Onderzoek naar orale Candida-infectie bij patiënten met het primaire syndroom van Sjögren
Summary
Hier presenteren we een protocol voor het onderzoek van orale Candida-infectie bij patiënten met het primaire syndroom van Sjögren, dat kan worden gebruikt voor tijdige behandeling en daarna om gerelateerde complicaties te voorkomen.
Abstract
Het primaire syndroom van Sjögren (pSS) is een auto-immuunziekte die wordt gekenmerkt door symptomen zoals een droge mond, droge ogen en andere systematische symptomen. Vanwege de hyposalivatie die pSS-patiënten ervaren, treedt vaak orale dysbacteriose op. Een veel voorkomende complicatie van pSS is de orale Candida-infectie . In dit artikel beschrijven de auteurs systematische methoden die orale Candida-infectie effectief kunnen diagnosticeren en de Candida-stammen kunnen identificeren met behulp van speeksel, orale slijmvliesuitstrijkjes of mondwater van pSS-patiënten. De Sabouraud’s Dextrose Agar (SDA), hyfvormige formatietest, kaliumhydroxide (KOH) uitstrijkje en calcofluorwit (CFW) kleuringstest worden gebruikt voor de diagnose van orale Candida-infectie . Een Candida diagnostische agar wordt gebruikt voor de identificatie van Candida-stammen . Ten slotte worden antischimmelgevoeligheidstests gebruikt om de juiste behandeling met antischimmelgeneesmiddelen te bepalen. Deze gestandaardiseerde methode kan de diagnose, behandeling en toekomstig onderzoek van pSS-gerelateerde orale Candida-infecties verbeteren. Vroege diagnose, met behulp van deze methode, kan ook complicaties voorkomen die optreden als gevolg van vertraging bij het ontvangen van de juiste behandeling.
Introduction
Candidiasis wordt veroorzaakt door Candida spp., dit zijn opportunistische ziekteverwekkers. Veel voorkomende stammen zijn Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis en Candida dubliniensis1. Opportunistische infecties veroorzaakt door Candida spp. omvatten oppervlakkige Candida-infecties en invasieve candidiasis. Invasieve candidiasis komt vooral voor bij immuungecompromitteerde personen; bij patiënten met het verworven immunodeficiëntiesyndroom (AIDS) kan invasieve candidiasis bijvoorbeeld de kwaliteit van leven of zelfs de levensduur aanzienlijk bedreigen2. Oppervlakkige Candida-infectie , zoals mucocutane candidiasis, komt vaker voor bij patiënten3.
Orale candidiasis, een oppervlakkige Candida-infectie , is de meest voorkomende menselijke schimmelinfectie. Candida albicans is een normale commensale van de mond; het dragerschapspercentage van Candida spp. is gerapporteerd tussen 20% en 75% in de algemene bevolking zonder enige symptomen4. Overgroei van Candida kan leiden tot lokaal ongemak bij patiënten, zoals de veranderde smaak van het gevoel, een branderig gevoel in de mond, dysfagie als gevolg van slechte voeding, vertraagd herstel en langdurig verblijf in het ziekenhuis. Langdurige orale candidiasis kan leiden tot ernstige invasieve candidiasis, met aanzienlijke morbiditeit enmortaliteit tot gevolg. Orale candidiasis kan ook het risico op mondkanker verhogen. Een verminderde speekselklierfunctie is een van de risicofactoren voor orale candidiasis6. De initiatie van infectie is de hechting van Candida aan epitheelcelwanden. Dit wordt gevolgd door de proliferatie en filamentatie van Candida en de vorming en rijping van biofilm7. Biofilms zijn uiterst moeilijk uit te roeien en zijn resistent tegen conventionele antischimmelbehandeling, waardoor klinische behandeling een uitdaging vormt voor biofilm-geassocieerde orale Candida-infectie 7.
Het primaire syndroom van Sjögren (pSS) is een auto-immuunziekte die wordt gekenmerkt door een droge mond, droge ogen en andere systematische symptomen. Een droge mond is het meest voorkomende symptoom van pSS. Speeksel heeft belangrijke fysiologische antischimmelfuncties. Aan de ene kant kan het de mond verdunnen en schuren en vervolgens organismen uit het slijmvlies verwijderen. Aan de andere kant bevat speeksel antimicrobiële eiwitten, zoals lactoferrine, sialoperoxidase, lysozym, histidinerijke polypeptiden en specifieke anti-candida-antilichamen, die kunnen interageren met het mondslijmvlies en de overgroei van Candida6 kunnen voorkomen. De verminderde speekselvloed kan pSS-patiënten vatbaar maken voor orale candidiasis. Uit een observationele cross-sectionele studie bij 61 pSS-patiënten bleek dat 13,1% van de pSS-patiënten orale tekenen van candidiasis vertoonde en dat er een significant en negatief gecorreleerd bleek te zijn met de niveaus van niet-gestimuleerd volledig speeksel (UWS) en gestimuleerd volledig speeksel (SWS)9.
De methoden die in dit manuscript zijn geïntroduceerd, kunnen orale Candida-infectie identificeren op basis van gekarakteriseerde morfologische kenmerken (bijv. de hyfen en gistcellen) in een direct uitstrijkje of na het kweken10. De stamidentificatie van de Candida met behulp van een Candida diagnostische agar is gebaseerd op de vorming van verschillend gekleurde kolonies met een gevarieerde morfologie, die het resultaat zijn van de splitsing van chromogene substraten door soortspecifieke enzymen11. In dit manuscript worden systematische methoden voor het detecteren van orale Candida-infectie geïntroduceerd, waaronder traditionele orale Candida-cultuur en snel onderzoek door middel van kaliumhydroxide (KOH) uitstrijkje en calcofluorwit (CFW) kleuringstest10. Daarnaast is de antischimmelgevoeligheidstest, die als leidraad kan dienen voor de klinische orale behandeling van Candida-infecties . In feitelijke situaties is het niet nodig om alle in dit manuscript geïntroduceerde methoden uit te voeren; de orale Candida-detectiemethode (n) kunnen worden geselecteerd op basis van het doel. Het onderzoek naar orale Candida-infectie en de bepaling van Candida-stammen bij pSS-patiënten komen niet alleen de behandeling van de ziekte ten goede, maar helpen ook bij het beoordelen van de karakterisering van orale candidiasis en de soortprofielen.
Protocol
Representative Results
Discussion
In het huidige manuscript bieden we een reeks systematische, eenvoudige en haalbare methoden voor het detecteren van orale Candida-infecties , het identificeren van Candida-stammen en het testen van de antischimmelgevoeligheid van veelgebruikte geneesmiddelen bij patiënten met pSS.
In de praktijk zijn niet alle methoden die in dit manuscript worden geïntroduceerd nodig. De orale Candida-detectiemethode (n) kunnen worden gekozen op basis van het specifieke doel. KO…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit onderzoek werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (82201084), China Postdoctoral Science Foundation (2022M722232), Beijing Postdoctoral Research Foundation (2023-ZZ-020), Miaopu Project van Beijing Tiantan Hospital, Capital Medical University (2023MP10) en General Research Fund, Hong Kong Research Grants Council (27111820 en 17116521).
Materials
| 0.22 µm Syringe Filter | MERCK | SLGV004SL | |
| 1.5 mL Centrifuge Tube | axygen | MCT-150-C-S | |
| 10 cm Microbiological Culture Dishes | Jet Bio-Filtration Co. Ltd | TCD000100 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | Jet Bio-Filtration Co., Ltd | CFT011150 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | Corning | 430290 | |
| 96-well Microplates | Corning | 3599 | |
| API 0.85% NaCl ampule | BIOMERIEUX | 20070 | |
| Calcofluor White Stain | Sigma-Aldrich | 18909-100ML-F | |
| CHROMagar Candida | CHROMagar | P002860 | Candida diagnostic agar |
| D(+)-Glucose Monohydrate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10010518 | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26170035 | |
| McFarland Standards Kit | BIOMERIEUX | 70900 | |
| Nunc precision molded loops | ThermoFisher Scientific | 254399 | |
| Phosphate Buffered Saline | Gibco | C10010500BT | |
| Potassium Hydroxide | Aladdin | P112284-500g | |
| PowerSoil DNA Isolation Kit | MO BIO | 12888-50 | |
| RPMI 1640 Medium | Gibco | 11875119 | |
| Sabourand's Agar Medium | Solarbio | S9710 | |
| Yeast Nitrogen Base Without Amino acids | Solarbio | Y8040 | |
| Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution) | BIOMERIEUX | 14204 |
Riferimenti
- Wang, X., et al. Microbiota dysbiosis in primary Sjögren’s syndrome and the ameliorative effect of hydroxychloroquine. Cell Rep. 40 (11), 111352 (2022).
- Humphrey, S. P., Williamson, R. T. A review of saliva: normal composition, flow, and function. J Prosthet Dent. 85 (2), 162-169 (2001).
- Marsh, P. D., Do, T., Beighton, D., Devine, D. A. Influence of saliva on the oral microbiota. Periodontol 2000. 70 (1), 80-92 (2016).
- Vila, T., Rizk, A. M., Sultan, A. S., Jabra-Rizk, M. A. The power of saliva: Antimicrobial and beyond. PLoS Pathog. 15 (11), e1008058 (2019).
- Serrano, J., et al. Risk factors related to oral candidiasis in patients with primary Sjögren’s syndrome. Med Oral Patol Oral Cir Bucal. 25 (5), e700-e705 (2020).
- Napeñas, J. J., Rouleau, T. S. Oral complications of Sjögren’s syndrome. Oral Maxillofac Surg Clin North Am. 26 (1), 55-62 (2014).
- Mathews, S. A., Kurien, B. T., Scofield, R. H. Oral manifestations of Sjögren’s syndrome. J Dent Res. 87 (4), 308-318 (2008).
- Leung, K. C. M., McMillan, A. S., Cheung, B. P. K., Leung, W. K. Sjögren’s syndrome sufferers have increased oral yeast levels despite regular dental care. Oral Dis. 14 (2), 163-173 (2008).
- Lundstrom, I. M., Lindstrom, F. D. Subjective and clinical oral symptoms in patients with primary Sjögren’s syndrome. Clin Exp Rheumatol. 13 (6), 725-731 (1995).
- Alam, M. Z., et al. Candida identification: a journey from conventional to molecular methods in medical mycology. World J Microbiol Biotechnol. 30 (5), 1437-1451 (2014).
- Bauters, T. G., Nelis, H. J. Comparison of chromogenic and fluorogenic membrane filtration methods for detection of four Candida species. J Clin Microbiol. 40 (5), 1838-1839 (2002).
- Soto-Rojas, A. E., Villa, A. R., Sifuentes-Osornio, J., Alarcón-Segovia, D., Kraus, A. Oral candidiasis and Sjögren’s syndrome. J Rheumatol. 25 (5), 911-915 (1998).
- Gilchrist, J. E., Campbell, J. E., Donnelly, C. B., Peeler, J. T., Delaney, J. M. Spiral plate method for bacterial determination. Appl Microbiol. 25 (2), 244-252 (1973).
- Biomerieux. ATB FUNGUS 3 Sensitivity test for yeast-like fungi. REF 14204. Biomerieux. , (2014).
- Zhang, L., et al. The widely used ATB FUNGUS 3 automated readings in China and its misleading high MICs of Candida spp. to Azoles: Challenges for developing countries’ clinical microbiology labs. PLoS One. 9 (12), e114004 (2014).
- Hu, L., Zhou, P., Zhao, W., Hua, H., Yan, Z. Fluorescence staining vs. routine KOH smear for rapid diagnosis of oral candidiasis-A diagnostic test. Oral Dis. 26 (5), 941-947 (2020).
- Samaranayake, L. P. Candida krusei infections and fluconazole therapy. Hong Kong Med J. 3 (3), 312-314 (1997).
- Lee, Y., Puumala, E., Robbins, N., Cowen, L. E. Antifungal drug resistance: Molecular mechanisms in Candida albicans and beyond. Chem Rev. 121 (6), 3390-3411 (2021).
- Rihab, B., Lina, E. H., Noémie, S. T., Jean, S., Marjolaine, G. The experience of dry mouth and screening for Sjogren’s syndrome by the dentist: patient-reported experiences. BMC Oral Health. 23 (1), 1010 (2023).
- Panpetch, W., et al. Oral Candida administration in a Clostridium difficile mouse model worsens disease severity but is attenuated by Bifidobacterium. PLoS One. 14 (1), e210798 (2019).
- Alwaily, E. R., Abood, M. S., Al Uobody, R. M. Diagnosis of oral candidiasis in patients under 12 years: 18S rRNA as a marker of molecular characterization of Candida tropicalis. Arch Razi Inst. 78 (1), 475-483 (2023).
- Chen, C. L., et al. Candida infection as an early sign of subsequent Sjögren’s syndrome: A population-based matched cohort study. Front Med (Lausanne). 8, 796324 (2022).
