Tecniche per il campionamento rapido di sei organi cruciali in Xenopus adulto

Sommario

Questo articolo presenta una guida per il campionamento di sei organi significativi e diversi in Xenopus adulto a cui è possibile accedere rapidamente e facilmente: il ventricolo cardiaco, il lobo del fegato, il pancreas, i corpi adiposi, i reni accoppiati e la pelle.

Abstract

Xenopus è stato un potente organismo modello per comprendere lo sviluppo e le malattie dei vertebrati per oltre cento anni. Mentre le tecniche sperimentali di analisi e dissezione dell'embrione sono state ben documentate, le descrizioni delle strutture e degli organi di Xenopus adulto, insieme alle tecniche per lavorare con gli adulti, non sono state aggiornate per prendere in considerazione i requisiti di approcci moderni come la proteomica quantitativa e la trascrittomica a singola cellula. Le prospettive gene-centrici e del tipo cellulare richiedono osservazioni contrastanti negli stadi embrionali con quelle nei tessuti adulti. Gli organi della larva subiscono cambiamenti significativi nella loro struttura complessiva, morfologia e posizione anatomica lungo tutta la transizione larvale verso l'adulto, in particolare durante il rimodellamento della metamorfosi massiva. Stabilire standard solidi per l'identificazione e la dissezione degli organi è fondamentale per garantire che i set di dati risultanti dagli studi eseguiti in diversi laboratori possano essere coerenti. Il presente protocollo identifica sei degli organi dello Xenopus adulto, dimostrando i metodi per la dissezione e il campionamento del ventricolo cardiaco, del fegato, del corpo adiposo, del pancreas, del rene accoppiato e della pelle dello Xenopus adulto. A seconda dei metodi di conservazione, gli organi sezionati possono essere utilizzati per la proteomica quantitativa, la trascrittomica di singole cellule/nuclei, l'ibridazione in situ , l'immunoistochimica, l'istologia, ecc. Questo protocollo mira a standardizzare il campionamento dei tessuti e a facilitare le indagini multi-laboratorio dei sistemi di organi adulti.

Introduzione

Sebbene sia disponibile la "dissezione digitale di Xenopus adulto" ¹, il campionamento replicabile di organi e tessuti di Xenopus adulto rimane impegnativo senza le istruzioni dettagliate disponibili per altri modelli adulti (ad es. topi ^2,3,4). Questo articolo mira a fornire una guida chiara per un campionamento accurato e replicabile degli organi di Xenopus adulti, simile a quello attualmente disponibile per le loro larve⁵. L'accento è posto sulla facilità di completamento per mantenere la massima fr....

Protocollo

Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti in conformità con le norme e i regolamenti della Harvard Medical School IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee) (IS 00001365_3). I risultati rappresentativi sono mostrati sia per un maschio adulto di albino perfuso che non perfuso, Xenopus laevis.

1. Preparazione sperimentale

NOTA: Se si segue il protocollo di perfusione⁸ prima del campionamento, andare al passaggio 2.2.

1. Assicurarsi che l'istituto di ricerca abbia approvato la tecnica di eutanasia descritta nel presente protocollo.
2. Preparar....

Risultati

Utilizzando le Figure 1 e 20 e seguendo tutti i passaggi di questo protocollo, il ventricolo cardiaco, il lobo sinistro del fegato, il pancreas, i corpi adiposi sinistri, i reni accoppiati e un lembo di pelle sono stati asportati in modo pulito entro un'ora dall'eutanasia. Entro questo periodo, i campioni vengono risciacquati e tagliati in modo che appaiano, come mostrato nella Figura 21.

Discussione

Poiché questo protocollo mira a massimizzare la freschezza, alcuni campioni possono includere tessuti indesiderati. Ad esempio, il dotto epatopancreatico e alcuni mesenteri vengono campionati con il pancreas e alcuni tessuti peritoneali, ghiandole surrenali e ureteri saranno sempre campionati con i reni accoppiati.  Se la freschezza non è un problema, è possibile ottenere un campionamento più preciso utilizzando tecniche modificate.

L'aspetto e la posizione degli organi sono comparabili tra i .......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
5x Lente d'ingrandimento con luce a LED e supporto	amazon.com	B08QJ6J8P1	luce non deve produrre calore
Pipette di trasferimento monouso	VWR	414004-036
Pinze da dissezione a punta fine	Fisher Scinetific	08-875
Forbici da dissezione affilate piont, diritte da 6,5"	VWR	76457-374
Vassoio di dissezione	Fisher Scinetific	14-370-284	sono un'alternativa accettabile
contenitore per eutanasia	US Plastic	Articolo  2860	contenitori opachi alternativi accettabili
Coperchio del contenitore per eutanasia	US Plastic	Articolo  3047
Forbici per iridectomia 6 "	vwr	470018-938	forbici per iride sono un'alternativa accettabile
MS-222: Sincaina (precedentemente tricaina)	Pentair AES	TRS1
PBS 1x	Corning	21-040-CV
Bicarbonato di sodio, polvere, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Pinze per campioni, seghettato	VWR	82027-442
Perni a T per la dissezione	di Fisher Scinetific	S99385

I fogli di polistirolo le