Questo video e protocollo dimostrano come impiantare una copertura in vetro finestra cranica nei roditori. Queste preparazioni possono essere utilizzate per cronica in vivo a due fotoni di imaging della neocorteccia su scale temporali di mesi. Può essere utilizzato anche per altri tipi di imaging, tra cui l'imaging ottico del segnale intrinseco.
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Articolo metodologico
Un Chirurgia Procedura Craniotomia per l'imaging cerebrale cronica
In questo articolo
Sommario
Abstract
Tecniche di imaging stanno diventando sempre più importante nella funzione del cervello di studio. Tra questi, la microscopia a due fotoni scansione laser è emerso come un metodo estremamente utile, perché permette lo studio del cervello vive intatto. Con i preparativi del caso, questa tecnica permette l'osservazione della stessa area corticale cronica, da minuti a mesi. In questo video ci mostra una preparazione cronica imaging in vivo del cervello usando la microscopia a due fotoni. Questa tecnica è stata inizialmente introdotta da Dott. Karel Svoboda, che ora è un Howard Hughes Medical Institute presso Janelia Farm. Preparati come quella mostrata qui può essere utilizzata per l'imaging della struttura neocorticale (ad esempio, dinamiche dendritica e assonale), per registrare l'attività neuronale con calcio-sensibili coloranti, alle dinamiche del flusso sanguigno corticale immagine, o per intrinseca studi di imaging ottico. L'imaging profondo della neocorteccia è possibile con interventi chirurgici ottimale finestra cranica. Che operano nelle condizioni più sterile possibile per evitare infezioni, insieme con estrema cura per non danneggiare la dura madre durante l'intervento, si tradurrà in successo e di lunga durata con tetto in vetro finestre craniche.
Protocollo
- Anestetizzare topi con isoflurano (4% per l'induzione, 1,5-2% per la chirurgia) utilizzando IACUC procedure approvate. E 'importante che la coda e / o pizzichi punta sono utilizzati al fine di assicurare l'animale è completamente sedato.
- Utilizzando un trimmer roditore, radere i capelli dalla parte posteriore del collo fino agli occhi.
- Posizionare il mouse in una cornice stereotassica, nel corso di un intervento chirurgico d'acqua a ricircolo di coperta. Fissare saldamente la testa con le barre orecchio.
- Applicare una pomata oculare, al fine di prevenire gli occhi dell'animale si secchi.
- Somministrare, per via sottocutanea,....
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Discussione
Come abbiamo mostrato nel video e nelle figure supplementari, la preparazione window cranica, combinato con l'uso della microscopia a due fotoni, è uno strumento molto potente per studiare in vivo la struttura e la funzione della neocorteccia. La tecnica richiede un addestramento rigoroso per acquisire familiarità con l'anatomia e le relative procedure chirurgiche e sottile abilità che richiede questa preparazione. Solo interventi chirurgici incontaminate possono essere utilizzati per l'imaging cronica. Se la durata è manipolato.......
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Materiali
Barre di titanio sono fatti su misura
Riferimenti
- Svoboda, K., Denk, W., Kleinfeld, D., Tank, D. W. In vivo dendritic calcium dynamics in neocortical pyramidal neurons. Nature. 85, 161-165 (1997).
- Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing....
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Ristampe e permessi
