È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.

Articolo metodologico

Una tecnica di iniezione intraperitoneale nel pesce zebra adulto che riduce al minimo i danni al corpo e la mortalità associata

4K visualizzazioni

⸱

DOI:

10.3791/66500

⸱

29 marzo 2024

 ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Viene descritto un nuovo metodo di iniezione intraperitoneale (IP) nel pesce zebra adulto. Quando si maneggiano composti tossici come la doxorubicina, questa procedura è più efficace dei due metodi IP precedentemente riportati. La tecnica è progettata per essere facilmente adottata da ricercatori con esperienza limitata nel modello del pesce zebra.

Abstract

Il pesce zebra adulto (Danio rerio), che è geneticamente accessibile, viene impiegato come prezioso modello di vertebrato per studiare disturbi umani come la cardiomiopatia. L'iniezione intraperitoneale (IP) è un metodo importante che fornisce composti all'organismo per testare gli effetti terapeutici o generare modelli di malattia come la cardiomiopatia indotta da doxorubicina (DIC). Attualmente, esistono due metodi di iniezione IP. Entrambi i metodi hanno limitazioni quando si maneggiano composti tossici come la doxorubicina, che provocano effetti collaterali che si manifestano come gravi danni alla forma del corpo e morte dei pesci. Sebbene queste carenze possano essere superate con un'ampia formazione degli investigatori, è auspicabile un nuovo metodo di iniezione IP che abbia effetti collaterali minimi. In questo caso, viene riportato un metodo di iniezione IP unico in grado di gestire composti tossici. Una funzione cardiaca costantemente ridotta può risultare senza incorrere in una morte significativa dei pesci. La tecnica può essere facilmente padroneggiata dai ricercatori che hanno un'esperienza minima con il pesce zebra adulto.

Introduzione

Il pesce zebra (Danio rerio) ha guadagnato attenzione come modello sperimentale per lo studio delle malattie umane perché questo animale comprende un'elevata omologia genica e di organi con l'uomo, fecondazione esterna, facilità di manipolazione genetica e trasparenza del corpo nella prima maturità, che facilita una miriade di applicazioni di imaging1. A differenza del semplice processo di somministrazione di farmaci direttamente in acqua per embrioni e larve di pesce zebra, la somministrazione di farmaci a pesci zebra adulti presenta un'impresa più complessa e impegnativa2.

Nei pesci....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Protocollo

Tutte le procedure condotte sono state approvate dal Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali della Mayo Clinic, aderendo agli standard delineati nella "Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio" (National Academies Press, 2011). Tutti i pesci zebra nello studio appartengono al ceppo Wild Indian Karyotype (WIK). I dettagli dei reagenti e delle attrezzature utilizzate per lo studio sono elencati nella tabella dei materiali.

1. Preparazione e conservazione della soluzione madre di doxorubicina

  1. Ottenere il brodo di doxorubicina da una fonte commerciale.
    NOTA: La doxoru....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Risultati

In precedenza, sono state impiegate due metodiche intraperitoneali (IP) per la somministrazione di doxorubicina in zebrafish adulti 4,10. Nel metodo I, noto anche come metodo di iniezione IP classico come descritto da Kinkel et al.4, l'ago è stato inserito con un angolo di 45° rispetto alla linea mediana tra le pinne pelviche con l'addome rivolto verso l'alto. Nel metodo II, o metodo di iniezione IP alternativo come descritto da Ma et

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Discussione

A differenza dei due metodi di iniezione IP esistenti 4,10, il nuovo metodo di iniezione IP è caratterizzato dalle seguenti caratteristiche distintive. In primo luogo, viene utilizzato un angolo di penetrazione dell'ago unico (vicino allo zero); in secondo luogo, l'ago penetra nel pesce attraverso una posizione unica, cioè un foro naturale sulla superficie ventrale di un pesce, che faciliterebbe l'iniezione; e infine, il movimento dell'ago è da anteriore.......

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Ringraziamenti

Questo studio è stato sostenuto dal NIH (HL107304 e HL081753) e dalla Mayo Foundation (Center for Biomedical Discovery and Cardiovascular Research Center) a XX. JL è finanziato dai fondi di ricerca fondamentale per le università centrali della Central South University, n. 56021702. Un ringraziamento speciale a Beninio Gore e Quentin Stevens per aver gestito l'impianto di zebrafish.

....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
10 μ L NanoFil-siringaWorld Precision Instruments, IncStrumento di iniezioneNANOFIL
34 G agoWorld Precision Instruments, IncNI34BV-2strumento di iniezione
60 mm Piastra di Petrifisher scientific/fisherbrandFB0875713Aposizionare la spugna 
Microscopio da dissezioneNikonSMZ800Injceting il
Dox Doxorubicina cloridratoSigmaD1515-10MGper la creazione di modello DIC 
EcocardiografiaVISUAL SONICSVevo 3100misurazione della funzione cardiaca
Schiuma SpugnaJaece IndustriesL800-Dposizionamento del pesce
Hank's balanced salt solution (HBBS)Thermo Fisher14025076Vehicle for Dox
Microcentrifuge southernlabwareMyFuge/C1012raccoglie la soluzione Dox 
Bilancia di precisione TorbalAD60Bilancia digitale
TricainaArgentMS-222Anestetizzante pesce
TuboEppendorf1,5 mLdi stoccaggio 
software vevo LAB FUJIFILM VISUAL SONICS 5.6.0Quantificazione del cuore
farmaco

Riferimenti

  1. Tavares, B., Lopes, S. S. The importance of Zebrafish in biomedical research. Acta Medica Portuguesa. 26 (5), 583-592 (2013).
  2. Dang, M., Henderson, R. E., Garraway, L. A., Zon, L. I. Long-term drug administration in the adult zebrafish using oral gava....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Ristampe e permessi

Esplora altri articoli

Modelli di malattie nel pesce zebracardiotossicità da doxorubicinafunzione cardiacapenetrazione con agomanipolazione di composti tossicimodello vertebratoprocedura di anestesia