Iniezione intracamerale nei ratti con basso rischio di effetti avversi

Sommario

Questo protocollo descrive una tecnica per l'iniezione intracamerale nei ratti utilizzando un'incisione corneale centrale e un lungo tunnel nella camera anteriore. Questo metodo di iniezione riduce al minimo il rischio di indurre danni involontari ai tessuti, migliorando così la precisione e la riproducibilità.

Abstract

L'iniezione intracamerale è una routine di somministrazione standard in oftalmologia. L'applicazione dell'iniezione intracamerale nei roditori per la ricerca è impegnativa a causa delle dimensioni e dell'anatomia limitanti dell'occhio, tra cui il piccolo volume dell'umor acqueo, la curvatura della lente e lo spessore della lente. Il potenziale danno durante le iniezioni intracamerali introduce effetti avversi e variabilità sperimentale. Questo protocollo descrive una procedura per l'iniezione intracamerale nei ratti, che consente precisione e riproducibilità.

I ratti Sprague-Dawley sono stati utilizzati come modelli sperimentali. Poiché la posizione della lente nei ratti sporge nella camera anteriore, l'iniezione dalla periferia, come fatto negli esseri umani, è sfavorevole. Pertanto, viene creata un'incisione nella regione corneale centrale utilizzando una lama a spillo da 31 gauge 0,8 mm per formare un tunnel autosigillante nella camera anteriore. Un'incisione ad angolo vicino al piano permette di creare un lungo tunnel, che riduce al minimo la perdita di umore acqueo e la superficialità della camera anteriore. Un nanoago calibro 34 viene inserito nel tunnel per l'iniezione. Ciò consente la penetrazione con una resistenza all'attrito minima ed evita di toccare l'obiettivo. L'iniezione di tripano-blu consente di visualizzare al microscopio a fessura la presenza del colorante nella camera anteriore ed escludere perdite. La biodisponibilità dello strato endoteliale corneale è dimostrata dall'iniezione del colorante di Hoechst, che ha colorato i nuclei delle cellule endoteliali corneali dopo l'iniezione.

In conclusione, questo protocollo implementa una procedura per un'accurata iniezione intracamerale nei ratti. Questa procedura può essere utilizzata per la somministrazione intracamerale di vari farmaci e composti in modelli sperimentali di ratto, aumentando l'efficienza e la riproducibilità della ricerca oftalmica.

Introduzione

La biodisponibilità dei composti somministrati per via topica sulla superficie dell'occhio è notevolmente limitata, in genere <5%¹. I composti somministrati sotto forma di collirio vengono eliminati principalmente attraverso il drenaggio, la lacrimazione indotta, il ricambio del liquido lacrimale e l'assorbimento congiuntivale. Inoltre, la permeazione dei composti attraverso la superficie oculare è fortemente limitata dalla barriera cornea-congiuntiva ^1,2,3. La cornea è composta da tre strati principali: l'epitelio più esterno, lo stroma intermedio e l....

Protocollo

Gli esperimenti nel protocollo sono stati approvati dal Comitato Nazionale per i Permessi - per la scienza animale e sono conformi alla Dichiarazione ARVO sull'uso degli animali nella ricerca oftalmica e visiva. Per il presente studio sono state utilizzate femmine di ratti Sprague-Dawley, di età compresa tra 8 e 10 settimane, che sono state esposte a cicli luce-buio di 12/12 ore. Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali).

1. Preparazione degli animali

1. Preparare una miscela anestetica di ketamina (80 mg/kg di peso corporeo in 0,8 ml) e xilazina (4 mg/kg d....

Risultati

Ai ratti Sprague Dawley sono stati iniettati intracameralmente 5 μL di blu di tripano secondo il protocollo sopra descritto. L'esame con lampada a fessura subito dopo l'iniezione ha dimostrato che la camera era colorata con blu tripano, indicando che il materiale iniettato ha raggiunto la camera anteriore (Figura 3). Inoltre, la profondità della camera anteriore era intatta, suggerendo che l'iniezione non ha causato perdite di umore acqueo e superficialità della camera.

Discussione

I modelli di ricerca preclinica dovrebbero fornire un ambiente controllato e riproducibile per garantire l'affidabilità e l'applicabilità dei risultati. Nella ricerca oftalmologica, i modelli di iniezione oculare sono comunemente utilizzati in diversi aspetti della ricerca che vanno dalla creazione di modelli di malattia, alla sperimentazione di nuovi trattamenti e alla valutazione delle reazioni tissutali e dei potenziali effetti avversi.

Le iniezioni intraca.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Rosso di alizarina	Alpha Aesar	042040.5
Buprenorfina	Richter pharma	102047
desametasone 0,1%	Fisher Pharmaceutical	393102-0413
Hamilton siringa in vetro 10 μ L	Hamilton Co.
Hoeschst	Merck	B2261
Ketamina	Bremer pharma GMBH (medimarket)	17889
Ofloxacina 0,3% collirio	Allergan	E92170
Ossibuprocaina cloridrato 0,4%	Fisher Pharmaceutical	N/A
Pentobarbital sodico 200 mg/mL	CTS	N/A
Microscopio a fessura	Haag-streit bern	b-90019115
Sprague-Dawley Rats	Envigo	N/A
Lama a spillo 31 G 0,8 mm	Tecfen medical (skymed)	QKN2808
Microscopio operatorio	Zeiss	OPMI-6 CFC
Trypan Blue	Sartorius	03-102-1B
Xilazina	Eurovet Animal Health

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