Crioconservazione di cellule epiteliali pigmentate retiniche derivate da cellule staminali embrionali umane allo stadio ottimale

Xinyue Bai; Ting Zhang; Xinyue Zhu; Xianyu Huang; Haiyun Liu; Xiaoyan Ding; Mei Jiang; Xiaodong Sun

doi:10.3791/65888

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Articolo metodologico

Crioconservazione di cellule epiteliali pigmentate retiniche derivate da cellule staminali embrionali umane allo stadio ottimale

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DOI:

10.3791/65888

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3 novembre 2023

Xinyue Bai^*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷ , Ting Zhang^*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷ , Xinyue Zhu¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷ , Xianyu Huang¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷ , Haiyun Liu¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷ , Xiaoyan Ding⁸ , Mei Jiang¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷ , Xiaodong Sun¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷

¹Department of Ophthalmology, Shanghai General Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, ²National Clinical Research Center for Eye Diseases, ³Shanghai Clinical Research Center for Eye Diseases, ⁴Shanghai Key Clinical Specialty, ⁵Shanghai Key Laboratory of Ocular Fundus Diseases, ⁶Shanghai Engineering Center for Visual Science and Photomedicine, ⁷Shanghai Engineering Center for Precise Diagnosis and Treatment of Eye Diseases, ⁸Stem Cell Core Facility, CAS Center for Excellence in Molecular Cell Science, Chinese Academy of Sciences

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Questo studio fornisce un protocollo dettagliato per l'efficiente crioconservazione delle cellule epiteliali pigmentate retiniche derivate da cellule staminali umane.

Abstract

Le cellule epiteliali pigmentate retiniche (RPE) derivate da cellule staminali embrionali umane (hESC) sono fonti cellulari superiori per la terapia di sostituzione cellulare in individui con malattie degenerative della retina; Tuttavia, gli studi sulla conservazione stabile e sicura di queste cellule terapeutiche sono scarsi. La vitalità cellulare altamente variabile e il recupero funzionale delle cellule RPE dopo la crioconservazione sono i problemi più comunemente riscontrati. Nel presente protocollo, abbiamo mirato a ottenere il miglior tasso di recupero cellulare dopo lo scongelamento selezionando la fase cellulare ottimale per il congelamento in base alle condizioni sperimentali originali. Le cellule sono state congelate nella fase esponenziale determinata utilizzando il saggio di marcatura della 5-etinil-2'-deossiuridina, che ha migliorato la vitalità cellulare e il tasso di recupero dopo lo scongelamento. Cellule stabili e funzionali sono state ottenute poco dopo lo scongelamento, indipendentemente da un lungo processo di differenziazione. I metodi qui descritti consentono la conservazione e lo scongelamento semplici, efficienti ed economici delle cellule RPE derivate da hESC. Sebbene questo protocollo si concentri sulle cellule RPE, questa strategia di congelamento può essere applicata a molti altri tipi di cellule differenziate.

Introduzione

L'epitelio pigmentato retinico (RPE) è un monostrato pigmentato di cellule necessario per mantenere la corretta funzione della retina¹. La disfunzione e la morte dell'EPR sono strettamente associate a molte malattie degenerative della retina, tra cui la degenerazione maculare legata all'età, la retinite pigmentosa e la malattia di Stargardt ^2,3. La terapia sostitutiva dell'EPR è uno dei regimi terapeutici più promettenti per queste malattie 4,5,6,7. Una fornit....