestedet og udskiller mange proinflammatoriske cytokiner¹⁹. Kreatinkinase (CK) er en traditionel serumbiomarkør til vurdering af skeletmuskelskade. Det mangler imidlertid vævsspecificitet²⁰ og følsomhed²¹, hvilket begrænser dets evne til at vurdere omfanget af lægemiddelinduceret muskelskade og indirekte rapportere omfanget af muskelgendannelse efter skade. Nye biomarkører, herunder fedtsyrebindende protein 3 (FABP3), har for nylig vist relativt høj vævsspecificitet og følsomhed i gnavermodeller af skeletmuskelskade. FABP3 er en familie af bindende proteiner, der primært udtrykkes i hjerte- og skeletmuskelceller og impliceres i fedtsyremetabolisme, transport og signalering²². Derfor valgte vi en kombination af to biomarkører, CK og FABP3, for at vurdere omfanget af notexin-induceret skeletmuskelskade og genopretning efter behandling.

Hos gnavere er musklerne overfladiske, og hudområdet er lille, hvilket også bestemmer, at de forskellige parametre for massage hos gnavere ikke vil være de samme som hos mennesker, såsom i dyreterapi, bør massageterapeuten behandle dem med mindre kraft ved hjælp af Dings rullemetode og må ikke være befordrende for driften af denne teknik på grund af den lille størrelse af det skadede område, hvilket i sidste ende kan føre til en reduktion i effektiviteten af massage. Derfor brugte eksperimentet den rullende massager fremstillet internt, som er i overensstemmelse med egenskaberne ved Dings rullemetode, til at gribe ind og evaluere den terapeutiske virkning af den notexin-inducerede skeletmuskelskademodel hos rotter, hvilket hjælper med at standardisere parametrene for Tuina i eksperimentelle dyreforsøg for dybt at undersøge Tuinas molekylære virkningsmekanisme, en traditionel kinesisk medicin behandlingsmetode, på muskuloskeletale sygdomme.

Protocol

Procedurer, der involverer dyr, er blevet godkendt af Institutional Care and Use Committee ved Hunan University of Chinese Medicine. 1. Montering af rullemassageapparatet Vælg et massageapparat, der består af en gummirulle, gaffelholder, fjeder, grænseplade, justeringsskinne, skrue og akrylhåndtag (figur 1). Sørg for, at gummirullen måler 3 cm lang og 1,6 cm i diameter, fjederen måler 3 cm lang og 0,9 cm i diameter, grænsepladen …

Representative Results

For at observere de morfologiske egenskaber af rotteskeletmuskulatur efter skade blev gastrocnemius-musklen farvet med hæmatoxylin og eosin, og de farvede billeder blev læst med en analysesoftware som beskrevet i protokollen for 8 rotter pr. Gruppe. Hos rotter med gastrocnemius muskelskade induceret af notexin (NTX-gruppe) blev mange muskelceller bristet, atrofisk, nekrotisk og uregelmæssigt arrangeret. Der var også en høj infiltration af neutrofiler og lymfocytter omkring det berørte område (…

Discussion

Her beskrev vi en protokol for Tuina-behandling af skeletmuskelskade hos rotter og analyserede derefter graden af skeletmuskelskade efter behandling for at verificere metodens effektivitet. Især kan rotteskeletmuskelskademodeller, herunder men ikke begrænset til lægemiddelinduktion (notexin, bupivacain)16, stump kontusion ²⁶, knus 27 og iskæmi-reperfusion²⁸, interveneres med Tuina. Gennem HE-farvning for at observere de hi…

Materials

1 mL syringe	JIANGXI FENGLIN	20220521
1.5 microtubes	Servicebio	EP-150X-J
15 mL centrifuge tube	Servicebio	EP-1501-J
30G needle	CONPUVON	220318
5 mL blood collection tube	Servicebio	QX0023
Acrylic handle	Guangdong Guangxingwang Plastic Materials Co., Ltd	65643645
Adjustment splint	CREROMEM	20220729
Cotton Swab	INOHV	22080215
Enzyme-labeled Instrument	Rayto	RT-6100
Ethanol	INOHV	211106
Fork holder	Yongkang Kangzhe Health Technology Co., Ltd	JL001
Hair removal cream	Veet, France	LOTC190922002
Hematoxylin dyeing solution set	Wuhan Google Biotech	G1005
Imaging system	Nikon, Japan	Nikon DS-U3
IODOPHOR disfecting solution	Hale&Hearty	20221205
Light microscope	Nikon, Japan	Nikon Eclipse E100
Limit baffle	CREROMEM	20220724
Notexin	Latoxan S.A.S.	L8104-100UG
Pentobarbital sodium	Merck KGaA	P3761
Rat creatine kinase (CK) ELISA kit	LunChangShuoBiotech	YD-35237
Rat fatty acid-binding protein 3 (FABP3) ELISA kit	LunChangShuoBiotech	YD-35730
Rubber roller	Hebei Mgkui Chemical Technology Co.,Ltd	202207
Screw	Weiyan Hardware	B05Z122
Sprague Dawley rats	Hunan Slake Kingda Laboratory Animal Co.	SYXK2019-0009
Spring	Bingzhang Hardware	TH001
Surgical blade	Covetrus	#23
Weigh controller	Iyoys	HY-XSQ