Untersuchung der oralen Candida-Infektion bei Patienten mit primärem Sjögren-Syndrom
Summary
Im Folgenden stellen wir ein Protokoll zur Untersuchung der oralen Candida-Infektion bei Patienten mit primärem Sjögren-Syndrom vor, das für eine rechtzeitige Behandlung und danach zur Vermeidung damit verbundener Komplikationen verwendet werden kann.
Abstract
Das primäre Sjögren-Syndrom (pSS) ist eine Autoimmunerkrankung, die durch Symptome wie Mundtrockenheit, trockene Augen und andere systematische Symptome gekennzeichnet ist. Aufgrund der Hyposalivation, die bei pSS-Patienten auftritt, tritt häufig eine orale Dysbakteriose auf. Eine häufige Komplikation der pSS ist die orale Candida-Infektion . In diesem Artikel beschreiben die Autoren systematische Methoden, mit denen eine orale Candida-Infektion effektiv diagnostiziert und die Candida-Stämme anhand von Speichel, Mundschleimhautabstrichen oder Mundwasser von pSS-Patienten identifiziert werden können. Der Sabouraud-Dextrose-Agar (SDA), der Hyphenbildungs-Assay, der Kaliumhydroxid (KOH)-Abstrich und der Calcofluorweiß-Färbetest (CFW) werden für die Diagnose einer oralen Candida-Infektion verwendet. Ein Candida-Diagnoseagar wird zur Identifizierung von Candida-Stämmen verwendet. Schließlich werden Empfindlichkeitstests auf Antimykotika verwendet, um eine geeignete antimykotische medikamentöse Behandlung zu bestimmen. Diese standardisierte Methode kann die Diagnose, Behandlung und zukünftige Erforschung von pSS-bedingten oralen Candida-Infektionen verbessern. Eine frühzeitige Diagnose mit dieser Methode kann auch Komplikationen verhindern, die durch eine Verzögerung bei der angemessenen Behandlung entstehen.
Introduction
Candidiasis wird durch Candida spp. verursacht, die opportunistische Erreger sind. Zu den häufigen Stämmen gehören Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis und Candida dubliniensis1. Zu den opportunistischen Infektionen, die durch Candida spp. verursacht werden, gehören oberflächliche Candida-Infektionen und invasive Candidiasis. Invasive Candidiasis tritt hauptsächlich bei immungeschwächten Personen auf; So kann beispielsweise bei Patienten mit erworbenem Immunschwächesyndrom (AIDS) eine invasive Candidiasis die Lebensqualität oder sogar die Lebenserwartung erheblich gefährden2. Oberflächliche Candida-Infektionen , wie z. B. mukokutane Candidiasis, treten häufiger bei Patientenauf 3.
Die orale Candidiasis, eine oberflächliche Candida-Infektion , ist die häufigste Pilzinfektion beim Menschen. Candida albicans ist ein normaler Kommensal des Mundes; Es wurde berichtet, dass die Übertragungsrate von Candida spp. in der Allgemeinbevölkerung ohne Symptome zwischen 20 % und 75 % liegt4. Ein übermäßiges Wachstum von Candida kann bei Patienten zu lokalen Beschwerden führen, wie z. B. verändertem Empfinden, Brennen im Mund, Dysphagie aufgrund schlechter Ernährung, verzögerter Genesung und längerem Krankenhausaufenthalt. Eine langfristige orale Candidiasis kann zu einer schweren invasiven Candidiasis führen, die zu einer signifikanten Morbidität und Mortalität führt5. Orale Candidiasis kann auch das Risiko für Mundkrebs erhöhen5. Eine gestörte Speicheldrüsenfunktion gehört zu den Risikofaktoren für orale Candidiasis6. Der Beginn der Infektion ist die Adhäsion von Candida an den epithelialen Zellwänden. Es folgt die Proliferation und Filamentierung von Candida sowie die Bildung und Reifung des Biofilms7. Biofilme sind extrem schwer zu beseitigen und resistent gegen konventionelle antimykotische Behandlungen, was die klinische Behandlung zu einer Herausforderung für die Biofilm-assoziierte orale Candida-Infektion macht7.
Das primäre Sjögren-Syndrom (pSS) ist eine Autoimmunerkrankung, die durch Mundtrockenheit, trockene Augen und andere systematische Symptome gekennzeichnetist 8. Mundtrockenheit ist das häufigste Symptom der pSS. Speichel hat wichtige physiologische antimykotische Funktionen. Einerseits kann es den Mund verdünnen und scheuern und danach Organismen aus der Schleimhaut entfernen. Auf der anderen Seite enthält der Speichel antimikrobielle Proteine wie Lactoferrin, Sialoperoxidase, Lysozym, Histidin-reiche Polypeptide und spezifische Anti-Candida-Antikörper, die mit der Mundschleimhaut interagieren und das übermäßige Wachstum von Candidaverhindern können 6. Der verminderte Speichelfluss kann pSS-Patienten für eine orale Candidiasis prädisponieren. Eine beobachtende Querschnittsstudie, die an 61 pSS-Patienten durchgeführt wurde, ergab, dass 13,1 % der pSS-Patienten orale Anzeichen einer Candidiasis aufwiesen und eine koloniebildende Einheit (KBE)/ml von Candida albicans signifikant und negativ mit dem Gehalt an unstimuliertem Ganzspeichel (UWS) und stimuliertem Ganzspeichel (SWS) korrelierte9.
Die in diesem Manuskript vorgestellten Methoden können eine orale Candida-Infektion anhand charakterisierter morphologischer Merkmale (z. B. Hyphen und Hefezellen) im direkten Abstrich oder nach Kultivierung10 identifizieren. Die Stammbestimmung der Candida mittels eines Candida-Diagnoseagars beruht auf der Bildung verschiedenfarbiger Kolonien mit unterschiedlicher Morphologie, die sich aus der Spaltung chromogener Substrate durch artspezifische Enzymeergeben 11. In diesem Manuskript werden systematische Methoden zum Nachweis einer oralen Candida-Infektion vorgestellt, einschließlich der traditionellen oralen Candida-Kultur und der Schnelluntersuchung durch Kaliumhydroxid (KOH)-Abstrich und Calcofluorweiß (CFW)-Färbeassay10. Darüber hinaus wurde der antimykotische Empfindlichkeitstest eingeführt, der die klinische Behandlung einer Candida-Infektion leiten kann. In der Praxis ist es nicht notwendig, alle in diesem Manuskript vorgestellten Methoden durchzuführen; Die orale Candida-Nachweismethode (n) kann je nach Verwendungszweck ausgewählt werden. Die Untersuchung der oralen Candida-Infektion und die Bestimmung von Candida-Stämmen bei pSS-Patienten kommen nicht nur der Krankheitsbehandlung zugute, sondern helfen auch bei der Beurteilung der Charakterisierung der oralen Candidiasis und der Speziesprofile.
Protocol
Representative Results
Discussion
Im vorliegenden Manuskript stellen wir eine Reihe von systematischen, einfachen und praktikablen Methoden zum Nachweis oraler Candida-Infektionen , zur Identifizierung von Candida-Stämmen und zum Testen der antimykotischen Empfindlichkeit häufig verwendeter Arzneimittel bei Patienten mit pSS zur Verfügung.
In der Praxis sind nicht alle Methoden, die in dieser Handschrift vorgestellt werden, notwendig. Die orale(n) Candida-Nachweismethode (n) kann je nach Verwendu…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Forschung wurde unterstützt von der National Natural Science Foundation of China (82201084), der China Postdoctoral Science Foundation (2022M722232), der Beijing Postdoctoral Research Foundation (2023-ZZ-020), dem Miaopu Project des Beijing Tiantan Hospital, der Capital Medical University (2023MP10) und dem General Research Fund, Hong Kong Research Grants Council (27111820 und 17116521).
Materials
| 0.22 µm Syringe Filter | MERCK | SLGV004SL | |
| 1.5 mL Centrifuge Tube | axygen | MCT-150-C-S | |
| 10 cm Microbiological Culture Dishes | Jet Bio-Filtration Co. Ltd | TCD000100 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | Jet Bio-Filtration Co., Ltd | CFT011150 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | Corning | 430290 | |
| 96-well Microplates | Corning | 3599 | |
| API 0.85% NaCl ampule | BIOMERIEUX | 20070 | |
| Calcofluor White Stain | Sigma-Aldrich | 18909-100ML-F | |
| CHROMagar Candida | CHROMagar | P002860 | Candida diagnostic agar |
| D(+)-Glucose Monohydrate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10010518 | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26170035 | |
| McFarland Standards Kit | BIOMERIEUX | 70900 | |
| Nunc precision molded loops | ThermoFisher Scientific | 254399 | |
| Phosphate Buffered Saline | Gibco | C10010500BT | |
| Potassium Hydroxide | Aladdin | P112284-500g | |
| PowerSoil DNA Isolation Kit | MO BIO | 12888-50 | |
| RPMI 1640 Medium | Gibco | 11875119 | |
| Sabourand's Agar Medium | Solarbio | S9710 | |
| Yeast Nitrogen Base Without Amino acids | Solarbio | Y8040 | |
| Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution) | BIOMERIEUX | 14204 |
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