Questo manoscritto presenta un protocollo per la rimozione chirurgica dei neuroni simpatici lombari postgangliari da un topo. Questa procedura faciliterà una moltitudine di studi volti a indagare il ruolo dell'innervazione simpatica nei bersagli tissutali distali.
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Articolo metodologico
Simpatectomia lombare chirurgica nei topi
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le lesioni dei nervi periferici sono comuni e il pieno recupero funzionale dopo la lesione si ottiene solo nel 10% dei pazienti. Il sistema nervoso simpatico svolge molti ruoli critici nel mantenimento dell'omeostasi corporea, ma è stato raramente studiato nel contesto della lesione dei nervi periferici. L'estensione delle funzioni neuronali simpatiche postgangliari nei bersagli distali nella periferia non è attualmente chiara. Per esplorare meglio il ruolo dell'innervazione simpatica di bersagli periferici, un modello chirurgico "knock-out" fornisce un approccio alternativo. Sebbene ciò possa essere ottenuto chimicamente, la distruzione chimica dei neuroni simpatici postgangliari può essere aspecifica e dose-dipendente. L'uso di una simpatectomia lombare chirurgica nei topi, una volta ritenuta "praticamente non praticabile" nei piccoli animali, consente di mirare in modo specifico ai neuroni simpatici postgangliari che innervano gli arti posteriori. Questo manoscritto descrive come rimuovere chirurgicamente i gangli simpatici lombari L2-L5 da un topo come intervento chirurgico di sopravvivenza, che riduce in modo affidabile la risposta al sudore della zampa posteriore e il numero di assoni simpatici nel nervo sciatico.
Introduzione
Le lesioni dei nervi periferici (PNI) possono portare a deficit motori, sensoriali e simpatici in bersagli tissutali distali che raramente recuperano completamente funzionalmente1. La ricerca sul PNI si è spesso concentrata sulla rigenerazione motoria e sensoriale; Tuttavia, quasi un quarto del nervo sciatico di ratto è costituito da assoni simpatici non mielinizzati2. Il ruolo dell'innervazione simpatica nei tessuti periferici, tuttavia, non è completamente compreso3. Il sistema nervoso simpatico svolge un ruolo importante nel mantenimento dell'omeostasi corporea, partecipando alla regolazione im....
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Protocollo
Tutti gli esperimenti sono stati approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) della Emory University (con il numero di protocollo IACUC PROTO201700371). In questo studio sono stati utilizzati quattro topi femmina adulta di tipo selvatico C57BL/6J, di età pari o superiore a 14 settimane e di peso compreso tra 16 e 21 g. I dettagli dei reagenti e delle attrezzature utilizzate qui sono elencati nella Tabella dei materiali.
1. Preparazione prechirurgica
- Autoclavare gli strumenti chirurgici: 1 paio di forbici affilate, 2 pinzette a punta fine, 1 cacciatore per aghi.
- Risc....
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Risultati
Questo protocollo descrive la rimozione chirurgica di neuroni simpatici lombari postgangliari da un topo. Due topi hanno ricevuto simpatectomia lombare e due topi sono serviti come controlli. Per ottenere una simpatectomia lombare chirurgica di successo, è necessario ottenere un'adeguata visualizzazione almeno dei gangli simpatici lombari bilaterali L2 e L3, come mostrato nella Figura 1. La rimozione dei gangli L4 e L5 consentirebbe di ottenere la completa denervazione simpatica della parte .......
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Discussione
I gangli simpatici lombari sono strutture molto piccole situate dietro molti organi addominali critici e grandi vasi. Pertanto, questa procedura richiede una precisione e un'accuratezza significative. Gran parte della difficoltà risiede nell'identificare i gangli simpatici intraoperatoriamente. Si suggerisce che lo studente sia in grado di identificare i gangli in un cadavere di topo prima di tentare questa procedura in un topo vivo. La risoluzione dei problemi sarà spesso necessaria quando si identificano i gangli simpa.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dal NIH National Institute of Neurological Disorders and Stroke con il numero di premio K01NS124912 e in parte da una sovvenzione per lo sviluppo dell'Emory Specialized Center of Research Excellence in Sex Differences U54AG062334 finanziato dal NIH e dal Medical Scientist Training Program della Emory University School of Medicine. Grazie a David Kim, post-diploma di maturità, per il sezionamento dei nervi sciatici e a HaoMin SiMa, specialista di ricerca, per aver stampato in 3D un supporto per telefono per il nostro stereomicroscopio che ha permesso le riprese del video.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sutura assorbibile 5-0 | CP Medical | 421A | |
| Sutura in nylon 5-0 | Med-Vet International | MV-661 | |
| 70% etanolo | Sigma-Aldrich | E7023-4L | |
| Camera di induzione per anestesia | Kent Scientific VetFlo | VetFlo-0530XS | |
| Vaporizzatore per anestesia | Kent Scientific VetFlo | 13-005-202 | |
| Betadine | HealthyPets | BET16OZ | |
| topi C57BL/6J | Jackson Laboratory | #000664 | |
| Pollo anti-neurofilamento-pesante | Abcam | ab72996 | |
| Criostato | Leica | CM1850 | |
| Software di analisi dati | Prisma | ||
| Pinzette a punta fine | World Precision Instruments | 500233 | |
| Microscopio fluorescente | Nikon | Ti-E | |
| Capra anti-pollo 488 | Invitrogen | A32931 | |
| Capra anti-coniglio 647 | Invitrogen | A21245 | |
| Termoforo | Braintree Scientific | 39DP | |
| Software di analisi delle immagini | Fiji | ||
| Imaging | Software Nikon | NIS-Elements | |
| Isoflurano | Med-Vet International | RXISO-250 | |
| Meloxicam | Med-Vet International | RXMELOXIDYL32 | |
| Portaaghi | Roboz Surgical Store | RS-7894 | |
| Siero di capra normale | Abcam | ab7481 | |
| Unguento oftalmico | Refresh Refresh | P.M. | |
| Phox2bCre:tdTomato topi mutanti | Jackson Laboratory | #016223, #007914 | |
| Pilocarpina cloridrato | Sigma-Aldrich | P6503 | |
| Coniglio anti-tirosina idrossilasi | Abcam | ab112 | |
| Piccole forbici diritte | Fine Science Tools | 14084-09 | |
| Tamponi di cotone sterili 2x2 | Dynarex | 3252 | |
| Applicatori sterili con punta in cotone | Dynarex | 4301 | |
| Telo sterile | Med-Vet International | DR4042 | |
| Soluzione salina sterile | Med-Vet International | 1070988-BX | |
| ThCre:mTmG topi mutanti | Mutant Mouse Resource and Research Centers | ceppo #017262-UCD | Jackson Laboratory, ceppo #007576 |
| ThCre:tdTomato mutant topi | European Mouse Mutant Archive | ceppo #00254 | Jackson Laboratory, ceppo #007914 |
Riferimenti
- Scholz, T., et al. Peripheral nerve injuries: An international survey of current treatments and future perspectives. J Reconstr Microsurg. 25 (06), 339-344 (2009).
- Schmalbruch, H. Fiber composition of the rat sciatic nerve. Anat Rec. 215
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Ristampe e permessi
