Questo protocollo fornisce informazioni tecniche per la ricostruzione dei vasi utilizzando la tecnica della cuffia nel trapianto di fegato ortotopico di topo.
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Articolo metodologico
Ricostruzione vascolare con la tecnica della cuffia nel trapianto di fegato ortotopico di topo
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il trapianto ortotopico di fegato di topo è una metodologia efficace per studiare i meccanismi alla base dell'ischemia epatica e del danno da riperfusione. Tuttavia, le sfide tecniche rappresentano un ostacolo all'utilizzo di questo prezioso modello sperimentale e alla trasmissione di queste competenze alla generazione successiva. L'aspetto più impegnativo di questa procedura è la ricostruzione vascolare, compresa la vena porta (PV), la vena cava inferiore infraepatica (IHIVC) e la vena cava inferiore sopraepatica. L'uso di bracciali in plastica, piuttosto che di suture, consente una ricostruzione PV e IHIVC più agevole. I vasi vengono ricostruiti attaccando una cuffia costituita da un catetere endovenoso alla punta del vaso dell'innesto e interponendo la cuffia nel vaso ricevente. I due aspetti più cruciali sono la corretta visualizzazione del lume interno del vaso ed evitare l'uso di una forza eccessiva. Il nostro obiettivo è fornire una panoramica tecnica delle ricostruzioni vascolari utilizzando la tecnica della cuffia nella chirurgia del ricevente. Questi suggerimenti tecnici per la tecnica del bracciale dovrebbero aiutare i microchirurghi a facilitare la ricostruzione vascolare e far progredire la loro ricerca.
Introduzione
Il trapianto di fegato ortotopico di topo (MOLT) è un metodo sperimentale efficace riportato per la prima volta nel 19911. Questo modello sperimentale, che utilizza topi geneticamente modificati e vari reagenti di ricerca, ha svolto un ruolo fondamentale nello studio delle lesioni da ischemia calda e fredda e da riperfusione. Tuttavia, l'elevata complessità tecnica del modello ha ostacolato lo sviluppo della medicina di base per il trapianto di fegato2. La MOLT prevede tre fasi principali: (1) recupero del fegato dal topo donatore, (2) intervento chirurgico sul retro e (3) impianto del fegato nel ricevente. Tra queste pr....
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Protocollo
Il protocollo sperimentale è stato approvato dal Comitato per la sperimentazione animale dell'Università di Kyoto. Lo studio ha utilizzato topi C57BL/6, di età superiore a 10 settimane e di peso compreso tra 25 g e 30 g, ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali). Tutti gli animali sono stati anestetizzati con isoflurano al 2,5% (seguendo protocolli approvati istituzionalmente), mantenuti in specifiche condizioni prive di agenti patogeni e tutte le procedure sperimentali sono state condotte in conformità con i regolamenti sulla sperimentazione animale dell'Università di Kyoto. Gli strumenti appropriati utilizzati per lo studio sono....
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Risultati
La ricostruzione PV ha successo quando, dopo aver sbloccato la vena porta, non c'è tortuosità e il fegato è uniformemente perfuso. Il tempo anepatico deve essere inferiore a 20 minuti, poiché i tempi anepatici superiori a 25 minuti aumentano il rischio di mortalità dei topi. La ricostruzione IHIVC è considerata efficace se non vi è rigurgito di sangue dall'innesto.
La conservazione dell'innesto a basse temperature per 1 ora utilizzando una soluzione di conservazione dell'organo determina un li.......
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Discussione
L'apprendimento della ricostruzione vascolare è l'aspetto più impegnativo per ottenere una MUT di successo. La qualità del bracciale influenza in modo significativo la difficoltà della ricostruzione, date le piccole dimensioni dei topi5. Questo articolo fornisce un protocollo dettagliato per la preparazione, il fissaggio e la ricostruzione della cuffia.
Sebbene non ci siano grandi differenze rispetto ai rapporti precedenti per quanto riguarda la preparazione e la connes.......
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Dichiarazioni
Nessun autore ha conflitti di interesse da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato dalla ricerca di base JST 2022 (The Japanese Society for Transplantation).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Catetere endovenoso da 16 G | TERUMO | SR-FF2032 | Cuffia IHIVC |
| Catetere endovenoso da 20 G | TERUMO | SR-FF1651 | Cuffia PV |
| 8-0 treccia di seta | Natsume Seisakusho | CR9-80B2 | 8-0 |
| seta Belzer UW Soluzione per celle frigorifere | Astellas | Liquido per la conservazione degli organi | |
| Bulldog clamp | B BRAUN | FB329R | Bulldog clamp |
| C57BL/6 topi | Oriental Bio Service | ||
| Soluzione per inalazione di isoflurano | Viatris | Anesthesic | |
| Micro Punte smussate 0,1 mm x 0,06 mm | FST | 11253-20 | Micropinze diritte |
| Micro Serrefine Applicator Clamp con blocco | FST | 18056-14 | Applicatore di clip per vasi |
| Micro Serrefines | F.S.T | 18055-4 | Clip per vaso |
| n. 11 Lame di ricambio | Rasoio di sicurezza FEATHER | 11 | lame |
| Forbice oftalmica, manico rotondo | B BRAUN | FD103R | Microforbice |
| Contenitore di forma rettangolare in plastica | Daiso | 10 cm di lunghezza, 15 cm di larghezza e 6 cm di altezza | |
| Punte SuperGrip | F.S.T | 00649-11 | Micropinze curve |
| SZX7 | Olympus | SZX7 | Microscopio |
| Morsa | 00505351 | Uno strumento meccanico per fissare le pinze Pean sul tavolo |
Riferimenti
- Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
- Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Na....
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Ristampe e permessi
